收稿日期Received：2022-10-20""" 修回日期Accepted：2023-01-11

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（32371905）； 江蘇?。ìF(xiàn)代農(nóng)業(yè)）重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目（BE2021366）。

第一作者：劉景勝（793852110@qq.com）。

*通信作者：戴曉港（xgdai@njfu.edu.cn），高級(jí)實(shí)驗(yàn)師。

引文格式：

劉景勝， 唐鑫偉， 周虎，等. 4種玉蘭的小白菊內(nèi)酯含量變化動(dòng)態(tài)研究. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2024，48（2）：227-233.

LIU J S， TANG X W， ZHOU H， et al. Dynamic content changes of parthenolide from four" Magnolia species. Journal of Nanjing Forestry University （Natural Sciences Edition），2024，48（2）：227-233.

DOI：10.12302/j.issn.1000-2006.202210036.

摘要：【目的】測(cè)定4種玉蘭不同組織中小白菊內(nèi)酯含量，對(duì)其中小白菊內(nèi)酯高含量樹種開展不同生長(zhǎng)期、樹齡和產(chǎn)地的含量測(cè)定，為小白菊內(nèi)酯高含量樹種選育及栽培提供參考?！痉椒ā恳杂裉m（Magnolia denudate）、望春玉蘭（M. delavayi）、山玉蘭（M. biondii）和廣玉蘭（M. grandiflora）為試驗(yàn)材料，采用高效液相色譜法測(cè)定其葉片、花蕾和根皮中的小白菊內(nèi)酯含量，同時(shí)測(cè)定小白菊內(nèi)酯含量較高的望春玉蘭在不同生長(zhǎng)期、不同樹齡和不同產(chǎn)地根皮中的含量?！窘Y(jié)果】望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯含量最高，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)5.10%（干質(zhì)量），在玉蘭根皮中質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為0.72%，而在山玉蘭和廣玉蘭根皮中未檢測(cè)到小白菊內(nèi)脂；4個(gè)樹種葉片中均含有小白菊內(nèi)酯，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.06%～0.59%；但只有望春玉蘭和廣玉蘭的花蕾中含有小白菊內(nèi)酯，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.88%和0.08%。2～4年生樹齡望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.43%、4.07%和4.31%，2年生和3年生、4年生根皮中的含量均呈顯著差異，而3年生和4年生差異不顯著。不同月份采集的望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.51%～6.04%，含量最高的2月與前后兩個(gè)月相比其差異均達(dá)到顯著水平。不同產(chǎn)地望春玉蘭根皮中的小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.22%～5.51%，方差分析表明浙江臨安種源和其余4個(gè)種源間差異顯著。【結(jié)論】4種玉蘭中，望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯含量最高；其3年生樹齡和2月采集根皮中小白菊內(nèi)酯含量較高；建議望春玉蘭根皮收獲小白菊內(nèi)酯的最佳樹齡為3 a、最佳收獲時(shí)間為2月中旬；在以收獲小白菊內(nèi)酯單一化合物為目標(biāo)時(shí)，湖北襄陽、江蘇南京和新沂為適合引種地。

關(guān)鍵詞：木蘭屬；望春玉蘭；小白菊內(nèi)酯；樹齡；產(chǎn)地

中圖分類號(hào)：S789""""""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

文章編號(hào)：1000-2006（2024）02-0227-07

Dynamic content changes of parthenolide from fournbsp; Magnolia species

LIU Jingsheng1， TANG Xinwei1， ZHOU Hu2， CHEN Lei3， DAI Xiaogang1*， YIN Tongming1

（1. State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding， Co-Innovation Center for Sustainable Forestry in Southern China，

Key Laboratory of Tree Genetics and Biotechnology of Ministry of Educational， Key Laboratory of Tree Genetics

and Silvicultural

Sciences of Jiangsu Province， College of Forestry and Grassland， Nanjing Forestry University， Nanjing 210037， China;

2. Bureau of Forestry of Nanzhao County， Nanzhao 473000， China; 3.Xinyi Accendatech Co.， Ltd， Xinyi 221400， China）

Abstract： 【Objective】The contents of parthenolide from different tissues were measured in four species of Magnolia， and contents of parthenolide were also measured at different growth periods， different tree ages and different production areas in tree species with high level of parthenolide， which will provide useful lessons for the breeding programs and for the planting of medicinal plant varieties from Magnoliaceae family.【Method】Taking Magnolia" denudata， M. biondii， M. grandiflora and M. delavayi as materials， the contents of parthenolide were measured by high performance liquid chromatography （HPLC） in leaves， buds and root barks. Root barks from M. biondii at different growth stages， different tree ages and different production areas are measuring for its parthenolide contents. 【Result】Among different tissues from the four species， root barks of M. biondii has the highest contents of parthenolide with an average level of 5.10%， and the contents falls to 0.72% in M. denudata， but parthenolide was not detected in M. grandiflora and M. delavayi root barks. All leaves from the four species contented parthenolide with the trace level between 0.06% and 0.59%. Only the buds of M. biondii and M. grandiflora contains parthenolide with the average level of 0.88% and 0.08% separately. The contents of parthenolide in root barks with two-year， three-year and four-year old stage of M. biondii were 2.43%， 4.07% and 4.31% separately， and the contents of two-year old was significantly different from three-year and four-year old， but no significant difference was detected from three-year and four-year old tree. During the growth period of one year， parthenolide reached the highest level of 6.04% in February， which was significantly different from that in April and December of the previous year. The contents of parthenolide in root barks of M. biondii varied from 3.22% to 5.51% in five different production areas， and the analysis of variance showed that only the tree growing in Lin’an， Zhejiang Province were significantly different from the other four sites. 【Conclusion】The contents of parthenolide were compared in different tissues from four Magnolia species， and found that the root barks of M. biondii contained the highest level of parthenolide among the four species with different tissues. The optimal tree age determined for havesting parthenolide was three and the best harvest time was mid-February based on the comparison of root barks parthenolide contents from different tree ages and different grown stages. When aiming at harvesting a single compound of parthenolide， Nanjing and Xinyi City in Jiangsu Province and Xiangyang in Hubei Province can introduce the tree of M. biondii for parhtenolide extraction from its root bark.

Keywords：Magnolia; Magnolia biondii; parthenolide; tree age; origin

木蘭科植物望春玉蘭（Magnolia biondii）、玉蘭（M. denudata）或武當(dāng)玉蘭（M. sprengeri）的干燥花蕾入藥統(tǒng)稱為辛夷，用于治療風(fēng)寒感冒、鼻竇炎、牙痛、頭痛等癥已有兩千多年的歷史?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，辛夷中具有抗炎、免疫、抗菌、抗病毒等的主要成分為揮發(fā)油和木蘭脂素類物質(zhì)。因此對(duì)辛夷藥用的研究主要集中于花蕾中揮發(fā)油和木蘭脂素類的含量及主要成分分析。近年來，張泉等從山玉蘭（M. delavayi）和玉蘭等根皮中提取獲得高純度的小白菊內(nèi)酯，并經(jīng)過化學(xué)改造開發(fā)了具有原創(chuàng)性的抗腦膠質(zhì)瘤候選新藥ACT001，治療腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤效果顯著。

小白菊內(nèi)酯（parthenolide，PTL）最早是從短舌匹菊（Tanacetum parthenium）的花中提取的一種倍半萜內(nèi)酯，存在于菊科和木蘭科植物中，分子式為C15H20O3，相對(duì)分子質(zhì)量為248.3。在歐洲國家，短舌匹菊又稱作小白菊（feverfew），用于治療發(fā)熱已有2 000多年的使用歷史，也用于治療偏頭痛和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。研究表明，小白菊用作藥物的重要活性物質(zhì)主要是小白菊內(nèi)酯。早在1973年，Wiedhopf等發(fā)現(xiàn)小白菊內(nèi)酯具有抗腫瘤作用，近年來大量研究表明小白菊內(nèi)酯及其衍生物在抑制肝癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等癌細(xì)胞的增殖和遷移起到重要作用。ACT001治療腦膠質(zhì)瘤已在美國得克薩斯大學(xué)MD安德森癌癥中心開展臨床二期試驗(yàn)，先后獲得了美國與歐盟治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的孤兒藥資格，該藥一旦上市則對(duì)原料小白菊內(nèi)酯需求量巨大。

目前小白菊內(nèi)酯的生產(chǎn)主要源于植物提取，但植物次生代謝產(chǎn)物一般含量較低。雖然在小白菊中小白菊內(nèi)酯占倍半萜內(nèi)酯總量的85%以上，但在不同品種和不同倍性菊花中小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)（含量）僅為0.02%～0.05%（鮮質(zhì)量）。合成化學(xué)的發(fā)展為很多藥物生產(chǎn)提供了新途徑，但是小白菊內(nèi)酯化學(xué)合成需要13步化學(xué)反應(yīng)，操作復(fù)雜且成本較高。之前研究表明，小白菊內(nèi)酯不僅存在于菊科植物中，也廣泛存在于木蘭科植物中。如周倩等測(cè)定木蘭科8種植物葉片小白菊內(nèi)酯含量在0.002%～0.350%；張泉等從山玉蘭根皮中提取獲得高純度的小白菊內(nèi)酯，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.0%～3.3%。然而植物次生代謝產(chǎn)物的合成通常具有物種、器官或者組織特異性。目前缺乏對(duì)木蘭科植物不同組織、不同發(fā)育階段小白菊內(nèi)酯含量的系統(tǒng)分析。本研究以木蘭科木蘭屬的望春玉蘭、玉蘭、廣玉蘭（M. grandiflora）和山玉蘭為研究材料，開展不同樹種、不同組織，以及望春玉蘭不同生長(zhǎng)季、不同樹齡、不同產(chǎn)地根皮小白菊內(nèi)酯的含量變化研究，為小白菊內(nèi)酯含量高的樹種選育、以收獲小白菊內(nèi)酯為目的的玉蘭藥用林的引種栽培及最佳收獲期確定提供依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1" 試驗(yàn)材料

河南省南召縣皇路店鎮(zhèn)（112.642 724′E， 33.243 269′N）為望春玉蘭、玉蘭和廣玉蘭來源地，屬北亞熱帶季風(fēng)型大陸性氣候，土壤為黃棕壤，pH為5.5～6.0；云南省林業(yè)和草原科學(xué)院昆明樹木園（102.749 299′E， 25.146 098′N）為山玉蘭來源地，屬北緯低緯度亞熱帶-高原山地季風(fēng)氣候，土壤為酸性紅壤，pH為5.0～5.5。選取樹齡為8 a的樹木各3株，用于根皮、花蕾和葉片的收集。用于望春玉蘭根皮年動(dòng)態(tài)變化及不同樹齡根皮小白菊內(nèi)酯含量比較的材料來源于河南省南召縣皇路店苗圃，選取在同一塊地播種的2、3和4年生植株，同一年份個(gè)體長(zhǎng)勢(shì)基本一致。

1.2" 試驗(yàn)方法

1.2.1" 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及高效液相色譜檢測(cè)條件

準(zhǔn)確稱取0.012 0 g小白菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98％），用乙醇溶解后定容到10 mL，配制質(zhì)量濃度為1.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。用乙醇將上述樣品稀釋到0.2、0.4、0.8、和1.0 mg/mL，分別取20.0 μL標(biāo)準(zhǔn)品上樣，色譜柱為Inertsil ODS-3（4.6 mm×250 mm， 5 μm），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以V乙腈∶V水=60∶40（混合液）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，柱溫30 ℃，分離時(shí)間為15 min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。以小白菊內(nèi)酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合方程為y=24 478 123.1 x+2 232 418.2（R=0.993 5）。同時(shí)將1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)上機(jī)3次，計(jì)算得出小白菊內(nèi)酯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation， RSD）值為0.39%，說明儀器精密度、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性均良好。

1.2.2" 小白菊內(nèi)酯提取及測(cè)定

小白菊內(nèi)酯的提取和測(cè)定參照張泉等對(duì)山玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯提取和檢測(cè)方法并稍做修改。將充分干燥的組織粉碎后，準(zhǔn)確稱取1.000 g，加入帶塞錐形瓶中，同時(shí)加入20 mL無水乙醇，稱質(zhì)量并記錄為W1，放搖床上200 r/min浸提過夜后，再用40 kHz超聲15 min，超聲結(jié)束后用無水乙醇補(bǔ)充總質(zhì)量到W1，最后用0.22 μm微孔濾膜進(jìn)行過濾，取濾液用于上機(jī)檢測(cè)。采用高效液相色譜測(cè)定小白菊內(nèi)酯含量，利用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算小白菊內(nèi)酯的含量。

1.2.3" 不同樹種、不同組織小白菊內(nèi)酯含量測(cè)定

2020年10月中旬，隨機(jī)選取樹齡為8 a的玉蘭、望春玉蘭、廣玉蘭和山玉蘭各3株，分別挖取粗度為1.0～1.5 cm的根系，用自來水洗凈后剝?nèi)「?；同時(shí)取上述對(duì)應(yīng)個(gè)體的無病蟲害葉片和花蕾（廣玉蘭和山玉蘭花蕾采于2021年4月中旬），60 ℃烘干后密封避光保存。采用1.2.2中的方法測(cè)定不同組織小白菊內(nèi)酯含量。

1.2.4" 望春玉蘭小白菊內(nèi)酯含量測(cè)定

由于望春玉蘭根系發(fā)達(dá)，抗逆性強(qiáng)，市場(chǎng)上的玉蘭品種多以此為砧木，故對(duì)不同樹齡、不同采樣月份、不同產(chǎn)地的望春玉蘭小白菊內(nèi)脂含量進(jìn)行比較研究。

1） 不同樹齡。目前望春玉蘭主要以實(shí)生繁殖為主，故于2021年2月中旬，在河南省南召縣國營(yíng)皇路店苗圃，分別隨機(jī)選取2、3和4年生望春玉蘭實(shí)生苗各30株，且同一樹齡不同個(gè)體長(zhǎng)勢(shì)基本一致，挖取0.6～1.0 cm粗的根系，自來水洗凈并剝?nèi)「ぃ?0 ℃烘干后自封袋密封避光保存。采用1.2.2中的方法測(cè)定根皮中小白菊內(nèi)酯含量。

2） 不同采樣月份。從2020年12月中旬開始到2021年10月中旬，每隔2月從3株8年生的望春玉蘭上分別取根皮，每棵樹共取樣6次。用自來水洗凈后剝?nèi)「ぃ?0 ℃烘干后自封袋密封避光保存，采用1.2.2中的方法測(cè)定不同月份根皮小白菊內(nèi)酯含量。

3） 不同產(chǎn)地。于2022年2月中旬，從河南省南召縣引種栽培到江蘇南京市（118.784°E，32.058°N）和新沂市（118.376°E，34.324°N）、湖北省襄陽市（112.255°E，31.874°N）和浙江省杭州市（119.729°E，30.237°N）4個(gè)地點(diǎn)，分別選取胸徑基本一致的望春玉蘭5株，挖取根徑為1.0～1.5 cm的根系，自來水洗凈后剝?nèi)「ぃ?0 ℃烘干后自封袋密封避光保存，采用1.2.2中的方法測(cè)定不同產(chǎn)地根皮小白菊內(nèi)酯含量。引種栽培地的土壤類型為黃棕壤、棕壤和黃壤等，土壤pH為4.5～6.0，適宜玉蘭屬植物生長(zhǎng)。

1.2.5" 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用單因素方差分析，檢驗(yàn)不同樹種、不同組織以及望春玉蘭根皮1年內(nèi)不同月份、不同樹齡以及不同產(chǎn)地根皮小白菊內(nèi)酯含量差異，測(cè)定結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（n=3），顯著性水平α=0.05。利用Excel 2016整理原始數(shù)據(jù)，采用IBM SPSS Statistics 20進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先進(jìn)行不同樣本方差齊性檢驗(yàn)，如果方差齊性，則采用單因素方差分析中的LSD進(jìn)行多重比較分析。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 4種玉蘭不同組織小白菊內(nèi)酯含量變化

2.1.1" 葉片中小白菊內(nèi)酯含量分析

在4種玉蘭的葉片中均能檢測(cè)出小白菊內(nèi)酯，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.013%～0.590%。廣玉蘭葉片小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為0.590%；其次是山玉蘭，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.060%；而望春玉蘭和玉蘭葉片的含量較低，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.020%和0.013%。方差分析結(jié)果表明，廣玉蘭與山玉蘭、望春玉蘭和玉蘭葉片中小白菊內(nèi)酯含量差異極顯著（P＜0.001），而山玉蘭、望春玉蘭和玉蘭葉片中小白菊內(nèi)酯含量差異不顯著。

2.1.2" 花蕾中小白菊內(nèi)酯含量分析

對(duì)4種玉蘭花蕾小白菊內(nèi)酯含量的測(cè)定結(jié)果顯示，在望春玉蘭和廣玉蘭花蕾中均能檢測(cè)到小白菊內(nèi)酯，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.88%和0.08%；而玉蘭花蕾中未檢測(cè)到小白菊內(nèi)酯；山玉蘭花蕾出峰的保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)品相差0.103，將山玉蘭3個(gè)檢測(cè)樣品峰圖和望春玉蘭花蕾峰圖合并比較發(fā)現(xiàn)，山玉蘭花蕾中也不含有小白菊內(nèi)酯（表1）。對(duì)望春玉蘭和廣玉蘭花蕾小白菊內(nèi)酯含量的方差分析結(jié)果表明，望春玉蘭和廣玉蘭花蕾中小白菊內(nèi)酯含量差異極顯著（P＜0.001）。

注：不同大寫字母表示不同種間中質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.05水平上差異顯著; 不同小寫字母表示不同組織中質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.05水平上差異顯著。下同。Different upper case letters indicate the significant difference at 0.05 level in different species; Different lowercases indicate the significant difference at 0.05 level in different tissues. The same below.

2.1.3" 根皮中小白菊內(nèi)酯含量分析

根系是植物次生代謝產(chǎn)物合成的主要器官之一。對(duì)4種玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)5.10%；玉蘭根系小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，僅為0.72%；而廣玉蘭和山玉蘭根皮中均未檢測(cè)到小白菊內(nèi)酯（表1）。方差分析結(jié)果表明，望春玉蘭和玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯含量差異極顯著（P＜0.001）。

2.2" 不同樹齡、季節(jié)和產(chǎn)地望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量變化

2.2.1" 不同樹齡望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量分析

除生長(zhǎng)期外，樹齡是影響植物次生代謝產(chǎn)物含量的又一重要因素。同一時(shí)間對(duì)不同樹齡望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，根皮中小白菊內(nèi)酯含量隨著樹齡的增加而增加，2、3和4年生望春玉蘭根系小白菊內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.43%、4.07%和4.31%。單因素方差分析結(jié)果顯示，2年與3、4年生根皮小白菊內(nèi)酯含量差異極顯著（P＜0.001），而3年和4年生根皮小白菊內(nèi)酯含量差異不顯著。

2.2.2" 不同季節(jié)望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量變化

植物生長(zhǎng)期是影響次生代謝產(chǎn)物積累的主要因素之一。對(duì)不同月份望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量整體呈先上升后下降的趨勢(shì)。在一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)內(nèi)不同月份小白菊內(nèi)酯含量變化較大，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化范圍在3.51%～6.04%（圖1）。從圖1可以看出，望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量在落葉后含量呈增加趨勢(shì)，到次年2月含量達(dá)到最高值，隨著4月初葉片萌發(fā)后，其含量總體呈不斷降低的趨勢(shì)，8月中旬含量最低。方差分析結(jié)果表明，根皮小白菊內(nèi)酯含量最高的2月與前后兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比，小白菊內(nèi)酯含量均達(dá)到差異顯著水平（12月，P=0.038；4月，P=0.007）；雖然6月和4月相比，根皮小白菊內(nèi)酯含量稍微上升，但是差異不顯著；8月和6月相比根皮小白菊內(nèi)酯含量下降達(dá)到顯著差異水平（Plt;0.05）；10月根皮小白菊內(nèi)酯含量高于8月，但差異均不顯著。

2.2.3" 不同產(chǎn)地望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量分析

通過分析表明，不同產(chǎn)地的望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量存在一定的差異（表2）。不同產(chǎn)地望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量從大到小依次為原產(chǎn)地（河南南召）gt;湖北襄陽gt;江蘇南京gt;江蘇新沂gt;浙江臨安。單因素方差分析結(jié)果顯示，引種栽培地江蘇南京、新沂、湖北襄陽和原產(chǎn)地（河南南召）的望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量差異不顯著；而浙江臨安引種栽培的望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量和原產(chǎn)地（河南南召）以及引種栽培地江蘇南京、江蘇新沂和湖北襄陽差異均顯著（P＜0.005）。

3" 討" 論

植物次生代謝產(chǎn)物的合成通常具有物種、器官或者組織特異性。研究發(fā)現(xiàn)小白菊內(nèi)酯在4種玉蘭中呈現(xiàn)不同的模式。在廣玉蘭中，葉片小白菊內(nèi)酯含量最高，花蕾含量較低，而根皮中不含有小白菊內(nèi)酯。而在望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯含量最高，其次是花蕾中，葉片中的含量最低。這與菊屬植物中小白菊內(nèi)酯含量的研究結(jié)果存在較大差異。短舌匹菊中小白菊內(nèi)酯主要存在于地上部分，在花中含量最高，其次是葉片中，而根系中含量極低或者檢測(cè)不到。產(chǎn)生這種差異主要和植物器官的組織結(jié)構(gòu)有關(guān)。Majdi等對(duì)短舌匹菊的花和葉片中小白菊內(nèi)酯含量的研究發(fā)現(xiàn)，隨著花瓣和葉片背面的腺毛數(shù)量增多而升高，青蒿素的含量也與黃花蒿（Artemisia annua）葉片腺毛的數(shù)量呈正相關(guān)，腺毛一般是植物產(chǎn)生和貯存各種次生代謝化合物的主要器官，望春玉蘭花蕾中小白菊內(nèi)酯含量較高可能與花瓣中也含有大量腺體有關(guān)。但望春玉蘭葉片背面光滑，因此葉片中含量較低；而根皮中小白菊內(nèi)酯存在較大的差別，這可能是由于木本植物和草本植物在進(jìn)化過程中發(fā)生了特異性分化。

植物次生代謝產(chǎn)物含量除受遺傳因素影響之外，樹齡和采收期也是影響中藥材產(chǎn)量與質(zhì)量的主要因素之一。如諶金吾等對(duì)多年生的凹葉厚樸（M. officinalis var. biloba）根皮厚樸酚含量的研究發(fā)現(xiàn)，厚樸酚隨著樹齡的增長(zhǎng)而逐漸增加，但7～13 a樹齡含量變化明顯，而13～26 a樹齡含量增加不明顯。本研究對(duì)不同樹齡望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量分析也發(fā)現(xiàn)，隨著樹齡的增加根皮中小白菊內(nèi)酯也逐漸增加，但是3年生和4年生根皮小白菊內(nèi)酯含量差異不顯著。雖然8年生望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯最高可達(dá)6.04%，但從收獲根皮提取小白菊內(nèi)酯的經(jīng)濟(jì)效益考慮，3年生收獲根皮具有一定的合理性。中藥材的質(zhì)量還受采收期的影響，一般根及根莖類藥材在秋、冬季節(jié)植物地上部分即將枯萎到初春發(fā)芽前采收最適宜。對(duì)不同生長(zhǎng)季節(jié)望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量變化的動(dòng)態(tài)研究發(fā)現(xiàn)，2月其含量最高，這可能與落葉及冬季的降水條件有關(guān)。Fonseca等研究了干濕交替對(duì)菊花（Chrysanthemum morifolium）中小白菊內(nèi)酯含量的影響，發(fā)現(xiàn)干濕交替從第2次恢復(fù)水分開始可以提高菊花中小白菊內(nèi)酯含量。進(jìn)入冬季后，降雨量減少，這種自然的干濕交替，可能是望春玉蘭根系小白菊內(nèi)酯合成和積累的主要因素之一。

植物生長(zhǎng)地的自然條件和生態(tài)環(huán)境也是影響次生代謝產(chǎn)物含量的重要因素，“南藥北種”和“西藥東栽”會(huì)顯著降低藥用植物的藥效，如陜西的箭葉淫羊藿（Epimedium sagittatum）種植到安徽，葉片中的淫羊藿苷從原產(chǎn)地的1.55%降低到0.37%。本研究對(duì)江蘇南京和新沂、浙江臨安和湖北襄陽引種栽培的望春玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯與原產(chǎn)地（河南南召）進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)浙江臨安引種的望春玉蘭根系小白菊內(nèi)酯含量和原產(chǎn)地差異顯著，雖然湖北襄陽、江蘇南京和新沂引種栽培的望春玉蘭根系小白菊內(nèi)酯含量略低于原產(chǎn)地，但是含量差異不顯著。因此湖北襄陽、江蘇南京和新沂可以引種栽植望春玉蘭用于根皮小白菊內(nèi)酯的提取。

本研究發(fā)現(xiàn)從云南昆明收集的山玉蘭根皮中并未檢測(cè)到小白菊內(nèi)酯，僅在山玉蘭葉片中檢測(cè)到小白菊內(nèi)酯，含量?jī)H為0.06%，這與張泉等對(duì)山玉蘭、玉蘭的根皮提取小白菊內(nèi)酯含量在2.0%～3.3％的結(jié)果存在較大差異。經(jīng)過考證，張泉等收集的山玉蘭根皮也來源于河南省南召縣，而山玉蘭主要分布于川西南、黔西南及云南，河南省南召縣栽培的木蘭科植物主要是望春玉蘭，本研究測(cè)定玉蘭根皮小白菊內(nèi)酯含量也僅為0.72%，因此推測(cè)張泉等用于小白菊內(nèi)酯提取的應(yīng)該是望春玉蘭而不是山玉蘭或玉蘭。

雖然望春玉蘭根皮中小白菊內(nèi)酯含量可達(dá)5%以上，且提取純度較高，但是收獲根皮一般為破壞性取樣，也受根系生物量的限制。廣玉蘭葉片和望春玉蘭花蕾小白菊內(nèi)酯含量雖然不及望春玉蘭根皮含量的11.5%～17.3%，但葉片和花蕾的生物量大，且每年均可采收，資料顯示僅河南省南召縣每年辛夷花蕾產(chǎn)量在1.8萬t左右，這為小白菊內(nèi)酯的提取提供了大量資源。然而比較廣玉蘭葉片、望春玉蘭花蕾與望春玉蘭根系的液相圖譜，發(fā)現(xiàn)望春玉蘭根皮中有兩個(gè)峰，其中一個(gè)目的峰為小白菊內(nèi)酯，含量在85%以上；另一個(gè)峰為小白菊內(nèi)酯的前體木香烴內(nèi)酯，但廣玉蘭葉片和望春玉蘭花蕾的液相圖譜中，除了小白菊內(nèi)酯和木香烴內(nèi)酯外，還有10多種未知物質(zhì)。因此，廣玉蘭葉片、望春玉蘭花蕾和望春玉蘭根皮中提取相同質(zhì)量的小白菊內(nèi)酯，從望春玉蘭根皮中提取小白菊內(nèi)酯的純度更高。望春玉蘭花蕾入藥主要用于提取揮發(fā)油和木蘭脂素類物質(zhì)，為了充分提高望春玉蘭花蕾的產(chǎn)值，后續(xù)應(yīng)加強(qiáng)花蕾中小白菊內(nèi)酯的分離技術(shù)研究。

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（責(zé)任編輯" 吳祝華）