摘 要 紅腿長(zhǎng)吻松鼠（Dremomys pyrrhomerus）是一種主要分布于我國(guó)的長(zhǎng)吻松鼠，但對(duì)其生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特征鮮有研究報(bào)道。為揭示紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食物種類組成及其取食偏好，運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)貴州北部地區(qū)采集的紅腿長(zhǎng)吻松鼠進(jìn)行食性分析。結(jié)果表明：紅腿長(zhǎng)吻松鼠所食植物包含4門85科180屬，動(dòng)物包含3門59科71屬，其中，胡桃科（Juglandaceae）、禾本科（Poaceae）、殼斗科（Fagaceae）、薔薇科（Rosaceae）、鼠李科（Rhamnaceae）和樟科（Lauraceae）等是紅腿長(zhǎng)吻松鼠主要的植物性食物，而田螺科（Viviparidae）、蚌科（Unionidae）、劍水蚤科（Cyclopidae）、沼大蚊科（Limoniidae）、管薊馬科（Phlaeothripidae）和螽斯科（Tettigoniidae）等是其主要的動(dòng)物性食物。此外，不同性別紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性具有一定的差異性，雌性紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食物多樣性均高于雄性，雌性和雄性的植物性食物重疊度較高，而動(dòng)物性食物重疊度較低。研究結(jié)果豐富了黔北喀斯特臺(tái)原地區(qū)小型哺乳動(dòng)物的攝食生態(tài)學(xué)。

關(guān)鍵詞：紅腿長(zhǎng)吻松鼠；高通量測(cè)序技術(shù)；食性；貴州北部地區(qū)

中圖分類號(hào)：Q958. 1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 04 - 0717 - 10

DOI：10.12375/ysdwxb.20240404

掌握野生動(dòng)物食性是進(jìn)一步了解物種生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特征的基礎(chǔ)內(nèi)容［1］。通過(guò)食性分析不僅可以直接了解動(dòng)物的食物組成和取食偏好，還能反映動(dòng)物的生存狀況、營(yíng)養(yǎng)策略、生境需求和資源利用狀況等信息［2?4］。因此，掌握動(dòng)物的食性及其生態(tài)適應(yīng)策略，是了解動(dòng)物與環(huán)境之間相互關(guān)系、開(kāi)展種群生態(tài)學(xué)研究的前提［5?6］。

紅腿長(zhǎng)吻松鼠（Dremomys pyrrhomerus）隸屬于松鼠科（Sciuridae）麗松鼠亞科（Callosciurinae）長(zhǎng)吻松鼠屬（Dremomys），是廣泛分布于我國(guó)南方各省森林的一種晝行性、半樹棲的雜食性小型哺乳動(dòng)物，其種群量大、適應(yīng)性強(qiáng)、貯食行為發(fā)達(dá)，在森林生態(tài)系統(tǒng)恢復(fù)過(guò)程中起著非常重要的作用，是影響森林生態(tài)平衡的重要?jiǎng)游镏唬??8］。迄今為止，對(duì)于紅腿長(zhǎng)吻松鼠的研究主要見(jiàn)于系統(tǒng)發(fā)生、物種厘定及紅外相機(jī)監(jiān)測(cè)報(bào)告等［9?12］，其食性方面尚未見(jiàn)較詳細(xì)的報(bào)道。食性研究方法的精確性直接關(guān)系到該類動(dòng)物資源科學(xué)管理的水平［13］。對(duì)嚙齒類動(dòng)物食性研究的方法多為直接觀察法、解剖法、糞便顯微組織分析法和胃容物分析法等，其中，胃容物分析法是國(guó)內(nèi)外研究嚙齒動(dòng)物食性的主要方法［5，14］。傳統(tǒng)的胃容物檢測(cè)方法形態(tài)鑒定的工作強(qiáng)度大，且易受食物類型和消化情況的影響，鑒定結(jié)果的效率和準(zhǔn)確性較低［15］。相比于傳統(tǒng)的食性形態(tài)學(xué)分析方法，高通量測(cè)序技術(shù)具有檢測(cè)靈敏、樣本量少和精確度高等優(yōu)點(diǎn)［16］。目前該技術(shù)已逐漸成為分析動(dòng)物食性的熱門手段之一，被廣泛應(yīng)用于各種野生動(dòng)物的食性研究中［17?20］。因此，為準(zhǔn)確揭示紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性，以黔北地區(qū)的紅腿長(zhǎng)吻松鼠為研究對(duì)象，運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)，分析其食性組成，以期在豐富黔北喀斯特臺(tái)原地區(qū)小型哺乳動(dòng)物的攝食生態(tài)學(xué)認(rèn)知的同時(shí)，為今后深入研究這類物種提供基礎(chǔ)資料。

1 研究區(qū)概況

研究對(duì)象采自貴州省北部遵義市綏陽(yáng)縣的旺草鎮(zhèn)（28°13′—28°19′ N，107°9′—107°13′ E）。采樣地位于貴州寬闊水國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)的中心區(qū)域。寬闊水國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)是黔北喀斯特臺(tái)原區(qū)及其周邊峽谷區(qū)森林生態(tài)系統(tǒng)保存最好、生物多樣性最豐富的區(qū)域之一，海拔650 ～ 1 762 m，屬亞熱帶季風(fēng)性氣候，常年氣溫較低，云霧多，日照少，具有低緯度山地濕潤(rùn)性氣候特點(diǎn)，年均氣溫11. 7 ～15. 2 ℃，年降水量1 300 ～ 1 350 mm，相對(duì)濕度超過(guò)80%。地貌為典型的喀斯特臺(tái)原地貌，土壤以黃棕壤和黃壤為主。保護(hù)區(qū)水熱條件良好，森林植被主體為光葉水青岡（Fagus lucida）林與常綠闊葉樹種構(gòu)成的落葉常綠闊葉混交林，優(yōu)勢(shì)植被群落主要以殼斗科（Fagaceae）、樟科（Lauraceae）和杜鵑花科（Erica?ceae）等為主［11］。區(qū)內(nèi)珍稀瀕危動(dòng)植物資源十分豐富，分布有黑葉猴（Trachypithecus francoisi）、紅腹錦雞（Chrysolophus pictus）、南方紅豆杉（Taxus wallichianavar. mairei）和珙桐（Davidia involucrata）等國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)植物；其他生物資源也十分豐富，保護(hù)區(qū)現(xiàn)已記錄高等植物、浮游植物、脊椎動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物等生物資源近4 000種，同時(shí)，保護(hù)區(qū)內(nèi)也廣泛種植糧食作物，如水稻、玉米和大豆等［21］41-47，［22］。

2 研究方法

2. 1 野外樣本采集

于2022年秋季（9—11月）在黔北綏陽(yáng)縣旺草鎮(zhèn)北部林區(qū)的3個(gè)不同斑塊（圖1）采用籠捕法共獲取12只紅腿長(zhǎng)吻松鼠成年個(gè)體。研究已通過(guò)貴州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)的審查（批件號(hào)：EAE-GZU-2020-7011）。樣本經(jīng)CO2氣體處死后，進(jìn)行常規(guī)生物學(xué)測(cè)量（性別、體質(zhì)量、體長(zhǎng)、前足長(zhǎng)、后足長(zhǎng)、頭長(zhǎng)和尾長(zhǎng)），隨后立即解剖，取胃置于5%的福爾馬林溶液中固定［23］，放入冰箱-80 ℃保存，以備后續(xù)DNA的提取。測(cè)定的樣本信息見(jiàn)表1。

2. 2 胃容物基因組DNA 的提取

根據(jù)E. Z. N. A. Soil DNA kit（D5625-01）說(shuō)明書對(duì)紅腿長(zhǎng)吻松鼠胃內(nèi)容物進(jìn)行DNA 抽提，配制1. 2% 的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的提取質(zhì)量，并用NanoDrop2000超微量分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度和純度。

2. 3 目的基因片段的PCR 擴(kuò)增與測(cè)序

分別選用線粒體COI和葉綠體rbcL 鑒定動(dòng)植物性食物。葉綠體rbcL 基因擴(kuò)增使用引物Z1aF（5′-ATGTCACCACCAACAGAGACTAAAGC-3′）和hp2R（5′-CGTCCTTTGTAACGATCAAG-3′）。線粒體COI基因擴(kuò)增使用引物intF（5′-GGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC-3′）和COI jgHCO2198（5′-TANACYTCNGGRTGNCCRAARAAYCA-3′）。PCR反應(yīng)總體系25. 00 μL，其中包括5 × reaction buffer 5. 00 μL，5 × GC buffer 5. 00 μL，dNTP（2. 5 mmol/L）2. 00 μL，正、反向引物（10 μmol/L）各1. 00 μL，DNA 模板2. 00 μL，ddH2O 8. 75 μL，Q5 DNA Polymerase 0. 25 μL。擴(kuò)增rbcL 和COI 基因片段反應(yīng)程序：98 ℃預(yù)變性2 min；98 ℃變性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸5 min，10 ℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1. 5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，采用DNA純化磁珠（Vazyme VAHTSTM DNA Clean Beads）對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化回收。將PCR擴(kuò)增回收產(chǎn)物進(jìn)行熒光定量，熒光試劑為Quant-iT PicoGreen dsDNA AssayKit，定量?jī)x器為Microplate Reader（BioTek，F(xiàn)L ×800）。按照每個(gè)樣本的測(cè)序量需求，對(duì)各樣本按相應(yīng)比例混合，然后送上海派森諾生物科技股份有限公司測(cè)序。

2. 4 數(shù)據(jù)處理與分析

首先檢測(cè)原始下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量，通過(guò)質(zhì)量初篩的原始序列按照index和barcode信息，進(jìn)行文庫(kù)和樣本劃分，并去除barcode 序列。使用Vsearch（v2. 13. 4）軟件去引物、拼接、質(zhì)量過(guò)濾、去重和去嵌合體獲得高質(zhì)量序列。應(yīng)用QIIME2軟件對(duì)序列按照97% 的序列相似度歸并和操作分類單元聚類分析，產(chǎn)生OTU表并與Silva數(shù)據(jù)庫(kù)（Release132，http：//www. arb-silva. de）、Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)（Release13. 8，http：//greengenes. secondgenome. com）比對(duì)分類分析。

使用QIIME2軟件獲取各樣本在科屬分類水平上的食物組成和相對(duì)豐度（relative abundance，RA），揭示紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性組成。在進(jìn)行食性分析時(shí)，采用相對(duì)豐度和出現(xiàn)頻率（frequency of occur?rence，F(xiàn)O）兩個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)估紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物構(gòu)成［24］。為比較雌、雄紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成的差異，使用物種豐富度Chaol指數(shù)、Ace指數(shù)以及物種多樣性Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)，計(jì)算食物組成的α 多樣性。采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)比較紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成α 多樣性的性別差異，顯著性水平α =0. 05，用SPSS 26. 0軟件統(tǒng)計(jì)分析。采用主坐標(biāo)分析（principal co-ordinates analysis，PCoA），選擇Bray-Curtis距離算法開(kāi)展不同性別紅腿長(zhǎng)吻松鼠的β 多樣性分析，分析在R 4. 3. 0中實(shí)現(xiàn)。

3 結(jié)果

3. 1 OTU 劃分與分類地位鑒定

分別選取紅腿長(zhǎng)吻松鼠葉綠體rbcL 基因片段、線粒體COI基因片段，對(duì)其胃內(nèi)容物的植物組成和動(dòng)物組成進(jìn)行組分分析鑒定。在植物鑒定中，從12個(gè)樣品中共獲得目的片段1 487 702 條，樣本序列為86 849 ～ 153 085條，平均長(zhǎng)度280 bp，以97%相似度進(jìn)行聚類共得到721個(gè)OTU。在動(dòng)物鑒定中，共從12個(gè)樣品中獲得目的片段979 575條，樣品的序列數(shù)最低為51 165條，最高為121 604條，平均長(zhǎng)度320 bp，按97%相似度進(jìn)行聚類得到859個(gè)OTU。

3. 2 紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成

紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性較為復(fù)雜，剔除自身序列和無(wú)法鑒定且數(shù)量較少的序列優(yōu)化篩選后，將其食物來(lái)源分為植物性食物和動(dòng)物性食物。

從植物性食物成分上看，從12只紅腿長(zhǎng)吻松鼠個(gè)體的胃內(nèi)容物樣品中，共鑒定植物種類4門42目85科180屬。在科水平上（圖2），相對(duì)豐度 gt; 1%的植物科有11個(gè)，分別為胡桃科（Juglandaceae）、禾本科（Poaceae）、殼斗科、薔薇科（Rosaceae）、鼠李科（Rhamnaceae）、樟科、柳葉蘚科（Amblystegiaceae）、獼猴桃科（Actinidiaceae）、山茱萸科（Cornaceae）、樺木科（Betulaceae）和菊科（Asteraceae），其中以胡桃科、禾本科和殼斗科為主要的植物性食物，分別占比27. 45%、16. 67% 和11. 92%，植物性食物的出現(xiàn)頻率均較高，其中胡桃科、禾本科、殼斗科、薔薇科、樟科和樺木科的出現(xiàn)頻率為100%，而菊科、楊梅科（Myricaceae）和榿葉樹科（Clethraceae）出現(xiàn)頻率為75%。

在屬水平上（圖3），相對(duì)豐度 gt; 10%的植物為胡桃屬（Juglans）、栗屬（Castanea）和白茅屬（Impe?rata），相對(duì)豐度分別為27. 28%、11. 84%和10. 67%。棗屬（Ziziphus）、玉蜀黍?qū)伲╖ea）、栒子屬（Cotoneas?ter）、山胡椒屬（Lindera）、Sarmentypnum、懸鉤子屬（Rubus）、獼猴桃屬（Actinidia）、山茱萸屬（Cornus）和鵝耳櫪屬（Carpinus）也是紅腿長(zhǎng)吻松鼠的主要采食屬。出現(xiàn)頻率最高的屬為胡桃屬、栗屬、白茅屬、山胡椒屬、青錢柳屬（Cyclocarya）和樺木屬（Betula），出現(xiàn)頻率均為100%。

從動(dòng)物性食物成分上看，共鑒定出攝食的動(dòng)物種類分屬于3個(gè)門，分別為軟體動(dòng)物門（Mollusca）、節(jié)肢動(dòng)物門（Arthropoda）和脊索動(dòng)物門（Chordata），包括24目59科71屬。在科水平上（圖4），無(wú)脊椎動(dòng)物是紅腿長(zhǎng)吻松鼠最常見(jiàn)的食物種類，相對(duì)豐度排在前10 位的動(dòng)物為田螺科（Viviparidae）、蚌科（Unionidae）、劍水蚤科（Cyclopidae）、沼大蚊科（Li?moniidae）、管薊馬科（Phlaeothripidae）、螽斯科（Tetti?goniidae）、裳夜蛾科（Erebidae）、溞科（Daphniidae）、眼蕈蚊科（Sciaridae）和象甲科（Curculionidae），相對(duì)豐度分別為4. 26%、4. 14%、3. 46%、2. 97%、2. 18%、1. 61%、1. 50%、1. 47%、1. 39%和1. 27%。動(dòng)物性食物的出現(xiàn)頻率均較低，其中出現(xiàn)頻率最高的為劍水蚤科，占比58. 33%，而田螺科、蚌科、螽斯科、搖蚊科（Chironomidae）、蚊科（Culicidae）和果蠅科（Drosophi?lidae）的出現(xiàn)頻率僅為33. 34%。

在屬水平上（圖5），相對(duì)豐度排在前10位的為石田螺屬（Sinotaia）、Polymera、矛蚌屬（Lanceolaria）、簡(jiǎn)管薊馬屬（Haplothrips）、劍水蚤屬（Cyclops）、溫劍水蚤屬（Thermocyclops）、Homoeocera、溞屬（Daph?nia）、遲螽屬（Lipotactes）和Nodularia，相對(duì)豐度分別為4. 25%、2. 97%、2. 89%、2. 18%、2. 01%、1. 42%、1. 41%、1. 31%、1. 25%和1. 25%。出現(xiàn)頻率較高的為劍水蚤屬、大鼠屬（Berylmys）、簡(jiǎn)管薊馬屬和溞屬，出現(xiàn)頻率分別為50. 00%、50. 00%、41. 67% 和41. 67%。

3. 3 紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成多樣性的性別差異

紅腿長(zhǎng)吻松鼠胃容物樣品的α 多樣性指數(shù)（Chao1、ACE、Shannon和Simpson）計(jì)算結(jié)果顯示，雌雄紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食物多樣性存在一定的差異（表2）。雌性紅腿長(zhǎng)吻松鼠的Chao1、ACE、Shannon 和Simpson指數(shù)均高于雄紅腿長(zhǎng)吻松鼠，其中，植物性食物的各項(xiàng)指標(biāo)均呈顯著性差異。雌性和雄性紅腿長(zhǎng)吻松鼠的動(dòng)物性食物的α 多樣性指數(shù)差異并不顯著（表2）?；贐ray-Curtis距離算法的PCoA分析結(jié)果顯示（圖6），不同性別紅腿長(zhǎng)吻松鼠胃容物樣品食物組成存在一定的重疊，植物性食物的重疊度較高，動(dòng)物性食物的重疊度較低，均未呈現(xiàn)顯著差異。

4 討論

4. 1 紅腿長(zhǎng)吻松鼠食性特征

本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)首次系統(tǒng)報(bào)告了貴州北部地區(qū)紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性。結(jié)果顯示，紅腿長(zhǎng)吻松鼠具有極為豐富多樣的食譜，攝食對(duì)象涵蓋種子植物、苔蘚植物、節(jié)肢動(dòng)物、軟體動(dòng)物和浮游動(dòng)物等多個(gè)生物類群，紅腿長(zhǎng)吻松鼠展現(xiàn)了較為典型的雜食性特征。與其他使用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)進(jìn)行松鼠科動(dòng)物食性的研究［25?27］相比較，本研究食性分析結(jié)果獲得了分辨率更高的動(dòng)植物食物圖譜。從具體植物性食物成分上看，胡桃科、禾本科和殼斗科等植物是紅腿長(zhǎng)吻松鼠最主要的秋季食物種類，主要原因是這些植物資源易獲取，產(chǎn)量大，取食成本低。本研究采樣地位于寬闊水保護(hù)區(qū)，該區(qū)域植被類型主要為中亞熱帶常綠落葉闊葉混交林，殼斗科和樟科為主要植物種類，并伴有胡桃科、薔薇科和禾本科等植物，光葉水青岡、茅栗（Castanea seguinii）、胡桃楸（Juglans mandshurica）和黑殼楠（Lindera mega?phylla）等植物在研究區(qū)內(nèi)分布廣且數(shù)量多［21］27-30。這些分布較多的植物為紅腿長(zhǎng)吻松鼠提供了豐富的食物來(lái)源。植物蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素及其他營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)嚙齒動(dòng)物的行為和生理都有不同程度的影響，一般來(lái)說(shuō)，動(dòng)物通常會(huì)選擇營(yíng)養(yǎng)含量高的食物［28］。適口性也是影響動(dòng)物食性的一個(gè)十分重要的因素［29］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成中薔薇科和獼猴桃科植物亦占有較大的比例，可能是這類植物營(yíng)養(yǎng)豐富，同時(shí)具有較好的適口性，使得它們成為紅腿長(zhǎng)吻松鼠秋季主要食物選擇之一。有研究表明，許多松鼠會(huì)盜食農(nóng)作物（玉米、小麥等）［30?31］。在本研究中，也檢測(cè)到一定豐度的禾本科的玉蜀黍?qū)佟⒌緦伲∣ryza）等植物，說(shuō)明紅腿長(zhǎng)吻松鼠有盜食作物的行為，而本次采樣時(shí)間也正值當(dāng)?shù)赜衩?、水稻等農(nóng)作物成熟的時(shí)期。本研究發(fā)現(xiàn)，紅腿長(zhǎng)吻松鼠攝食植物中的Sarmentypnum 屬目前在我國(guó)只有云南省有記錄，而貴州地區(qū)暫無(wú)分布記錄。這可能是當(dāng)前對(duì)該屬物種缺乏研究，相關(guān)報(bào)道較少，也可能是物種注釋的問(wèn)題，采用97%序列相似度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行物種歸并分析，可能影響了高通量測(cè)序在某些物種鑒別方面的精準(zhǔn)度，導(dǎo)致對(duì)該屬的分類辨識(shí)不夠清晰，被歸并到近緣屬種。在攝食動(dòng)物性食物中，也存在類似現(xiàn)象。

從動(dòng)物性食物成分上看，共鑒定出攝食的動(dòng)物種類包括無(wú)脊椎動(dòng)物（軟體動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物）和脊索動(dòng)物。無(wú)脊椎動(dòng)物被紅腿長(zhǎng)吻松鼠頻繁采食，是其最主要的動(dòng)物性食物來(lái)源。值得注意的是，多個(gè)樣本中檢測(cè)到一定豐度的貝類動(dòng)物，可能與食物的可獲得性有關(guān)。采樣地靠近水庫(kù)，有大量貝類動(dòng)物，且采樣時(shí)間剛好處于水庫(kù)的枯水期會(huì)有許多貝類擱淺在水庫(kù)周邊，且體型較大的貝類的脂肪含量比其他類群高。選擇資源量豐富且易獲得的食物意味著取食容易，即在覓食過(guò)程中以最小的能量投入獲取最大的收益，這種取食策略符合最優(yōu)覓食選擇［32］。很多研究已經(jīng)證實(shí)：昆蟲是松鼠科動(dòng)物最重要的動(dòng)物性食物資源之一，在山西蘆芽山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，巖松鼠（Sciurotamias davidianus）胃內(nèi)容物中約10%為昆蟲［30］；金志民等［26］在我國(guó)黑龍江林區(qū)通過(guò)解剖觀察北松鼠（Sciurus vulgaris）和花鼠（Tamias sibiri?cus）胃內(nèi)容物研究其食性時(shí)，也發(fā)現(xiàn)它們頻繁取食昆蟲。在本研究中，沼大蚊科、管薊馬科、螽斯科和裳夜蛾科等昆蟲類動(dòng)物也是紅腿長(zhǎng)吻松鼠的主要取食對(duì)象。此外，引物還擴(kuò)增出了劍水蚤科等浮游動(dòng)物序列，這類動(dòng)物體型細(xì)小，大多數(shù)用肉眼看不見(jiàn)，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法難以鑒定，而高通量測(cè)序技術(shù)有不受消化作用限制且有極高的靈敏度和準(zhǔn)確性的優(yōu)點(diǎn)，能夠以更高的檢出率鑒別出傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)食性分析方法難以鑒別出的食物種類。Bradley［33］對(duì)美國(guó)西部地區(qū)羚羊地松鼠（Ammospermophilus leucurus）的食性研究發(fā)現(xiàn)，嚙齒類動(dòng)物美洲黃鼠（Spermophilus te?reticaudus）和食蝗鼠（Onychomys torridus）等的遺骸全年都在其胃中被發(fā)現(xiàn)；周宏力等［25］也在小興安嶺地區(qū)松鼠的糞便中發(fā)現(xiàn)含有鼠類毛樣及小型動(dòng)物骨骼。本研究在部分樣品中也檢測(cè)到鼠科（Muridae）動(dòng)物的存在，說(shuō)明紅腿長(zhǎng)吻松鼠會(huì)捕食一些小型脊椎動(dòng)物，此外還檢測(cè)到大量紅腿長(zhǎng)吻松鼠自身DNA序列，這些序列可能是取樣時(shí)刮到了其胃內(nèi)壁組織，導(dǎo)致在后續(xù)DNA提取中被大量檢出；另外可能是在DNA提取的過(guò)程中，自身基因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果的影響。類似的研究結(jié)果也在Deagle et al.［34］及徐靜靜等［15］的研究中被發(fā)現(xiàn)?？偠灾?，紅腿長(zhǎng)吻松鼠食性主要依賴于環(huán)境中食物的豐富度、種類及可利用程度，其食性也會(huì)隨著生境可獲得資源的不同而有所調(diào)整。

4. 2 雌雄紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成多樣性差異

不同性別動(dòng)物的食性差異反映動(dòng)物在不同生長(zhǎng)階段上對(duì)營(yíng)養(yǎng)的不同需要［35］。α 多樣性分析發(fā)現(xiàn)，不同性別紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性總體相似而在種類組成上略有差異，雌性的植物性食物的豐富度和多樣性均高于雄性，動(dòng)物性食物的豐富度亦如此。筆者解剖樣本時(shí)發(fā)現(xiàn)有妊娠情況，說(shuō)明秋季是紅腿長(zhǎng)吻松鼠的繁殖季，雌性為了在相對(duì)較小的領(lǐng)域內(nèi)維持生長(zhǎng)和繁殖的高能量消耗被迫拓寬食譜，也有可能是競(jìng)爭(zhēng)不敵雄性而導(dǎo)致擴(kuò)大范圍尋找食物，所以雌性樣本的食物組成多樣性更為豐富。

本研究初步揭示了黔北地區(qū)紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食物種類組成，為該物種營(yíng)養(yǎng)生態(tài)學(xué)研究積累了重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。同時(shí)，也證實(shí)了高通量測(cè)序技術(shù)在嚙齒類動(dòng)物食性研究中的可行性，為今后同類動(dòng)物的食性研究提供了方法借鑒。當(dāng)然，與傳統(tǒng)方法相比，高通量測(cè)序技術(shù)也存在一些不足之處：第一，高通量測(cè)序可能鑒定出額外的食物分類單元，因?yàn)槠潆y以區(qū)分食物是被直接攝食進(jìn)入腸胃中，還是動(dòng)物的二級(jí)進(jìn)食帶入導(dǎo)致被檢出［17］；第二，高通量測(cè)序結(jié)果也會(huì)受到多種因素的影響，如DNA的提取、PCR的擴(kuò)增、引物的選擇、序列分類學(xué)分配以及參考數(shù)據(jù)庫(kù)的完善程度等［36］。因此，想要更準(zhǔn)確全面地解析動(dòng)物食性特征，仍需與傳統(tǒng)的胃含物分析等多種食性研究方法相結(jié)合。即便如此，基于高通量測(cè)序的食性研究的分類精度遠(yuǎn)遠(yuǎn)比傳統(tǒng)的顯微組織法高，在一定范圍內(nèi)是一種既高效又精確的食性研究方法。由于樣本采集區(qū)域面積和野外數(shù)據(jù)積累時(shí)間有限，本研究尚無(wú)法全面反映紅腿長(zhǎng)吻松鼠的食性及其季節(jié)變化，將在后續(xù)工作中繼續(xù)加強(qiáng)更長(zhǎng)時(shí)間跨度和地理尺度的數(shù)據(jù)積累，從而獲得更加準(zhǔn)確全面的紅腿長(zhǎng)吻松鼠食物組成信息。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 初紅軍， 蔣志剛， 蘭文旭， 等. 蒙古野驢、鵝喉羚和家畜的食物重疊［J］. 動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2008， 54（6）： 941-954.

CHU H J， JIANG Z G， LAN W X， et al. Dietary overlap amongkulan Equus hemionus， goitered gazelle Gazella subgutturosa andlivestock［J］. Acta Zoologica Sinica， 2008， 54（6）： 941-954.

［2］ 崔多英， 劉振生， 王小明， 等. 賀蘭山馬鹿冬季食性分析［J］.動(dòng)物學(xué)研究， 2007， 28（4）：383-388.

CUI D Y， LIU Z S， WANG X M， et al. Winter food-habits of reddeer （Cervus elaphus alxaicus） in Helan Mountains， China［J］.Zoological Research， 2007， 28（4）：383-388.

［3］ 尹華寶， 余冠軍， 王貴林， 等. 食肉目動(dòng)物食性研究方法［J］.安徽大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2008， 32（1）： 90-94.

YIN H B， YU G J， WANG G L， et al. Studying methods of carni?vore food habit［J］. Journal of Anhui University （Natural ScienceEdition）， 2008， 32（1）： 90-94.

［4］ 殷寶法， 淮虎銀， 張鐿鋰， 等. 可可西里地區(qū)藏羚羊、藏原羚和藏野驢的營(yíng)養(yǎng)生態(tài)位［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)， 2007， 18（4）：766-770.

YIN B F， HUAI H Y， ZHANG Y L， et al. Trophic niches of Pan?tholops hodgsoni， Procapra picticaudata and Equus kiang inKekexili region［J］. Chinese Journal of Applied Ecology， 2007，18（4）： 766-770.

［5］ 雍仲禹， 郭聰， 張美文， 等. 嚙齒動(dòng)物食性研究的意義及方法評(píng)述［J］. 生態(tài)學(xué)雜志， 2011， 30（11）： 2637-2645.

YONG Z Y， GUO C， ZHANG M W， et al. Significance and meth?odology of rodent’s food habit research： a review［J］. ChineseJournal of Ecology， 2011， 30（11）： 2637-2645.

［6］ 魏爽， 梁振玲， 滕威，等. 闊葉紅松林中花鼠的食物組成及取食偏好［J］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2023， 44（3）： 506-514.

WEI S， LIANG Z L， TENG W， et al. Food composition and feed?ing preference of chipmunks in a broadleaved red pine forest［J］.Chinese Journal of Wildlife， 2023， 44（3）： 506-514.

［7］ SMITH A T， 解焱. 中國(guó)獸類野外手冊(cè)［M］. GEMMA F， 繪.長(zhǎng)沙： 湖南教育出版社， 2009： 53.

SMITH A T， XIE Y. A guide to the mammals of China［M］.GEMMA F， illus. Changsha： Hunan Education PublishingHouse， 2009： 53.

［8］ 蔡延芳， 張海波， 胡燦實(shí)，等. 貴州麗松鼠亞科動(dòng)物資源調(diào)查［J］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2018， 39（3）： 529-535.

CAI Y F， ZHANG H B， HU C S， et al. A survey of animal re?sources of Callosciurinae in Guizhou Province［J］. Chinese Jour?nal of Wildlife， 2018，39（3）： 529-535.

［9］ 叢海燕. 基于線粒體全基因組的松鼠科系統(tǒng)演化分析及不同基因的表現(xiàn)力評(píng)估［D］. 濟(jì)南： 山東大學(xué)， 2016.

CONG H Y. Phylogenetic study of Sciuridae based on completemitochondrial genome and evaluation of phylogenetic performanceof different genes［D］. Jinan： Shandong University， 2016.

［10］ LI S， YU F H， YANG S， et al. Molecular phylogeny of five spe?cies of Dremomys （Rodentia： Sciuridae）， inferred from cyto?chrome b gene sequences［J］. Zoologica Scripta， 2008， 37（4）：349-354.

［11］ 粟海軍， 李光容， 陳光平，等. 貴州寬闊水自然保護(hù)區(qū)野生動(dòng)物紅外相機(jī)調(diào)查初報(bào)［J］. 獸類學(xué)報(bào)， 2018， 38（2）： 221-229.

SU H J， LI G R， CHEN G P， et al. A preliminary report on wild?life camera-trapping monitoring in Kuankuoshui National NatureReserve， Guizhou Province［J］. Acta Theriologica Sinica，2018， 38（2）： 221-229.

［12］ 韓克國(guó)， 李凱， 孫婧， 等. 基于紅外相機(jī)技術(shù)對(duì)文山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)老君山片區(qū)地棲鳥獸多樣性的調(diào)查［J］. 獸類學(xué)報(bào)， 2023， 43（1）： 89-101.

HAN K G， LI K， SUN J， et al. Diversity of birds and mammalsin Laojunshan region， Wenshan National Nature Reserve basedon infrared cameras［J］. Acta Theriologica Sinica， 2023， 43（1）： 89-101.

［13］ 鄭榮泉， 鮑毅新. 有蹄類食性研究方法及研究進(jìn)展［J］. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 2004， 24（7）： 1532-1539.

ZHENG R Q， BAO Y X. Study methods and procedures for un?gulate food habits［J］. Acta Ecologica Sinica， 2004， 24（7）：1532-1539.

［14］ 張蕎蕎， 孫飛達(dá)， 霍霏，等. 草地嚙齒動(dòng)物食性的影響因素及研究方法綜述［J］. 中國(guó)草地學(xué)報(bào)， 2023， 45（8）： 129-138.

ZHANG Q Q， SUN F D， HUO F， et al. Review on influencingfactors and research methods of grassland rodent feeding habits［J］. Chinese Journal of Grassland， 2023， 45（8）： 129-138.

［15］ 徐靜靜， 馮廣朋， 張濤， 等. 基于高通量測(cè)序的長(zhǎng)江口中華絨螯蟹雌蟹食性分析［J］. 水產(chǎn)科學(xué)， 2023， 42（1）： 1-10.

XU J J， FENG G P， ZHANG T， et al. Diet composition andfeeding habits of female Chinese mitten crab Eriocheir sinensis inthe Yangtze River Estuary based on high-throughput sequencing［J］. Fisheries Science， 2023， 42（1）： 1-10.

［16］ 邵昕寧， 宋大昭， 黃巧雯， 等. 基于糞便DNA及宏條形碼技術(shù)的食肉動(dòng)物快速調(diào)查及食性分析［J］. 生物多樣性， 2019，27（5）： 543-556.

SHAO X N， SONG D Z， HUANG Q W， et al. Fast surveys andmolecular diet analysis of carnivores based on fecal DNA and me?tabarcoding［J］. Biodiversity Science， 2019， 27（5）： 543-556.

［17］ 彭步青， 陶玲， 李靖，等. 基于DNA宏條形碼研究四川老君山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)6種同域共存小型哺乳動(dòng)物的食性［J］.生物多樣性， 2023， 31（4）： 76-89.

PENG B Q， TAO L， LI J， et al. DNA metabarcoding dietaryanalysis of six sympatric small mammals at the Laojunshan Na?tional Nature Reserve， Sichuan Province［J］. Biodiversity Sci?ence， 2023， 31（4）： 76-89.

［18］ 吳鵬， 王騰， 劉永，等. 高通量測(cè)序分析西沙晉卿島兩種草食性魚類對(duì)大型海藻的攝食差異［J］. 生態(tài)學(xué)雜志， 2023， 42（6）： 1509-1516.

WU P， WANG T， LIU Y， et al. Macroalgal consumption by twoherbivorous coral-reef fish species from Jinqing Island，Xisha［J］. Chinese Journal of Ecology， 2023， 42（6）： 1509-1516.

［19］ 劉剛， 李皓， 吳自有， 等. 基于DNA條形碼分析大鴇繁殖期動(dòng)物性食物［J］. 動(dòng)物學(xué)雜志， 2021， 56（3）： 405-416.

LIU G， LI H， WU Z Y， et al. Animal derived diet of great bus?tard in the breeding season based on DNA barcoding［J］. Chi?nese Journal of Zoology， 2021， 56（3）： 405-416.

［20］ 孫鵬， 凌建忠， 張輝， 等. 基于高通量測(cè)序的象山港海域黑鯛（Acanthopagrus schlegelii）食性分析［J］. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 2021，41（3）： 1221-1228.

SUN P， LING J Z， ZHANG H， et al. Diet composition and feed?ing habits of black sea bream （Acanthopagrus schlegelii） inXiangshan Bay based on high-throughput sequencing［J］. ActaEcologica Sinica， 2021， 41（3）： 1221-1228.

［21］ 喻理飛， 陳光平， 余登利. 貴州寬闊水國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)生物多樣性保護(hù)研究［M］. 北京： 中國(guó)林業(yè)出版社， 2018： 41-47；27-30.

YU L F， CHEN G P， YU D L. Biodiversity and conservation inKuankuoshui National Nature Reserve， Guizhou， China［M］.Beijing： China Forestry Publishing House， 2018： 41-47；27-30.

［22］ 戴仁懷， 李子忠，金道超. 寬闊水景觀昆蟲［M］. 貴陽(yáng)： 貴州科技出版社， 2012： 1-2.

DAI R H， LI Z Z， JIN D C. Insects from Kuankuoshui land?scape ［M］. Guiyang： Guizhou Science and Technology Publish?ing House， 2012： 1-2.

［23］ 楊舒晗， 蔡延芳， 王野影， 等. 貴州茂蘭喀斯特地區(qū)隱紋花松鼠秋季食性分析［J］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2022， 43（2）：337-344.

YANG S H， CAI Y F， WANG Y Y， et al. Autumn diet analysison Swinhoe’s striped squirrel （Tamiops swinhoei） in MaolanKarst area， Guizhou Province，China［J］. Chinese Journal ofWildlife， 2022， 43（2）： 337-344.

［24］ DEAGLE B E， THOMAS A C， MCINNES J C， et al. Countingwith DNA in metabarcoding studies： How should we convert se?quence reads to dietary data？［J］. Molecular Ecology， 2019， 28（2）： 391-406.

［25］ 周宏力， 張曉嵐. 大、小興安嶺松鼠的食性［J］. 東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2003， 31（3）： 44-46.

ZHOU H L， ZHANG X L. The food habit of red squirrels in Dax?ing’an Mt. and Xiaoxing’an Mt.［J］. Journal of Northeast For?estry University， 2003， 31（3）： 44-46.

［26］ 金志民， 劉鑄， 李殿偉，等. 黑龍江省東南部林區(qū)6種嚙齒動(dòng)物食性分析［J］. 畜牧與飼料科學(xué)， 2011， 32（5）： 11-13.

JIN Z M， LIU Z， LI D W， et al. Analysis on the feeding habitsof six kinds of rodents in the southeast forest region of Heilongji?ang Province［J］. Animal Husbandry and Feed Science， 2011，32（5）： 11-13.

［27］ 蔡紅霞， 冉江洪， 張家平，等. 赤腹松鼠危害季節(jié)性變化與食性的初步探討［J］. 四川林業(yè)科技， 2001， 22（3）： 21-24.

CAI H X， RAN J H， ZHANG J P， et al. Preliminary study onthe seasonal changes of red-bellied squirrels （Callosciurus ery?thraeus） damage and their feeding habits［J］. Journal of SichuanForestry Science and Technology， 2001，22（3）： 21-24.

［28］ 徐吉偉， 楊國(guó)榮， 黃彬， 等. 植物營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)草原嚙齒動(dòng)物的影響［J］. 草業(yè)科學(xué)， 2014， 31（11）： 2148-2154.

XU J W， YANG G R， HUANG B， et al. Effects of plant nutri?ents on grassland rodents［J］. Pratacultural Science， 2014， 31（11）： 2148-2154.

［29］ 劉偉， 楊維康， 徐文軒. 蒙古野驢的秋季食性分析［J］. 獸類學(xué)報(bào)， 2008，28（1）： 33-36.

LIU W， YANG W K， XU W X. Food habits of the kulan （Equushemionus）in autumn［J］. Acta Theriologica Sinica， 2008，28（1）： 33-36.

［30］ 郭建榮. 山西蘆芽山自然保護(hù)區(qū)巖松鼠生態(tài)的初步觀察［J］.四川動(dòng)物， 2003， 22（3）： 171-172.

GUO J R. Preliminary observation on the ecology of Sciurotamiasdavidianus in Luya Mountain Nature Reserve， Shanxi Province［J］. Sichuan Journal of Zoology， 2003， 22（3）： 171-172.

［31］ 羅蓉. 貴州獸類志［M］. 貴陽(yáng)： 貴州科技出版社， 1993：200-202.

LUO R. The mammalian fauna of Guizhou ［M］. Guiyang： Gui?zhou Science and Technology Publishing House， 1993： 200-202.

［32］ EMLEN J M. The role of time and energy in food preference［J］.The American Naturalist， 1966， 100（916）： 611-617.

［33］ BRADLEY W G. Food habits of the antelope ground squirrel insouthern Nevada［J］. Journal of Mammalogy， 1968， 49（1）： 14-21.

［34］ DEAGLE B E， JARMAN S N， PEMBERTON D， et al. Geneticscreening for prey in the gut contents from a giant squid （Archit?euthis sp.）［J］. Journal of Heredity， 2005， 96（4）： 417-423.

［35］ 陳小勇， 王建平， 龔大潔. 蘭州北山三種蜥蜴春季食性分析［J］. 動(dòng)物學(xué)雜志， 1997， 32（5）： 13-18.

CHEN X Y， WANG J P， GONG D J. Diet of three species of liz?ard in the spring in Lanzhou［J］. Chinese Journal of Zoology，1997， 32（5）： 13-18.

［36］ 王雪芹， 王光華， 喬飛，等. 高通量測(cè)序及其在食物網(wǎng)解析中的應(yīng)用進(jìn)展［J］. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 2017， 37（8）： 2530-2539.

WANG X Q， WANG G H， QIAO F， et al. Progress on highthroughputsequencing and its applications in food web analysis［J］. Acta Ecologica Sinica， 2017， 37（8）： 2530-2539.

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（32060307）