張亞嬌 于福來 元超 陳曉鷺 謝小麗 王 凱 黃梅 陳振夏 官玲亮 陳松筆
關(guān)鍵詞:羅勒;植物學(xué)性狀;揮發(fā)性成分;主成分分析;聚類分析
中圖分類號(hào):Q949.95 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
羅勒(Ocimum basilicum)為唇形科羅勒屬植物,全世界約有65~150 種[1-2],廣泛分布于熱帶與亞熱帶地區(qū)。羅勒不僅作為一種天然的香辛料,還可作為傳統(tǒng)藥物具有疏風(fēng)解表、化濕和中、強(qiáng)心安神、行氣活血、解毒消腫、散瘀止痛等功效[3],享有“藥草女王”之稱[4]。由于羅勒屬植物易發(fā)生種間雜交和多倍體化,使羅勒屬的分類學(xué)極其復(fù)雜,常出現(xiàn)同名異物或同物異名的現(xiàn)象,造成羅勒資源無法得到有效利用,使羅勒種質(zhì)和新品種選育較困難。因此,對羅勒種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析,將對羅勒種質(zhì)資源的挖掘與創(chuàng)新以及提高育種效率具有重要意義。
目前,關(guān)于羅勒屬植物的分類大多數(shù)是基于葉、花及顏色等形態(tài)特征進(jìn)行分類,而形態(tài)特征的表達(dá)往往受植株發(fā)育及環(huán)境條件的影響,PATEL 等[5]對印度南北2 種不同農(nóng)業(yè)氣候條件下的不同羅勒品種的表型性狀和產(chǎn)量進(jìn)行比較試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)不同羅勒品種表型性狀以及精油產(chǎn)量差異顯著,證實(shí)了羅勒屬具有基因型響應(yīng)環(huán)境變化而改變性狀表達(dá)的能力。為了便于分類,LAWRENCE[6]以及GRAYER 等[7]提出了一種基于揮發(fā)油的標(biāo)準(zhǔn)化描述系統(tǒng),根據(jù)占主導(dǎo)地位的揮發(fā)性芳香化合物或含量大于20%的組分,對羅勒進(jìn)行了“化學(xué)型”分類。TANGPAO 等[8]采用水蒸氣蒸餾法提取泰國5 種常見羅勒精油,通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)得出其主要成分為芳樟醇、丁香酚和甲基丁香酚,并將其氣味特征分為柑橘類和香料類。TELCI 等[9]同樣采用以上方法和技術(shù)對土耳其18 個(gè)羅勒品種進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)其主要成分為芳樟醇、肉桂酸甲酯、甲基丁香酚、檸檬醛、甲基胡椒酚。宋佳昱等[10]從我國綠羅勒、萵苣羅勒和大葉羅勒的精油中分別鑒定出40、26、36 種成分,其中綠羅勒和大葉羅勒的主要成分為芳樟醇(68.07%、66.93%),萵苣羅勒的主要成分為桉樹腦(56.29%)。以上研究表明羅勒的揮發(fā)性成分在不同基因資源間存在顯著差異,同時(shí)也有部分受到環(huán)境影響。目前對于羅勒種質(zhì)資源遺傳多樣性分析大多是針對單一表型性狀或是揮發(fā)性成分進(jìn)行單獨(dú)分析,鮮有將二者結(jié)合起來的研究報(bào)道,這導(dǎo)致了資源評(píng)價(jià)及鑒定的不確定性。
本研究在對收集的15 份羅勒種質(zhì)資源進(jìn)行植物學(xué)性狀考察的基礎(chǔ)上,通過GC-MS 技術(shù)對其葉片的揮發(fā)性成分進(jìn)行檢測,同時(shí)結(jié)合相對氣味活度值(ROAV)分析并確定不同羅勒種質(zhì)的關(guān)鍵特征揮發(fā)性物質(zhì),即“化學(xué)型”,以期從外觀性狀和理化特征的層面對羅勒資源的遺傳多樣性進(jìn)行分析,為羅勒種質(zhì)資源評(píng)價(jià)體系的建立奠定基礎(chǔ),也為羅勒屬的分類鑒別及特異種質(zhì)選育提供參考。
1 材料與方法
1.1 材料
供試種質(zhì)栽培于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所南藥圃,種質(zhì)信息見表1。
主要儀器及試劑:電子游標(biāo)卡尺、鋼尺、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫科技有限公司)、HP-5MS 色譜柱、超聲波清洗儀、分析天平、研缽、離心機(jī),無水硫酸鈉、正己烷。
1.2 方法
1.2.1 羅勒植物學(xué)性狀調(diào)查 于2022 年6 月晴天上午10:00—12:00 選取同時(shí)播種、水肥管理?xiàng)l件一致、無病蟲害的15 份羅勒種質(zhì),每份種質(zhì)選取3 株,觀測并記錄其地上部主要性狀(包括株高、株幅、分枝數(shù)、葉長、葉寬、莖粗、葉片形狀、葉脈顏色及葉片平整度)。葉片均選擇長勢良好、無病蟲害的成熟葉片進(jìn)行采集,采后立即放入冰盒中,備用。
1.2.2 樣品預(yù)處理 將采集的新鮮葉片用蒸餾水清洗并擦拭干凈,稱取1.00 g 葉片剪碎,冰浴充分研磨,轉(zhuǎn)入50 mL 離心管中,準(zhǔn)確加入25 mL正己烷,超聲30 min(50 ℃, 70 w),并加入適量無水硫酸鈉過夜以除去水分,10 000 r/min 離心5 min,吸取1.5 mL 上清液,過濾轉(zhuǎn)移至色譜瓶中用于GC-MS 分析。
1.2.3 GC-MS 分析 色譜條件:色譜柱HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),載氣為高純氦氣,載氣流速為1.0 mL/min,進(jìn)樣量為1 μL,進(jìn)樣口溫度為220 ℃,進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣。升溫程序:以60 ℃為起始溫度,保持5 min,6 ℃/min 升至240 ℃,保持5 min。質(zhì)譜條件:EI 源,溶劑延遲5 min,離子源溫度為230 ℃,掃描范圍45~500 amu。
1.2.4 ROAV 值計(jì)算 參照劉登勇等[11]的方法,結(jié)合香氣閾值,使用相對氣味活度值(ROVA)確定羅勒的關(guān)鍵香氣化合物。ROAV 值計(jì)算公式為: ROAVi=[(Ci/Cmax)×(Tmax/Ti)]×100 。式中,ROAVi 為羅勒各揮發(fā)性化合物的相對氣味活度值;Ci 為羅勒各揮發(fā)性化合物的相對百分含量;Cmax 為羅勒整體香氣貢獻(xiàn)最大揮發(fā)性化合物的相對百分含量;Ti 為各揮發(fā)性成分對應(yīng)的香氣閾值;Tmax為羅勒總體香氣貢獻(xiàn)最大對應(yīng)的香氣閾值。所有化合物的ROAV≤100,其中,1≤ROAV≤100的化合物為關(guān)鍵香氣化合物,0.1≤ROAV<1 為重要修飾關(guān)鍵香氣化合物。
1.3 數(shù)據(jù)處理
采用SPSS 21.0 和Excel 2010 軟件對羅勒植物學(xué)性狀進(jìn)行整理及單因素方差分析(ANOVA)。將得到的質(zhì)譜圖通過NIST 數(shù)據(jù)庫比對確定化合物(匹配度≥80%),按照氣相色譜峰面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對含量,采用Origin 21 和SPSS 21.0 軟件進(jìn)行主成分分析及聚類分析[12-13]。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同羅勒種質(zhì)植物學(xué)性狀分析
形態(tài)學(xué)研究是利用物種表型特征作為研究生物遺傳多樣性的方法之一,具有操作簡單、觀測直接等特點(diǎn)[14]。從表2 可以看出,不同羅勒種質(zhì)的株高、株幅、葉長、葉寬及莖粗差異較大,15份羅勒種質(zhì)的株高分布范圍為(30.2±1.79)~(56.2±7.19)cm。其中,肉桂羅勒和大葉羅勒顯著高于九層塔羅勒、檸檬羅勒、托斯卡納羅勒等種質(zhì)。株幅范圍在(11.4±1.34)~(32.2±2.28)cm 之間,紫黑蛋白石羅勒和茴香羅勒顯著大于熱那亞羅勒、甜羅勒、泰國羅勒等種質(zhì)。不同羅勒種質(zhì)葉片的長、寬差異較大,葉長范圍為(2.1±0.26)~(11.7±1.51)cm,葉寬在(1.4±0.23)~(10.2±2.18)cm 之間,其中,托斯卡納羅勒的葉長和葉寬均顯著高于其他種質(zhì)。莖粗范圍在(3.2±0.27)~(6.3±0.25)mm 之間,紫黑蛋白石羅勒的莖粗值最大。不同羅勒種質(zhì)的分枝數(shù)差異較小,僅甜羅勒和紅魯賓羅勒的分枝數(shù)顯著大于冥王星羅勒和檸檬羅勒。
2.2 不同羅勒種質(zhì)葉片的揮發(fā)性成分分析
通過GC-MS 聯(lián)用技術(shù)對15 份羅勒種質(zhì)的揮發(fā)性成分進(jìn)行檢測與分析,結(jié)果顯示:15 份羅勒種質(zhì)共檢測出104 種化合物(圖1),采用峰面積歸一化法計(jì)算各揮發(fā)性成分的相對含量(表3,表中僅體現(xiàn)含量在2.00%以上的化合物),發(fā)現(xiàn)不同羅勒種質(zhì)葉片的揮發(fā)性成分及含量存在一定差異。就成分?jǐn)?shù)量而言,大葉羅勒和熱那亞羅勒的化合物數(shù)量最多,分別鑒定出36 種和35 種;而紅魯賓羅勒和紫黑蛋白石羅勒的化合物數(shù)量最少,分別鑒定出13 種和14 種。由此可見不同羅勒種質(zhì)的化合物數(shù)量差異較大。
15 份羅勒種質(zhì)的揮發(fā)性成分中含有烷烴類37 種,萜烯類物質(zhì)32 種,此外還包括酯類8 種,酚類5 種,醇類4 種,醛類3 種,醚類1 種,其他類物質(zhì)14 種,相對含量占總揮發(fā)性成分的79.29%~96.39%。所有材料中共有揮發(fā)性成分有2種,分別為2,4-二叔丁基酚和正十七烷,相對含量分別為0.72%~8.26%、0.44%~5.11%。由圖2可知,15 份羅勒種質(zhì)的不同類型化合物的相對含量存在差異,其中酚類化合物含量比較高的羅勒種質(zhì)有九層塔羅勒、大葉羅勒、熱那亞羅勒和紅魯賓羅勒,相對含量在43.97%~61.16%之間;醚類化合物含量較高的種質(zhì)有甜羅勒、暹羅皇后羅勒、泰國羅勒和茴香羅勒,相對含量在51.55%~87.95%之間。萜烯類化合物含量較高的種質(zhì)是托斯卡納羅勒(39.87%)和紫夜羅勒(33.69%),醛類化合物含量較高的種質(zhì)是檸檬羅勒(59.02%)和丁香羅勒(60.22%),紫黑蛋白石羅勒的醇類化合物含量(37.73%)最高,肉桂羅勒的酯類化合物含量(77.97%)最高,冥王星羅勒的烷烴類化合物含量(33.14%)最高。雖然萜烯類和烷烴類化合物種類數(shù)量多,但在羅勒種質(zhì)中的相對含量不一定最高。
不同羅勒種質(zhì)葉片的主要揮發(fā)性成分也存在一定差異。15 份羅勒種質(zhì)材料中,九層塔羅勒、熱那亞羅勒、紅魯賓羅勒和紫黑蛋白石羅勒的丁香酚含量較高,相對含量分別為58.91%、44.80%、33.68%、28.35%。暹羅皇后羅勒、茴香羅勒、泰國羅勒、甜羅勒和托斯卡納羅勒中的4-烯丙基苯甲醚含量較高,相對含量分別為87.16%、72.87%、71.34%、48.81%、28.24%。檸檬羅勒和丁香羅勒的檸檬醛含量較高,分別為31.05%和29.67%。肉桂羅勒中的肉桂酸甲酯含量最高,為68.19%。大葉羅勒中的2-甲氧基-5-丙-2-烯基苯酚含量最高,為38.11%。紫黑蛋白石羅勒中的芳樟醇含量最高,為30.11%。冥王星羅勒的甲基丁香酚含量最高,為18.15%(表3)。
2.3 不同羅勒種質(zhì)的關(guān)鍵香氣化合物分析
為進(jìn)一步確定不同羅勒種質(zhì)的特征香氣化合物,通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)參考各香氣化合物閾值,并結(jié)合表3 中共有組分的相對含量計(jì)算不同羅勒種質(zhì)中的ROAV 值。
由表4 可知,部分羅勒資源表現(xiàn)出相似的氣味,如九層塔羅勒、熱那亞羅勒、甜羅勒以及紫黑蛋白石羅勒的主體香氣物質(zhì)均為丁香酚、芳樟醇和桉葉油醇,賦予其花木香、甜香及樟腦氣味,其中β-石竹烯和4-烯丙基苯甲醚對甜羅勒香氣具有重要修飾作用。此外,紅魯賓羅勒和紫夜羅勒的主體香氣物質(zhì)為丁香酚和芳樟醇,賦予其花木香和甜香等氣味,其中羅勒烯為紫夜羅勒的重要香氣修飾物質(zhì);順式-檸檬醛作為丁香羅勒和檸檬羅勒的主體香氣物質(zhì),賦予其檸檬氣味,且檸檬醛對其香氣均有重要修飾作用。
也有一些羅勒種質(zhì)具有特殊的氣味,如芳樟醇和肉桂酸甲酯為肉桂羅勒中的主體香氣物質(zhì);大葉羅勒的主體香氣物質(zhì)為芳樟醇、桉葉油醇、α-芹子烯和冰片,因此具有花木香、樟腦及丁香氣味,β-石竹烯、2,4-二叔丁基酚等則對其香氣具有重要修飾作用。此外,冥王星羅勒中以丁香酚、甲基丁香酚、萘以及桉葉油醇為主要香氣物質(zhì),具有花木香、甜香及樟腦等氣味,α-律草烯為主要香氣修飾物質(zhì);暹羅皇后羅勒中以β-羅勒烯、甲基丁香酚、4-烯丙基苯甲醚等為主體香氣物質(zhì),具有柑橘香、花木香以及青草香等氣味,樟腦為重要香氣修飾物質(zhì);順式-檸檬醛、芳樟醇以及α-芹子烯作為茴香羅勒中的主體香氣物質(zhì),具有檸檬香、花木香及丁香等氣味。
2.4 不同羅勒種質(zhì)揮發(fā)性物質(zhì)主成分分析
利用Origin 2021 軟件對15 份羅勒種質(zhì)揮發(fā)性成分進(jìn)行主成分分析,PC1、PC2、PC3 的方差貢獻(xiàn)率依次為52.83%、18.61%、13.60%,累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)85.04%(表5),說明這3 個(gè)主成分可以解釋揮發(fā)性成分的大部分信息,因此可用于鑒別不同羅勒種質(zhì)揮發(fā)性成分的差異性。由圖3 可知,15 份羅勒種質(zhì)被大致劃分為5 類,其中九層塔羅勒、熱那亞羅勒、紫黑蛋白石羅勒、紅魯賓羅勒以及紫夜羅勒劃分為一類,并以丁香酚(B42)及芳樟醇(B34)為主要成分。第二類為甜羅勒、泰國羅勒、茴香羅勒及暹羅皇后羅勒,以4-烯丙基苯甲醚(B53)為主要成分。第三類為冥王星羅勒、大葉羅勒及托斯卡納羅勒,以3,7,11-三甲基-1,3,6,10-十二碳-四烯(B23)、2-甲氧基-5-丙-2-烯基苯酚(B41)為主要成分。第四類為丁香羅勒及檸檬羅勒,以檸檬醛(B38)和順式-檸檬醛(B37)為主要成分。第五類為肉桂羅勒,主要成分為肉桂酸甲酯(B45)。結(jié)果表明,不同羅勒種質(zhì)的揮發(fā)性物質(zhì)組成差異顯著。
2.5 不同羅勒種質(zhì)揮發(fā)性成分及表型性狀聚類分析
植物學(xué)性狀和化學(xué)成分的組成一直是研究植物種質(zhì)資源多樣性的主要技術(shù)指標(biāo)。由于羅勒的整體香氣除含量外,還取決于單體成分的香氣閾值,即使含量低的揮發(fā)性物質(zhì),如果香氣閾值較低,也會(huì)對羅勒整體香氣貢獻(xiàn)較大,因此本研究對供試材料檢測到的所有揮發(fā)性成分以及表型性狀進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析(圖4)。其中,基于揮發(fā)性成分的聚類分析表明(圖4A),當(dāng)歐氏距離為20時(shí),可將15 份種質(zhì)分為3 個(gè)大類,第Ⅰ類由泰國羅勒、茴香羅勒、暹羅皇后羅勒及甜羅勒組成,該類以4-烯丙基苯甲醚為主要化合物;肉桂羅勒單獨(dú)聚為第Ⅲ類,該種質(zhì)中肉桂酸甲酯含量最高,而其他羅勒種質(zhì)中均不含該化合物;其余羅勒種質(zhì)全部聚為第Ⅱ大類。當(dāng)距離為10 時(shí),可進(jìn)一步將第Ⅱ大類分為3 個(gè)亞類,其中九層塔羅勒、熱那亞羅勒、紅魯賓羅勒、紫夜羅勒和紫黑蛋白石羅勒聚為Ⅰ亞類,該組種質(zhì)中的芳樟醇和丁香酚含量較高;檸檬羅勒和丁香羅勒聚為Ⅱ亞類該組種質(zhì)中的檸檬醛含量較高;其余3 份種質(zhì)聚為Ⅲ亞類,這組種質(zhì)中的烷烴類含量較高。該結(jié)果與主成分分析結(jié)果基本一致。
植物學(xué)表型性狀聚類分析表明(圖4B),當(dāng)歐氏距離為10 時(shí),15 份羅勒種質(zhì)可分為3 大類,第Ⅰ類為冥王星羅勒,該種質(zhì)葉片小,植株矮小,顯著小于其他羅勒種質(zhì);第Ⅱ類為丁香羅勒、茴香羅勒以及紫黑蛋白石羅勒,該組種質(zhì)的株高、株幅及分枝數(shù)較高,但葉長和葉寬較?。黄溆?1份種質(zhì)聚為第Ⅲ類。當(dāng)距離為5 時(shí),可將第Ⅲ大類進(jìn)一步分為3 個(gè)亞類,泰國羅勒聚為Ⅰ亞類,該種質(zhì)株幅、葉長、葉寬及莖粗均較小;大葉羅勒和肉桂羅勒被聚為Ⅱ亞類,該組種質(zhì)的株高顯著高于其他種質(zhì);其余8 份種質(zhì)被聚為Ⅲ亞類,該組種質(zhì)的植物學(xué)性狀整體介于泰國羅勒、大葉羅勒以及肉桂羅勒之間。結(jié)果表明,不同羅勒資源間存在豐富的遺傳多樣性,可以通過植物學(xué)性狀和活性成分將其進(jìn)行區(qū)分。但由于分類的角度不同,聚類的結(jié)果有所差異,外觀性狀相似的品種,其活性成分也可能會(huì)存在較大差異。因此,通過外觀性狀作為指標(biāo)較難篩選特殊活性成分的羅勒種質(zhì)。
3 討論
羅勒分布范圍廣,應(yīng)用歷史悠久,經(jīng)過幾個(gè)世紀(jì)的人工栽培,由于種間雜交和多倍體育種等引起了遺傳結(jié)構(gòu)的改變,并且隨著特定地區(qū)物候因子的變化,使羅勒在顏色、葉片形狀和大小等表型性狀上的多樣性愈加明顯[16]。本研究通過調(diào)查15 份羅勒種質(zhì)的主要植物學(xué)性狀,發(fā)現(xiàn)不同羅勒種質(zhì)的株高、株幅、葉長、葉寬及莖粗存在顯著差異,這與ERUM 等[17]和PATEL 等[5]的研究結(jié)果一致。本研究中供試材料的葉片形狀大多為卵狀披針形或卵形,顏色有綠色和翠綠色。紅魯賓羅勒、紫黑蛋白石羅勒和紫夜羅勒的葉脈顏色為紫色,極具觀賞價(jià)值。此外,托斯卡納羅勒的葉片表現(xiàn)出明顯的褶皺。由此可以看出,供試羅勒種質(zhì)的植物學(xué)性狀存在明顯的遺傳多樣性,可以通過自交或雜交手段獲得一批藥、食、觀賞為一體的羅勒品系。
羅勒活性物質(zhì)的組成受基因型和環(huán)境共同作用。RODRIGUES 等[18]檢測出巴西甜羅勒的揮發(fā)性成分主要為4-烯丙基苯甲醚(60.96%)和芳樟醇(27.27%),與本研究結(jié)果基本一致,但引種后其含量略有減少,分別為48.81%和11.59%。BEATOVIC 等[19]研究發(fā)現(xiàn),在塞爾維亞種植的暹羅皇后羅勒的主要揮發(fā)性成分為4-烯丙基苯甲醚(83.60%),引種后其主要成分種類未發(fā)生改變,而含量有所增加,達(dá)87.16%,說明甜羅勒和暹羅皇后羅勒的揮發(fā)性活性物質(zhì)的種類和含量主要受基因型控制,環(huán)境對其含量略有影響。同時(shí),研究中也發(fā)現(xiàn)少量羅勒品種的關(guān)鍵成分受環(huán)境影響較大,如丁香羅勒在肯尼亞東部地區(qū)檢測到的主要揮發(fā)性物質(zhì)為丁香酚(68.81%)和甲基丁香酚(13.21%)[20],而本研究中丁香羅勒的主要揮發(fā)性化合物為檸檬醛(29.67%) 和順式-檸檬醛(24.40%)。除此之外,本研究中的暹羅皇后羅勒、茴香羅勒、泰國羅勒中含有的4-烯丙基苯甲醚以及肉桂羅勒含有的肉桂酸甲酯的相對含量均在70%以上,因此可以對這些特異種質(zhì)進(jìn)行差異化育種,為后續(xù)羅勒的特殊應(yīng)用與開發(fā),以及關(guān)鍵單體活性物質(zhì)的提取提供參考。
為體現(xiàn)和描述芳香植物的香氣類型,里奧·范海默特[15]研究發(fā)現(xiàn),香氣成分的含量和閾值是影響人類感知植物香氣的2 個(gè)主要影響因素。目前,通過計(jì)算相對氣味活度值(ROAV)來描述植物的具體香氣表現(xiàn)已在玫瑰[21]、茶葉[22-23]、刺槐[24]等植物中得以較好的應(yīng)用。羅勒被譽(yù)為“香草皇后”,但目前尚無香氣類型分析的研究報(bào)道。本研究通過ROAV 分析發(fā)現(xiàn),大部分羅勒種質(zhì)的主體香氣物質(zhì)均含有芳樟醇,具有一定的花木香及甜香氣味。此外,15 份羅勒種質(zhì)的揮發(fā)性成分含量較高的化合物其閾值也較低,對羅勒的香氣貢獻(xiàn)較大,總體鑒定出8 種香氣類型,如丁香酚/芳樟醇型、丁香酚/芳樟醇/桉葉油醇型以及順式-檸檬醛型,為羅勒特異種質(zhì)在化妝品、食品以及醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用提供參考。
基于植物性狀和揮發(fā)性成分進(jìn)行聚類分析表明,2 種方式的聚類結(jié)果有差異。通過植物學(xué)性狀聚類把丁香羅勒、茴香羅勒以及紫黑蛋白石羅勒聚為一類,這些種質(zhì)具有相似的外觀性狀,如株高、株幅以及分枝數(shù)較大,葉長、葉寬較小;而通過揮發(fā)性成分的聚類卻將外觀性狀相似的羅勒種質(zhì)分別聚在3 個(gè)不同的大類,3 種羅勒的主要揮發(fā)性成分分別為檸檬醛和順式檸檬醛、4-烯丙基苯甲醚、芳樟醇和丁香酚。究其原因,主要是由于羅勒屬植物易于種間或種內(nèi)雜交,外觀性狀與活性成分連鎖不緊密,因此相似的外觀性狀可能存在較大的活性成分差異。但總體來看,不管是基于哪種方法,都可以把15 份種質(zhì)進(jìn)行完全區(qū)分。結(jié)果表明供試羅勒種質(zhì)的遺傳差異較大,存在豐富的遺傳多樣性,可為后期羅勒的雜交育種或聚合育種提供基礎(chǔ)材料與理論依據(jù)。