【摘要】目的：了解貴州省范圍內(nèi)萬年青的分布狀況、生長環(huán)境及質(zhì)量現(xiàn)狀，建立萬年青質(zhì)量控制方法，提高藥材質(zhì)量，保護民族藥資源，促進其可持續(xù)發(fā)展。方法：考證萬年青的生長環(huán)境分布、性狀特征，建立顯微鑒別方法、薄層色譜鑒別方法，并測定水分、總灰分、浸出物。結(jié)果：明確了萬年青的性狀特征，初步建立了萬年青的顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分、總灰分及浸出物的測定方法。結(jié)論：萬年青的性狀特征、顯微特征明顯，薄層色譜斑點清晰、分離效果及重現(xiàn)性好，水分、總灰分、浸出物測定方法可行，可為今后規(guī)范萬年青藥材資源及質(zhì)量評價提供科學依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】萬年青；顯微鑒別；薄層色譜鑒別；質(zhì)量標準

【中圖分類號】R927.2；R284.1

【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）21-0037-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.21.zgmzmjyyzz202421008

Study on the Quality Standard of Rohdea Japonica（Thunb.）Roth

LI TianyouCAI Yuandong

Bijie inspection and testing center of administration for maeket supervision，Bijie 551700， China

Abstract：Objective To understand the distribution， growth environment and quality status of Rohdea japonica（Thunb.）Roth in Guizhou province， establish quality control methods of Rohdea japonica（Thunb.）Roth， improve the quality of medicinal materials， protect the resources of ethnic medicine， and promote its sustainable development.Methods To investigate the growth environment distribution and character characteristics of Rohdea japonica（Thunb.）Roth， establish a microscopic identification method， TLC identification method， and determination of water， total ash， extract.Results The characteristics of Rohdea japonica（Thunb.）Roth were defined， and the methods for microscopic identification， TLC identification， determination of moisture， total ash and extracts were established. Conclusion The characteristics and microscopic characteristics of Rohdea japonica（Thunb.）Roth are obvious， the spots of thin layer chromatography are clear， the separation effect is good and the reproducibility is good， the determination method of water， total ash and extract is feasible， which can provide scientific basis for the standardization of medicinal resources and quality evaluation of Rohdea japonica（Thunb.）Roth.

Keywords：Rohdea japonica（Thunb.）Roth; Microscopic Identification; TLC Identification; Quality Standard

萬年青為百合科植物萬年青Rohdea japonica（Thunb.）Roth的干燥根莖。冬季采挖，除去莖葉及須根，洗凈，干燥或鮮用^［1］。萬年青為貴州省少數(shù)民族用藥，具有清熱解毒、強心利尿、涼血止血的功效，主治咽喉腫痛、瘡瘍腫毒、蛇蟲咬傷、心力衰竭、咯血、吐血、崩漏等^［1］。為了有效控制萬年青的質(zhì)量，保證民族藥用藥安全有效，本研究對萬年青生長環(huán)境、性狀特征等進行考證，建立了萬年青顯微特征鑒別、薄層色譜鑒別、水分、總灰分及浸出物的測定方法，為萬年青質(zhì)量標準的制定提供了參考，也為今后提高藥材質(zhì)量，促進民族用藥的可持續(xù)發(fā)展做出一定貢獻。

1材料與儀器

LEICA DM2500顯微照相系統(tǒng)、電熱恒溫水浴鍋、島津電子分析天平（AY120）以及常規(guī)顯微制片的載玻片、蓋玻片。水合氯醛、稀甘油、乙醇、石油醚、乙酸乙酯、異丙醇、甲醇、氨水、二氯甲烷、香草醛、純化水等試劑均為分析純。硅膠G預制板（青島海洋化工有限公司制造，批號：20171208）。本研究用樣品原植物臘葉標本經(jīng)原貴州省藥品檢驗所李揚老師鑒定為百合科植物萬年青Rohdea japonica（Thunb.）Roth，標本存放于畢節(jié)市市場監(jiān)督管理局檢驗檢測中心。樣品來源見表1。

2方法與結(jié)果

2.1草本考證據(jù)《中華本草》^［2］考證，萬年青始載于《履峻巖本草》，原名千年潤，按藥作部位分根莖、葉、花分別記載。在《本草綱目拾遺》《植物名實圖考》《全國中草藥匯編》《中藥大辭典》等著作中均有記載?！顿F州民間方藥集》^［3］萬年青［Rohdea japonica （Thunb.）Roth］，別名諸總管、冬不凋、癀藥等，全草入藥。《貴州中藥資源》^［4］萬年青［Rohdea japonica （Thunb.）Roth］，別名青龍膽，藥用部位為葉節(jié)、花、根。《貴州中草藥資源研究》^［1］萬年青［Rohdea japonica （Thunb.）Roth］，別名鐵扁擔、搜山虎，藥用部位為根、根莖，為貴州苗族、侗族用藥。通過銅仁市江口縣、凱里市、都勻市、貴陽市白云區(qū)、花溪區(qū)、安順市西秀區(qū)、六盤水市鐘山區(qū)、六枝特區(qū)、畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)、赫章縣、大方縣、威寧縣、納雍縣等地走訪調(diào)研情況來看，全省各地均有使用習慣，為我省少數(shù)民族用藥，藥用部位多為干燥或新鮮的根莖。綜上所述，本標準研究藥用部位為根莖。目前收載原植物為萬年青的有《江蘇省中藥材標準》（1989年版，干燥根莖）和《上海中藥材標準》（1994年版，干燥成熟果實）。

2.2生長環(huán)境及分布萬年青多栽培于庭院和村舍附近，常盆栽，或野生于陰濕的林下、山谷。全省各地以及長江流域中下游及其以南各省區(qū)均有分布。生長環(huán)境如圖1所示。

2.3性狀特征通過對采集的10批藥材樣品的大小、形狀、顏色、質(zhì)地、斷面等特征進行對比觀察和描述，該藥材的性狀鑒別特征如下：本品呈圓柱形，稍彎曲，長5～18 cm，直徑1～3 cm。表面灰黃色或灰褐色，皺縮，具密集的波狀環(huán)節(jié)，并散有圓點狀須根痕，偶殘留有長短不等的須根；頂端有時可見地上莖痕和葉基，呈淡灰褐色，硬紙質(zhì)。質(zhì)韌，折斷面不平坦，斷面類白色或淡棕色，散有黃色維管束斑點。氣微，味微苦、辛。性狀特征如圖2所示。

2.4鑒別

2.4.1顯微鑒別^［5］230通過對萬年青常規(guī)粉末制片，應用光學顯微鏡對其組織結(jié)構(gòu)、細胞形態(tài)、后含物等進行觀察、測量，其特征如下：本品粉末黃白色。草酸鈣針晶較多，單個或成束散在，或存于粘液細胞中，針晶多呈棱柱形，少數(shù)呈針狀，兩端尖銳，長40～110 μm，直徑4～13 μm。薄壁細胞較大，類圓形、類多角形，紋孔明顯。木栓細胞成片，淡黃色，呈多角形，或類方形，壁多微波狀，有時呈多層重疊狀。顯微特征如圖3所示。

2.4.2薄層色譜鑒別取編號wnq01-wnq06樣品粉末各1 g，加二氯甲烷25 mL，45 ℃水浴回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取編號wnq08樣品粉末1 g作為對照藥材，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗^［5］59，吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-氨水（4∶3∶2∶2∶0.8）溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%香草醛硫酸溶液，置105 ℃加熱至斑點顯色清晰。置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的斑點。結(jié)果分離效果較好，斑點較多且清晰。薄層色譜圖如圖4所示。

2.5水分測定按《中華人民共和國藥典》2020年版（通則0832）水分測定第二法進行^［5］114。10批樣品測定結(jié)果見表2。

2.6總灰分測定按《中華人民共和國藥典》2020年版（通則2302）總灰分測定法測定^［5］234。10批樣品測定結(jié)果見表2。

2.7浸出物測定按《中華人民共和國藥典》2020年版（通則2201）浸出物測定法測定^［5］232。分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇作為溶劑，采用熱浸法測定同一批萬年青浸出物含量，浸出物測定結(jié)果為：30%乙醇＞水＞70%乙醇＞95%乙醇。根據(jù)測定結(jié)果，用30%乙醇作溶劑，以熱浸法測定10批樣品，10批樣品測定結(jié)果見表2。

3討論

萬年青性狀特征及顯微特征明顯，在對萬年青橫切面顯微鑒別進行研究時，發(fā)現(xiàn)其硬度大且易粉碎，極不容易切片，故未作進一步研究。水分、總灰分、浸出物測定方法可行。因10批樣品酸不溶性灰分平均值為0.61%且每批樣品酸不溶性灰分均小于1.0%，無限度制定意義，故未作進一步研究。

薄層色譜鑒別分別考察了水、乙酸乙酯、乙醇、甲醇及二氯甲烷等不用溶劑的提取方法，對展開系統(tǒng)進行了優(yōu)化調(diào)整，也進行了方法學耐用性考察，所得結(jié)果斑點清晰、分離效果好、重現(xiàn)性好，說明所建立方法可行。因中國食品藥品檢定研究院目前沒有萬年青對照藥材標準物質(zhì)，故未建議列入標準正文，但可以為今后建立萬年青薄層色譜鑒別方法時提供參考依據(jù)。

查閱相關(guān)文獻，萬年青主要含強心苷類、螺甾烷類成分，還有脂肪酸等成分^［2］。強心苷類主要有萬年青苷（rhodexin）A、B、C、D等^［6］；螺甾烷類成分有萬年青皂苷元（rhodeasapogenin），異萬年青皂苷元（isorhodeasapogenin）等^［7］。

隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化與國際化，民族藥資源的開發(fā)、利用及其保護尤為重要。萬年青為貴州省內(nèi)少數(shù)民族常用藥，目前省內(nèi)相關(guān)標準未進行收載，為了能更好控制該藥材質(zhì)量和保證用藥安全，本研究可以為標準的制定提供一定的參考價值。

參考文獻

［1］何順志，徐文芬.貴州中草藥資源研究［M］.貴陽：貴州科技出版社，2007：744.

［2］國家中醫(yī)藥管理局，《中華本草》編委會.中華本草第8冊第二十二卷［M］.上海：上海科學技術(shù)出版社，1999：151-154.

［3］楊濟秋，楊濟中.貴州民間方藥集［M］.貴陽：貴州人民出版社，1978：455.

［4］貴州省中藥資源普查辦公室，貴州省中藥研究所.貴州中藥資源［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1992：895.

［5］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（四部）［S］. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：230，59，114，234，232.

［6］王國強.全國中草藥匯編（卷一）［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：35.

［7］南京中醫(yī)藥大學.中藥大辭典［M］.2版.上海：上海科學技術(shù)出版社，2006：211-213.

（收稿日期：2024-02-22編輯：陶希睿）