摘要：為探究植物生長(zhǎng)延緩劑B9對(duì)馬鈴薯試管大薯的影響，以不同品種的馬鈴薯脫毒苗為試驗(yàn)材料，在光照強(qiáng)度2 000 Lx 、光周期16 h·d-1，培養(yǎng)溫度 22 ℃的培養(yǎng)條件下，以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別設(shè)置4%、6%、8%、10%濃度的蔗糖，以3%濃度蔗糖作對(duì)照，對(duì)比不同蔗糖濃度誘導(dǎo)效果后，確定誘導(dǎo)蔗糖濃度，設(shè)置5個(gè)B9濃度2 mg·L-1、4 mg·L-1 、6 mg·L-1 、8 mg·L-1、10 mg·L-1，測(cè)定試管薯的平均薯重、最大薯重，統(tǒng)計(jì)大薯率，測(cè)定試管薯粗蛋白、還原糖與維生素C。結(jié)果表明：適合誘導(dǎo)馬鈴薯試管大薯的培養(yǎng)基為MS+蔗糖8%+ B9（6 mg·L-1），誘導(dǎo)30 d，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13四個(gè)品種的平均單薯重分別為0.78 g、0.76 g、0.64 g、0.47 g，最大薯重分別達(dá)到0.91 g、0.84 g、0.78 g、0.68 g。

關(guān)鍵詞：馬鈴薯；試管大薯；蔗糖；B9

Effect of plant growth retarder B9 on microtuber formation of different varieties of potato

LI Tingting，Liang Shuang，MaYan，TengWei，ZhanGuomin，GengWei

（１Jilin Vegetable and Flower Science Research Institute，Changchun，Jilin130033；2 Liuhe County Development and Reform Bureau， Tonghua， Jilin， 135300）

Abstract： In order to investigate the effect of plant growth retarder B9 on potato in vitro， different varieties of potato virude-free seedlings were used as experimental materials. Under the culture conditions of light intensity 2000 Lx， photcycle 16 h·d-1， culture temperature 22℃， MS medium was used as the base medium， and sucrose concentrations of 4%， 6%， 8% and 10% were set， respectively. After comparing the induction effect of different sucrose concentrations with 3% sucrose concentration， the induced sucrose concentration was determined. Six B9 concentrations of 2mg·L-1， 4mg ·L-1， 6mg ·L-1， 8mg ·L-1 and 10mg ·L-1 were set up to determine the average and maximum potato weight of test-tube potato and calculate the large potato rate. Determination of crude protein， reducing sugar and vitamin C in vitro. The results show that： The medium suitable for inducing large potato in vitro was MS+ 8% sucrose + B9 （6mg·L-1）. After 30 days of induction， the average single potato weight of Longfeng Black Beauty， Feuritar， Yougin and Yantua 13 varieties was 0.78g， 0.76g， 0.64g and 0.47g， respectively. The maximum potato weight was 0.91g， 0.84g， 0.78g and 0.68g， respectively.

Keywords： Potato；Big microtuber；Sucrose；B9

試管薯一般指用脫毒苗在試管或組培瓶中誘導(dǎo)生產(chǎn)的薯塊。馬鈴薯試管薯生產(chǎn)環(huán)境易于調(diào)控，減少了病毒與病害的感染幾率，確保了脫毒種薯的質(zhì)量?，F(xiàn)有馬鈴薯試管薯除了用于種質(zhì)資源的保存[1]，更方便地應(yīng)用于交流與運(yùn)輸、貯藏與種植[2]。前人研究[3-5]中試管薯的單薯重多在0.02 ～0.3 g，存在產(chǎn)量低、結(jié)薯塊莖小的問(wèn)題，制約了試管薯的推廣。因此，提高試管薯的大薯率，增大薯塊重量對(duì)馬鈴薯種質(zhì)資源的保存，脫毒種薯的推廣有重大意義[2]。

前人研究結(jié)果[6-7]表明脫毒試管薯的形成與發(fā)育受多種因素的影響，如苗齡、蔗糖濃度、光照、外源激素、基因型、植物生長(zhǎng)延緩劑等。黨玉麗等[4]研究發(fā)現(xiàn)試管薯的形成和發(fā)育與苗齡有關(guān)，‘東農(nóng)303’選取苗齡為60 d的試管苗轉(zhuǎn)入暗培養(yǎng)60 d得到的試大薯率最高。李婉琳等[8]研究表明‘麗薯6號(hào)’誘導(dǎo)試管薯的最適苗齡為80 d。李婉琳等[8]在脫毒苗的繼代擴(kuò)繁研究中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng) 60 d后少許葉片開始發(fā)黃。金石誠(chéng)等[6]研究中添加4%蔗糖濃度即可完成試管結(jié)薯?；豇P蘭等[9]研究表明培育脫毒壯苗后，轉(zhuǎn)入含有8%蔗糖的MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基，可誘導(dǎo)試管薯的形成。陳春伶等[5]研究表明培養(yǎng)基中添加10%蔗糖有利于試管薯的誘導(dǎo)。前人研究表明高濃度蔗糖有利于試管薯的形成，但是，不同品試管薯所需蔗糖濃度不同。因此，本試驗(yàn)進(jìn)行不同濃度蔗糖對(duì)試管薯影響的對(duì)比。

B9（N-甲胺基琥珀酰胺酸）又名Alar，植物生長(zhǎng)延緩劑，可抑制植物體內(nèi)源激素的生物合成，調(diào)控根系的發(fā)育，調(diào)節(jié)植株生長(zhǎng)，常用于馬鈴薯種質(zhì)試管苗的保存，有利于試管薯塊莖膨大[10-12]。何靜波等[1]研究表明B9對(duì)試管結(jié)薯的適宜濃度為5～10 mg·L-1。李鳳云[13]研究表明馬鈴薯‘克新8號(hào)’培養(yǎng)基中添加10 mg·L-1B9有利于試管結(jié)薯。B9在試管薯誘導(dǎo)中的添加濃度存在差異，影響B(tài)9的應(yīng)用。因此，試驗(yàn)選擇4個(gè)品種脫毒苗為材料，研究培養(yǎng)基中B9濃度對(duì)試管薯的影響。以期找到誘導(dǎo)試管大薯適宜的B9濃度。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用馬鈴薯脫毒苗品種有費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13、隆豐黑美人、東農(nóng)310、夏波蒂、早大白。培養(yǎng)基為MS+蔗糖3% +瓊脂7 g·L-1（pH值5.8）。接種方式為在無(wú)菌條件下每瓶接種帶1個(gè)腋芽莖段15個(gè)。培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2 000 Lx 、光照時(shí)間16 h/d、溫度22 ℃，培養(yǎng)28 d，為誘導(dǎo)試管薯提供來(lái)源一致的脫毒苗。

1.2 試驗(yàn)處理

1.2.1 不同品種調(diào)查

試驗(yàn)選用費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13、隆豐黑美人、東農(nóng)310、早大白、夏波蒂7個(gè)品種，調(diào)查7個(gè)品種馬鈴薯的熟性、生育期、薯皮顏色、薯肉顏色以及品種特性，培養(yǎng)28 d后的脫毒苗在超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入MS+3%蔗糖液體培養(yǎng)基30 ml誘導(dǎo)結(jié)薯30 d，記錄各個(gè)品種試管薯結(jié)薯數(shù)。

1.2.2 不同蔗糖濃度的添加

試驗(yàn)設(shè)計(jì)MS培養(yǎng)基中添加的不同濃度蔗糖作為誘導(dǎo)結(jié)薯培養(yǎng)基，蔗糖濃度梯度為4%、6%、8%、10%，處理誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+（4%、6%、8%、10%）蔗糖（pH值5.8），以MS+3%蔗糖（pH值5.8）為對(duì)照。選用費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13、隆豐黑美人4個(gè)品種脫毒苗培養(yǎng)28 d后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入30 ml液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)結(jié)薯30 d，記錄蔗糖對(duì)試管薯結(jié)薯的影響。

1.2.3 不同濃度B9的添加

以MS+8%蔗糖（pH值5.8）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在其中添加濃度分別為2 mg/L、4 mg·L-1、6 mg·L-1、8 mg·L-1、10 mg·L-1的 B9，以不添加B9為對(duì)照，每個(gè)處理10瓶，3次重復(fù)。選用費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13、隆豐黑美人4個(gè)品種脫毒苗培養(yǎng)28 d后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)倒入30 ml液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)結(jié)薯30 d后記錄不同激素濃度對(duì)試管薯結(jié)薯的影響。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

測(cè)量試管平均單株結(jié)薯數(shù)、平均單薯重、最大薯重，測(cè)定試管薯粗蛋白、還原糖與維生素C指標(biāo)[6]。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 與DPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種試管薯比較

對(duì)7個(gè)馬鈴薯品種特性調(diào)查如表1，其中費(fèi)物瑞它生育期65 d，早熟品種，黃皮黃肉，中抗環(huán)腐病、青枯病、適宜鮮食；尤金生育期72 d，薯肉黃色，中抗花葉病毒??；延薯13生育期72 d，薯皮黃色，薯肉黃色，抗X、Y病毒病，適宜鮮食；黑美人生育期79 d，中早熟品種，紫皮紫肉，維生素含量高。且這4個(gè)品種較其余3個(gè)品種試管薯結(jié)薯效果好，品種特性有一定差異。對(duì)7個(gè)品種馬鈴薯誘導(dǎo)結(jié)薯培養(yǎng)后計(jì)數(shù)單株結(jié)薯數(shù)，其中費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13、隆豐黑美人4個(gè)品種平均單株結(jié)薯數(shù)均超過(guò)0.5個(gè)/株，較其余3個(gè)品種平均單株結(jié)薯數(shù)多。綜合考慮品種特性與結(jié)薯表現(xiàn)，所以選用費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13與隆豐黑美人4個(gè)品種開展蔗糖與激素對(duì)試管薯的影響試驗(yàn)。

2.2 不同蔗糖濃度對(duì)試管薯結(jié)薯數(shù)與薯重比較

圖1為在培養(yǎng)基中添加不同濃度蔗糖對(duì)4個(gè)品種脫毒苗誘導(dǎo)30 d后的平均單薯重。由圖可知不同品種試管薯對(duì)蔗糖濃度敏感程度不同，但是影響趨勢(shì)相同，均為正相關(guān)，即同一品種試管薯平均單薯重隨著蔗糖濃度的升高而增加，同一品種各處理下平均單薯重與對(duì)照差異性顯著。在8%蔗糖濃度處理下，4個(gè)品種的平均單薯重與10%處理下差異不顯著，與其余處理差異性顯著。

圖2為在培養(yǎng)基中添加不同濃度蔗糖對(duì)4個(gè)品種脫毒苗誘導(dǎo)30 d后的單株平均結(jié)薯數(shù)。由圖可知同一品種試管薯單株平均結(jié)薯數(shù)隨著蔗糖濃度的升高而增加，同一品種各處理下平均單株結(jié)薯數(shù)與對(duì)照差異性顯著。在8%蔗糖濃度處理下，4個(gè)品種的單株平均結(jié)薯數(shù)與10%處理下差異不顯著，與其余處理差異性顯著。

通過(guò)不同濃度蔗糖對(duì)試管薯平均單薯重與平均單株結(jié)薯數(shù)比較后得知，不同品種對(duì)蔗糖濃度的敏感程度不同，但影響趨勢(shì)相同。在4%～10%濃度范圍內(nèi)，蔗糖與試管薯薯重呈正相關(guān)，蔗糖與單株平均結(jié)薯數(shù)也呈正相關(guān)，但是處理8%濃度下平均單株結(jié)薯數(shù)與平均單薯重與10%差異不顯著，所以在試管薯激素誘導(dǎo)試驗(yàn)中蔗糖濃度采用8%。

2.3 不同濃度B9對(duì)試管薯的影響

2.3.1 不同濃度B9對(duì)試管薯重量的影響

由圖1可知，隨著培養(yǎng)基中添加B9濃度的升高，4個(gè)品種的馬鈴薯試管薯平均單薯重與最大薯重均呈單峰曲線型變化。隨著B9濃度的升高4個(gè)品種的平均單薯重與最大薯重呈上升趨勢(shì)，在濃度為6 mg·L-1時(shí)，平均單薯重與最大薯重均達(dá)到峰值，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13平均單薯重分別為0.78 g、0.76 g、0.64 g、0.47 g；最大薯重分別為0.91 g、0.84 g、0.78 g、0.68 g。隨著B9濃度的繼續(xù)升高，4個(gè)品種的平均單薯重與最大薯重開始下降，由此可知，誘導(dǎo)試管薯培養(yǎng)基B9的最佳添加濃度為6 mg·L-1。

2.3.2 不同濃度B9對(duì)試管薯品質(zhì)的影響

對(duì)不同B9濃度處理下4個(gè)品種試管薯的還原糖、粗蛋白與Vc含量進(jìn)行測(cè)定。

由圖3可知，添加不同濃度B9對(duì)同一品種試管薯的還原糖影響不大，同一品種不同B9濃度處理下對(duì)照CK略微有提高，但是B9濃度為6 mg·L-1時(shí)，還原糖含量最高，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13還原糖含量分別為7.32 mg/kg、3.76 mg/kg、5.49 mg/kg、5.85 mg/kg。

由圖3可知，添加不同濃度B9對(duì)同一品種試管薯的粗蛋白影響不大，同一品種不同B9濃度處理下對(duì)照CK有微小變化，但是B9濃度為6 mg·L-1時(shí)，粗蛋白含量最高，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13還原糖含量分別為2.56%、1.58%、2.12%、1.95%。

由圖4可知，添加不同濃度B9對(duì)同一品種試管薯的維生素C影響不大，同一品種不同B9濃度處理下對(duì)照CK有微小變化，但是B9濃度為6 mg·L-1時(shí)，維生素C含量最高，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13維生素C含量分別為22.54 mg/100g、15.14 mg/100g、15.88 mg/100g、15.21 mg/100g。

對(duì)不同B9濃度處理下4個(gè)品種試管薯的品質(zhì)進(jìn)行測(cè)定與分析，結(jié)果表明在試管薯結(jié)薯培養(yǎng)基中添加激素B9對(duì)試管薯還原糖、粗蛋白與Vc含量影響較小。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

馬鈴薯植株塊莖的形成是相關(guān)遺傳基因在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中順序表達(dá)的結(jié)果 [14-16]，而試管薯的形成受多種因素的影響[3，7]，本研究中，4個(gè)品種脫毒苗在光照強(qiáng)度2 000 Lx、光周期16 h·d-1、培養(yǎng)溫度 22℃條件下培養(yǎng)28 d后再倒入液體誘導(dǎo)結(jié)薯培養(yǎng)基誘導(dǎo)30 d后完成結(jié)薯，推測(cè)此時(shí)的脫毒苗已完成塊莖膨大增重。至于試管薯的形成機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究[16]。在誘導(dǎo)結(jié)薯培養(yǎng)基中添加8%濃度的蔗糖與添加3%蔗糖相比可顯著增加試管薯單薯重與單株結(jié)薯數(shù)，與霍鳳蘭[9]的“加入濃度為8%蔗糖溶液促進(jìn)誘導(dǎo)試管薯效果”的結(jié)論相一致。李方等[10]研究表明B9可以抑制試管苗的徒長(zhǎng)，得到矮壯苗用來(lái)進(jìn)一步誘導(dǎo)種薯的形成。本研究中培養(yǎng)基添加B9有利于試管薯塊莖的膨大，與李鳳云[13]的“B9在試管薯薯塊直徑和重量的增加方面有顯著效果”結(jié)論相一致，本研究中在培養(yǎng)基中添加6 mg·L-1的B9效果最好，最適添加濃度在何靜波等[1]研究試管薯誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加5～10 mg·L-1B9的濃度范圍內(nèi)，并且進(jìn)一步精確了誘導(dǎo)試管薯培養(yǎng)基中的B9濃度，節(jié)約了生產(chǎn)成本。

3.2 結(jié)論

本研究探究了植物生長(zhǎng)延緩劑B9對(duì)馬鈴薯試管薯形成的影響，測(cè)定了四個(gè)品種試管薯的平均薯重、最大薯重，統(tǒng)計(jì)大薯率，測(cè)定試管薯粗蛋白、還原糖與維生素C，結(jié)果表明，隆豐黑美人、費(fèi)物瑞它、尤金、延薯13四個(gè)品種馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2 000 Lx、光照周期16 h·d-1、溫度22℃，培養(yǎng)28 d后倒入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蔗糖8% + B9（6 mg·L-1），誘導(dǎo)30 d。

參考文獻(xiàn)

[1] 何靜波，彭麗萍. B9對(duì)無(wú)病毒馬鈴薯試管薯形成的影響[J].云南植物研究，1989， 11（3）： 355-357.

[2] 連勇.馬鈴薯脫毒種薯生產(chǎn)技術(shù)[M].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，2001：44-53.

[3] 金順福，姜成模，玄春吉.馬鈴薯脫毒試管薯工廠化生產(chǎn)技術(shù)及應(yīng)用研究[J].中國(guó)馬鈴薯， 2004， 18（6）： 340-343.

[4] 黨玉麗，劉忠玲，寧愛民，宛新生，周占芳.不同苗齡及碳源對(duì)馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)的影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2004， 38（3）： 292-295.

[5] 陳春伶，徐美隆，李永華.馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)體系研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2012，28（27）： 53-56.

[6] 金石誠(chéng)，陳亮，蔡興奎.馬鈴薯中薯5號(hào)和鄂馬鈴薯一號(hào)轉(zhuǎn)苗節(jié)數(shù)及苗齡對(duì)試管種薯形成的影響[J].種子，2007，26（7）： 17-21.

[7] 金明石，嚴(yán)英哲，張健.馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)影響因素分析[J].中國(guó)馬鈴薯，2012， 26（6）： 332-335.

[8] 李婉琳，郭華春，彭麗，楊亞嵐.蔗糖濃度及苗齡對(duì)馬鈴薯新品種‘麗薯6號(hào)’試管薯誘導(dǎo)的效果 [J].中國(guó)馬鈴薯，2013， 27（2）：72-76.

[9] 霍鳳蘭，欒清業(yè)，尹玉花.蔗糖濃度和光照對(duì)馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)的影響[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技， 2009，11： 3-5.

[10] 李方，陳昆松，夏宜平，裘文達(dá). B9和PP333對(duì)馬鈴薯試管苗生長(zhǎng)的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2001，13（2）：67-71.

[11] Gao X， Wang F， Yang Q， et al. Theobroxide Triggers Jasmonic Acid Production to Induce Potato Tuberization in vitro[J]. Plant Growth Regulation， 2005， 47（1）：39-45.

[12] 黃萍，馬朝宏，顏謙.植物生長(zhǎng)延緩劑B9對(duì)馬鈴薯試管苗生長(zhǎng)的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2011，24（5）： 1719-1721.

[13] 李鳳云.不同外源誘導(dǎo)劑對(duì)克新8號(hào)馬鈴薯微型薯誘導(dǎo)效果的影響[J].中國(guó)馬鈴薯， 2001， 15 （5）： 296-298.

[14] 劉夢(mèng)蕓，蒙美蓮，門福義，胡志全.光周期對(duì)馬鈴薯塊莖形成的影響及對(duì)激素的調(diào)節(jié)[J].馬鈴薯雜志， 1994， 8（4）：193-197.

[15] 張小川，張建虎，郭志乾，頡瑞霞;張國(guó)輝;張新學(xué);余幫強(qiáng);李玉蓮.光照周期對(duì)馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2017， （12）： 65.

[16] 徐欣，連勇.馬鈴薯塊莖發(fā)育機(jī)理的研究[J].馬鈴薯雜志， 1997， 11（2）： 115-118.