摘 要：本試驗(yàn)旨在探究苜草素對不同階段蛋雞血清細(xì)胞因子水平的影響，選擇育成期、產(chǎn)蛋高峰期、產(chǎn)蛋后期蛋雞各288只，每個(gè)階段均隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，3個(gè)試驗(yàn)組分別在飲水中添加500、1 000、1 500 mg/L苜草素，每周每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)選取30只雞采血，持續(xù)采血10周，通過ELISA法檢測血清中白細(xì)胞介素2（Interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平。結(jié)果表明：添加1 000、1 500 mg/L苜草素顯著提高不同生長階段蛋雞血清中IL-2和TNF-α的水平（P＜0.05），顯著降低不同生長階段蛋雞血清中IL-6的水平（P＜0.05）；添加500 mg/L苜草素對以上細(xì)胞因子指標(biāo)沒有顯著影響。綜上所述，在不同生長階段添加1 000 mg/L苜草素即可有效增強(qiáng)蛋雞的細(xì)胞免疫應(yīng)答。

關(guān)鍵詞：苜草素，蛋雞，細(xì)胞因子，免疫功能

中圖分類號：S816.701.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-1085（2024）10-0020-08

4yDHgcvyQ6bM4MpBpVq3VxLrsTXaSYl220uYE6lx8qM=苜草素是一種從紫花苜蓿中分離提取出的活性物質(zhì)，其中有效成分包括多糖、皂苷以及黃酮等[1-2]。在生產(chǎn)中，苜草素常被用作飼料添加劑[3-4]。本研究以不同生長階段的蛋雞（育成期、產(chǎn)蛋高峰期、產(chǎn)蛋后期）為試驗(yàn)對象，通過測定影響蛋雞抗病能力的相關(guān)免疫指標(biāo)，研究不同添加劑量對各個(gè)生長階段蛋雞血清相關(guān)細(xì)胞因子水平的影響，進(jìn)而為蛋雞生產(chǎn)中苜草素的使用提供實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

苜草素是由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所飼料添加劑研究室提供，是從紫花苜蓿中通過現(xiàn)代提取工藝技術(shù)生產(chǎn)的純植物成分飼料添加劑，其主要有效成分水平為多糖18.63%、黃酮5.89%、皂苷5.68%。

1.2 主要儀器

臺式離心機(jī)（型號：Nefuge15）：上海力申科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；微量振蕩器（型號：ZW-A）：華北實(shí)驗(yàn)儀器有限公司生產(chǎn)；電子天平（型號：AE260）：上海梅特勒托利多有限公司生產(chǎn)；微量移液器：Thermo公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀（型號：TECAN SUNRISE）：TECAN公司生產(chǎn)；電熱恒溫培養(yǎng)箱（型號：9082）：上海一恒科技有限公司生產(chǎn)；自動酶標(biāo)洗板機(jī)（型號：HYDROSPEED）：TECAN公司生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)分為3個(gè)階段：育成期（7～17周）、產(chǎn)蛋高峰期（22～32周）和產(chǎn)蛋后期（56～66周），每個(gè)階段選取288只海蘭褐蛋雞，隨機(jī)分為4組，即對照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別在飲水中添加500、1 000、1 500 mg/L苜草素。

1.4 血樣采集

每周對每個(gè)試驗(yàn)組雞只通過翅靜脈采血0.5 mL，室溫放置1 h，使血清充分析出，然后于2 000 r/min離心10 min，收集血清。

采用上海雙贏生物科技有限公司生產(chǎn)的雞細(xì)胞因子IL-2、IL-6、TNF-α酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒測定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS13.0軟件中One-way ANOVA程序進(jìn)行方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同生長階段蛋雞血清中IL-2水平檢測結(jié)果

表1為飲水添加不同劑量苜草素對育成期蛋雞血清中IL-2水平的影響。從表中可看出，在7～10周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-2水平無顯著差異。但是在11～17周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-2水平顯著高于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

表2為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋高峰期蛋雞血清中IL-2水平的影響。在22～29周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-2水平無顯著差異。但在30～32周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-2水平顯著高于對照組（P<0.05）。

表3為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清中IL-2水平的影響。在56～59周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-2水平無顯著差異。但在60～66周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-2水平顯著高于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。以上結(jié)果說明，在當(dāng)前試驗(yàn)條件下，血清IL-2水平與苜草素的添加劑量呈正相關(guān)，但是是否添加劑量越大，IL-2的水平越高，有待進(jìn)一步研究。

2.2 不同生長階段蛋雞血清中白細(xì)胞介素IL-6水平檢測結(jié)果

表4為飲水添加不同劑量苜草素對育成期蛋雞血清中IL-6水平的影響。從表中可看出，在7～12周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-6水平無顯著差異。但是在13～17周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-6水平顯著低于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

表5為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋高峰期蛋雞血清中IL-6水平的影響。在22～26周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-6水平無顯著差異。但在27～32周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-6水平顯著低于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

表6為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清中IL-6水平的影響。在56～60周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清IL-6水平無顯著差異。但在61～66周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清IL-6水平顯著低于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

以上結(jié)果說明，飲水中添加不同劑量的苜草素可以顯著抑制白細(xì)胞介素IL-6的分泌量，提高機(jī)體本身的免疫力。

2.3 不同生長階段蛋雞血清中TNF-α水平檢測結(jié)果

表7為飲水添加不同劑量苜草素對育成期蛋雞血清中TNF-α水平的影響。從表中可看出，在7～13周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清TNF-α水平無顯著差異。但是在14～17周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清TNF-α水平顯著高于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

表8為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋高峰期蛋雞血清中TNF-α水平的影響。在22～25周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清TNF-α水平無顯著差異。但在26～32周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清TNF-α水平顯著高于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

表9為飲水添加不同劑量苜草素對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清中TNF-α水平的影響。在56～59周齡時(shí)，各處理組蛋雞血清TNF-α水平無顯著差異。但在60～66周齡時(shí)，試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組蛋雞血清TNF-α水平顯著高于對照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

3 討論

3.1 IL-2對蛋雞免疫系統(tǒng)的影響

IL-2也叫做T細(xì)胞生長因子，是所有細(xì)胞因子佐劑中研究得最深入、最廣泛的細(xì)胞因子之一，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用。IL-2能夠直接激活單核細(xì)胞，加快T、B細(xì)胞的分化及增殖，促進(jìn)B細(xì)胞分泌抗體，激發(fā)LAK等細(xì)胞生長。不管是細(xì)胞免疫或者是體液免疫，IL-2都有正向促進(jìn)作用，但對前者更有效用[5]。在人類醫(yī)學(xué)上， IL-2常作為一種免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用到臨床。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加1 000、1 500 mg/L苜草素可提高各階段蛋雞血清中IL-2的水平，表明苜草素可改善蛋雞免疫功能。

3.2 IL-6對蛋雞免疫系統(tǒng)的影響

IL-6是由單核巨噬細(xì)胞、Th2細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子，如果機(jī)體中存在炎癥時(shí)，IL-6水平會顯著升高，促進(jìn)機(jī)體炎癥[7]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在不同生長階段，三個(gè)試驗(yàn)組蛋雞血清中IL-6的水平均低于對照組，這表ml5kqQnf8wlk5CYnAyfINYqEE3IzJ/P3aBcA9dR/CaM=明苜草素可以對蛋雞的免疫系統(tǒng)有明顯的增強(qiáng)作用。

3.3 TNF-α對蛋雞免疫系統(tǒng)的影響

TNF-α對腫瘤細(xì)胞具有直接的細(xì)胞毒作用和生長抑制作用，還可提高中性粒細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)免疫細(xì)胞的增殖和分化[6-7]。本研究表明，在三個(gè)生長階段，與對照組相比，添加1 000、1 500 mg/L苜草素可提高蛋雞血清中TNF-α的水平，表明飲水添加1 000、1 500 mg/L苜草素對蛋雞免疫功能有一定的改善作用。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，飲水中添加苜草素對不同生長階段蛋雞的機(jī)體免疫功能具有一定增強(qiáng)作用，其適宜添加水平為1 000 mg/L。

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Effects of Polysavone on Cytokine Secretion in Laying Hens at Different Growth Stages

Abstract： The effects of polysavone on cytokines of laying hens at different stages were investigated. A total of 288 laying hens at growing period， peak laying period and late laying period were selected and randomly divided into four groups. The control group was supplied with only basal diet， and different doses of polysavone were added to drinking water in experimental groups. The contents of IL-2， IL-6 and TNF-α in serum were detected by ELISA assay. The results showed as follows： supplementation of 1 000 mg/L and 1 500 mg/L polysavone significantly increased the contents of IL-2 and TNF-α in serum of laying hens at different growth stages （P<0.05）， and significantly decreased the content of IL-6 in serum （P<0.05）. The addition of 500 mg/L polysavone had no significant effect on the above cytokine indexes. According to the results of this experiment， adding 1 000 mg/L polysavone at different growth stages can effectively enhance the cellular immune response of laying hens.

Keywords： Polysavone; Laying hens; Cytokines; Immune function