摘要：【目的】探究外源水楊酸（salicylic acid，SA）對NaCl脅迫下銀杏（Ginkgo biloba）的緩解機制，為解決鹽堿地區(qū)銀杏鹽害問題、擴大銀杏引種栽培、豐富鹽堿地區(qū)植物景觀提供理論依據(jù)?！痉椒ā恳?年生銀杏苗為試驗材料，采取盆栽試驗法，分別設(shè)定50（N1）、100（N2）和200（N3）mmol/L NaCl濃度和0.02（S1）、0.10（S2）和0.50（S3）mmol/L SA不同濃度混合及未施加SA和NaCl的對照共13個處理組，處理時間為28 d，觀察銀杏生長的表觀特征，測定與銀杏生長和光合特征相關(guān)的12個指標(biāo)，結(jié)合主成分分析和隸屬函數(shù)法分析，篩選出對銀杏鹽脅迫緩解效果最好的水楊酸濃度?！窘Y(jié)果】①隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，銀杏頂梢和葉片出現(xiàn)不同程度變黃、焦化和脫落的現(xiàn)象，葉鮮質(zhì)量較對照組顯著降低。②NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，會使銀杏葉片的葉綠素a（Chla）含量、葉綠素b（Chlb）含量、總?cè)~綠素（total Chl）含量、凈光合速率（Pn）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、胞間CO2濃度（Ci）、蒸騰速率（Tr）、最大光化學(xué)效率（Fv/Fm）、光化學(xué)猝滅系數(shù)（qP）、實際光化學(xué)量子產(chǎn)量[Y（Ⅱ）]和相對電子傳遞速率（ETR）降低。③施加適宜濃度的外源SA能緩解NaCl脅迫對銀杏生長和光合特征的抑制作用，其中N1S2、N2S2和N3S2處理組緩解效果最好。④主成分分析和隸屬函數(shù)法分析表明不同濃度外源SA對NaCL脅迫的緩解作用由大到小為0.10、0.02、0.50 mmol/L?！窘Y(jié)論】NaCl脅迫能抑制銀杏的生長和光合作用，NaCl脅迫下外源SA濃度0.10 mmol/L的緩解效果最佳，0.02 mmol/L次之，SA濃度0.50 mmol/L對NaCl脅迫的緩解作用效果不明顯。

關(guān)鍵詞：銀杏；NaCl脅迫；外源水楊酸（SA）；表觀特征；葉鮮質(zhì)量；光合作用

中圖分類號：S792.95""""" 文獻標(biāo)志碼：A開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

文章編號：1000-2006（2024）06-0091-11

Effects of exogenous salicylic acid on growth and photosynthesis of" Ginkgo biloba under NaCl stress

LUO Chunyan1， GENG Hongkai1，2， WANG Xiujun1， LI Zihang1， GUO Linfan1， LI Qingwei1

（1.College of Landscape Architecture， Beijing Forestry University， Beijing 100083， China; 2.Institute of Urban Environment， Chinese Academy of Sciences， Xiamen 361000， China）

Abstract： 【Objective】This study investigated the alleviation mechanism of exogenous salicylic acid （SA） on Ginkgo biloba under NaCl stress， with the aim of providing a theoretical basis for addressing the" salt damage of" G. biloba" in saline environments. This could support the expansion of G. biloba cultivation and enhance the plant landscape in these areas.【Method】Thirteen treatment groups were established with NaCl concentrations of 50 （N1）， 100 （N2）， and 200 （N3） mmol/L， and SA concentrations of 0.02 （S1）， 0.10 （S2）， and 0.50 （S3） mmol/L， using four-year-old G. biloba" as the test material. The groups included CK， N1， N1S1， N1S2， N1S3， N2， N2S1， N2S2， N2S3， N3， N3S1， N3S2， and N3S3， with five replicates per group. The experiments were conducted in the greenhouse of Beijing Forestry University （116° 35′E， 40° 01′N） over a period of 28 days. The average temperature in the greenhouse was approximately 27.5 °C， and the average humidity is about 65.9%. This study observed the phenological characteristics of G. biloba" growth and measured various indicators， including leaf fresh weight， chlorophyll a" （Chla） content， chlorophyll b" （Chlb） content， total chlorophyll" （total Chl） content， net photosynthetic rate （Pn）， stomatal conductance （Gs）， intercellular CO2 concentration （Ci）， transpiration rate （Tr）， maximal photochemical efficiency （Fv/Fm）， photochemical quenching coefficient （qP）， actual photochemical efficiency （Y（Ⅱ））， and electron transport rate （ETR）. The optimal SA concentration for mitigating salt stress in G. biloba was determined through principal component analysis and affiliation function method analysis.【Result】（1） As the" NaCl concentration increased and the stress duration extended， the branch tops and leaves of G. biloba exhibited varying degrees of yellowing， scorching， and abscission， with a significant reduction in leaf fresh weight compared to the control group. （2） Increasing NaCl concentration and prolonging stress durations decreased leaf fresh weight， Chla content， Chlb content， total Chl content， Pn， Gs， Ci， Tr， Fv/Fm， qP， Y（Ⅱ）， and ETR in G. biloba. （3） The application of exogenous SA at appropriate concentrations alleviates the inhibitory effected of NaCl stress on the growth and photosynthetic characteristics of G. biloba. The N1S2， N2S2， and N3S2 treatment groups were the most effective in mitigating salt damage. （4） Principal component analysis indicated that the exogenous application of SA primarily enhanced salt tolerance by influencing eight indicators： leaf fresh weight， Chla content， Chlb content， total Chl content， Pn， Gs， Tr， and Fv/Fm. （5） Based on the principal component analysis and affiliation function method analysis， the mitigating effect of SA was ranked as follows： 0.10 mmol/L gt; 0.02 mmol/L gt; 0.50 mmol/L. 【Conclusion】The SA at 0.02 and 0.10 mmol/L under NaCl stress is more effective in mitigating growth and photosynthesis in G. biloba， with 0.10 mmol/L SA showing the best mitigation effect and 0.50 mmol/L SA having a more limited effect. Growth indicators and photosynthetic properties are important reference indicators for assessing salt tolerance in plants. However， the plant responses to salt stress are complex， so this experiment can serve as one references， and further research at physiological， biochemical， and molecular levels is needed.

Keywords：Ginkgo biloba; NaCl stress; exogenous SA; phenological characteristics; leaf fresh quality; photosynthesis

鹽脅迫是指過量Na+和Cl-對植物產(chǎn)生不利影響[1]。鹽分是影響植物生長發(fā)育重要的非生物因素之一，鹽分的過度積累會抑制植物光合作用，造成離子毒害、膜系統(tǒng)氧化損傷、滲透調(diào)節(jié)失衡等，從而阻礙植物的正常生長發(fā)育過程，甚至導(dǎo)致植物死亡[2]。土壤鹽漬化嚴(yán)重影響了全球的生態(tài)環(huán)境，限制了植物的生長，給園林綠化增加了難度，特別是干旱和半干旱地區(qū)[3]。近年來，隨著北方地區(qū)氯鹽型融雪劑的廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致土壤Na+、Cl-鹽分濃度急劇增加，引發(fā)了植物一系列不良反應(yīng)[4]。因此，緩解植物鹽害、改善城市鹽漬地景觀具有十分重要的意義。目前，使用外源物處理已成為緩解植物鹽害的重要措施之一。

水楊酸（salicylic acid，SA）作為一類小分子酚類物質(zhì)，是植物體內(nèi)普遍存在的內(nèi)源性激素，它參與植物氣孔關(guān)閉、水分代謝、礦質(zhì)營養(yǎng)吸收和光合作用等生理生化過程，在植物抵御逆境脅迫中發(fā)揮著重要的作用[5]。研究表明，適量施加SA可以緩解鹽脅迫對白榆（Ulmus pumila）[6]、苜蓿（Medicago sativa）[7]、番茄（Solanum lycopersicum）[8]和陸地棉（Gossypium hirsutum）[9]等植物生長和光合作用的限制，外源SA通過提高植物光合色素的含量，維持PSⅡ光合酶活性和電子傳遞能力，調(diào)節(jié)離子平衡，改善并提高植物的光合能力，從而緩解了鹽脅迫對植物的危害[10-11]。但有研究表明棉花幼苗施加SA對鹽脅迫的緩解作用具有濃度效應(yīng)[9]。

銀杏（Ginkgo biloba ）為銀杏科銀杏屬落葉喬木，是我國特有的珍貴樹種，在植物界中被譽為“活化石”，具有材用、食用、藥用和觀賞價值，其適應(yīng)性強、樹姿優(yōu)美、葉色景觀突出常被用作園林綠化樹種[12]。趙海燕[13]研究表明，鹽脅迫會抑制銀杏的生長，低含量鹽脅迫在一定程度上促進光合作用，隨著含鹽量增加和脅迫時間延長又抑制光合作用。Zhao等[14]研究表明銀杏具有一定的耐鹽性，隨著鹽脅迫的加劇，最大光化學(xué)效率（Fv/Fm）、光化學(xué)猝滅系數(shù)（qP）、實際光化學(xué)量子產(chǎn)量［Y（Ⅱ）］和葉綠素含量顯著降低。Xin等[15]研究表明GbLWD1基因?qū)μ岣咩y杏耐鹽性具有重要作用。國內(nèi)外對于銀杏耐鹽的研究已取得一定的進展，主要集中在生理和分子機制方面，但對緩解銀杏鹽害的研究鮮見報道。因此，本研究以4年生銀杏苗為試材，通過不同程度（低、中、高）NaCl脅迫和不同濃度（低、中、高）SA的先后作用，研究NaCl脅迫下外源SA對銀杏生長和光合作用的影響，揭示外源SA與銀杏耐鹽之間的關(guān)系，以期為利用外源SA緩解銀杏鹽脅迫和擴大銀杏栽培提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料及處理方法

試驗在北京林業(yè)大學(xué)北林科技梅菊圃溫室（116°35′E，40°01′N）進行。以地徑1.8～2.0 cm、株高180～205 cm的4年生銀杏實生苗作為材料，栽植容器為15 L聚乙烯塑料盆，盆土選用河沙（消毒）、珍珠巖、草炭土體積比為1∶1∶2的混合基質(zhì)，保證每盆基質(zhì)等量。2020年3月定植后進行4個月常規(guī)養(yǎng)護以實現(xiàn)緩苗目的。

將銀杏幼苗分為13個處理組（表1），每組設(shè)5株重復(fù)。試驗期間溫室平均溫度約27.5 ℃，平均濕度約為65.9%。為防止產(chǎn)生鹽激效應(yīng)，從2020年7月8日起，NaCl以50 mmol/L的初始濃度每天遞增；達到預(yù)設(shè)濃度后，每14 d對處理組澆灌1次相應(yīng)濃度的鹽溶液（蒸餾水作為對照處理，每盆每次0.5 L）。盆底墊盤回收外滲液以保證鹽分濃度。預(yù)設(shè)鹽濃度脅迫35 d后，每7 d向各處理組澆灌1次相應(yīng)濃度的水楊酸溶液（蒸餾水作為對照處理，每盆每次0.2 L），共處理28 d。在第1次施加水楊酸溶液前以及每次施加水楊酸后第5天，選取銀杏幼苗中上部功能葉進行取樣用于光合測定；植株的表觀性狀在首次施加水楊酸溶液前和第4次施加水楊酸溶液后進行。

1.2 指標(biāo)測定方法

1.2.1 葉鮮質(zhì)量的測定

在第1次施加水楊酸溶液前和每次施加水楊酸后第5天，取植株頂端長勢、大小一致的第3～5片完全功能葉，放入液氮中立即帶回實驗室，洗凈擦干后用天平稱量葉鮮質(zhì)量。每株取3枚葉片，每個處理組重復(fù)5次，取平均值。

1.2.2 葉綠素含量的測定

葉綠素含量測定參考高俊鳳[16]的丙酮浸提法。稱取新鮮葉片0.10 g，洗凈、剪碎后放入25 mL容量瓶中，在容量瓶中加入0.5 mL純丙酮和10 mL體積分?jǐn)?shù)80%的丙酮，蓋上瓶塞。室溫下置暗處浸提過夜至葉組織全部變白，然后用80%丙酮定容至25 mL，過濾后，把葉綠體色素提取液倒入光徑1.0 cm的比色杯內(nèi)，用分光光度計分別在波長為645、663 nm下測定吸光度A645、A663。根據(jù)以下公式計算葉綠素a含量（Ca）、葉綠素b含量（Cb）、總?cè)~綠素含量（CT）和葉綠體色素含量。

Ca=12.72×A663-2.59×A645；

Cb=22.88×A645-4.67×A663；

CT=Ca+Cb=20.29×A645+8.05×A663；

CP=C×VT×n/WF×1 000。

式中：CP為葉綠體色素含量，mg/g；C為葉綠體色素的質(zhì)量濃度，mg/L；WF為鮮質(zhì)量，g；VT為提取液總體積，mL；n為稀釋倍數(shù)。

1.2.3 光合參數(shù)的測定

使用Li-6400光合測定儀對植株光合參數(shù)進行測定，設(shè)定測定時的葉室溫度為28 ℃，CO2濃度為400 μmol/（m2·s），相對濕度55%，光照強度為1 500 μmol/（m2·s）。在第1次施加水楊酸溶液前以及每次施加水楊酸后第5天上午9：00—11：00，選取各處理組植株頂端向陽面的第3～5片完全功能葉，做好標(biāo)記，測定植株葉片的凈光合速率（Pn）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、胞間CO2濃度（Ci）和蒸騰速率（Tr）。每個處理組測定5株，每株測定3片成熟健康葉片，取平均值。

1.2.4 葉綠素?zé)晒鈪?shù)的測定

使用PAM2500葉綠素?zé)晒鈨x對植株葉綠素?zé)晒鈪?shù)進行測定，使用PamWins-3設(shè)置Intense（光強度）為3，Gain（電子信號的增益）為3，使Ft（實時熒光值）處于200～400。在第1次施加水楊酸溶液前以及每次施加水楊酸后第5天14：00—19：00，選取植株頂端的第3～5片完全功能葉，每枚葉片在測定前暗處理20 min，測定最大光化學(xué)效率（Fv/Fm）、光化學(xué)猝滅系數(shù)（qP）、實際光化學(xué)量子產(chǎn)量［Y（Ⅱ）］和電子傳遞速率（ETR）值。每個處理組測定5株，每株測定3片成熟健康葉片，取平均值。

1.3 數(shù)據(jù)分析

研究過程使用Excel 2012軟件進行數(shù)據(jù)整理，SPSS 26.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和主成分分析，OriginPro 2018軟件進行柱狀圖繪制。

采用主成分分析法和隸屬函數(shù)法，篩選緩解鹽脅迫效果較好的處理。

根據(jù)以下公式求得隸屬函數(shù)值：

u（Xi）=Xi-XminXmax-Xmin。

式中：u（Xi）為計算得到的第i個指標(biāo)的隸屬函數(shù)值；Xi為各處理的第i個指標(biāo)測定值；Xmin和Xmax分別為第i個指標(biāo)的最小值和最大值。

2 結(jié)果與分析

2.1 NaCl脅迫下外源水楊酸（SA）對銀杏植株表觀特征的影響

長期NaCl脅迫會對銀杏的頂梢和葉片產(chǎn)生傷害，且受損傷程度隨NaCl濃度的增加而增強，如圖1所示。相較對照組，50 mmol/L NaCl脅迫會使植株頂梢輕微發(fā)黃，葉片邊緣變黃；100 mmol/L NaCl脅迫會使植株頂梢發(fā)黃，葉片大部分面積變黃，少量葉片脫落；200 mmol/L NaCl脅迫會使植株頂梢嚴(yán)重黃化，葉片全部變黃且邊緣出現(xiàn)焦化的現(xiàn)象，大量葉片脫落。外源施加不同濃度的SA能在一定程度上起到緩解作用。0.02和0.10 mmol/L濃度的SA處理能在表觀上明顯緩解NaCl脅迫傷害，0.50 mmol/L SA處理也可以有效緩解NaCl脅迫，但改善效果不如低、中濃度SA處理明顯。

2.2 NaCl脅迫下外源水楊酸（SA）對銀杏葉鮮質(zhì)量的影響

在未施加SA的情況下，隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，銀杏葉鮮質(zhì)量呈下降的趨勢，與CK差異顯著（圖2）。

在不同濃度NaCl的脅迫下，施加S1和S2濃度的SA均使葉鮮質(zhì)量出現(xiàn)不同程度的增加。N1脅迫下，在第7和28天時，N1S2處理葉鮮質(zhì)量處于最大值，N1S2較N1處理分別增加了5.7%、20.3%，差異顯著；在第14和21天時，N1S1處理處于最大值，較N1分別增加了7.2%、5.6%，差異顯著，N1S1與N1S2差異不顯著。N2脅迫下，在第7、14和28天時，N2S2處理處于最大值，較N2分別增加了13.9%、20.8%和51.0%，差異顯著；在第21天時，N2S1處理處于最大值，較N2增加了23.2%，差異顯著。

N3脅迫下，在第7、14、21、28天時，N3S2處理處于最大值，N3S1次之，N3S2較N3分別增加了27.6%、26.7%、32.5%、71.8%，差異顯著；第7、21和28天時，N3S3處理與N3差異不顯著。結(jié)果表明，施加低、中濃度外源SA能有效緩解銀杏因NaCl脅迫使葉鮮質(zhì)量降低的傷害，并以施加SA濃度為0.10 mmol/L效果最佳，高濃度SA對NaCl脅迫的緩解作用效果不明顯。

2.3 NaCl脅迫下外源水楊酸（SA）對銀杏葉片葉綠素含量的影響

SA處理對NaCl脅迫下銀杏葉片葉綠素含量的影響見圖3。在未施加SA的情況下，隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，Chla、Chlb和總Chl含量呈下降的趨勢。在N1和N2脅迫下，施加外源SA會使銀杏葉片各葉綠素含量出現(xiàn)不同程度的增加。在N3脅迫下，第7、14、21、28天時N3S1和N3S2處理，各葉綠素含量較N3顯著增加，而N3S3處理下，第7天時Chlb含量較N3顯著降低，降低了8.6%，第14天時Chla、Chlb和總Chl含量較N3顯著降低，分別降低了1.7%、9.8%、2.5%。第28天在N1、N2和N3脅迫下各葉綠素含量處于最小值，N1S2和N2S2處理組較N1和N2各葉綠素含量顯著增加，較其他處理增幅大，N1S2處理組Chla、Chlb和總Chl含量分別較N1增加了5.8%、27.7%、8.6%；N2S2處理下Chla、Chlb和總Chl含量分別較N2增加了8.9%、53.3%、13.1%；N3S2處理組較N3處理的Chla和總Chl含量增量最顯著，較其他處理增幅更大，分別增加了9.4%、13.1%；N3S1處理較N3 Chlb含量增量最顯著，為113.9%；而N3S3處理與N3無顯著差異。結(jié)果表明，施加低、中濃度的SA能有效緩解銀杏因NaCl脅迫使葉綠素含量降低的傷害，并以施加0.10 mmol/L濃度的SA效果最佳，高濃度SA的緩解作用較為局限。

2.4 NaCl脅迫下外源水楊酸（SA）對銀杏葉片光合參數(shù)的影響

SA處理對NaCl脅迫下銀杏葉片光合參數(shù)的影響見圖4。在未施加SA的情況下，隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，Pn、Tr和Gs值呈下降的趨勢，較CK均顯著降低。隨脅迫NaCl濃度的增加，銀杏幼苗葉片Ci逐漸降低，相同NaCl濃度脅迫下隨脅迫時間延長，銀杏幼苗葉片Ci呈先增加后降低的趨勢。在N1S2和N2S2處理下，不同脅迫時間Pn值與N1和N2脅迫相比均顯著升高，較其他處理增幅更大，第28天時，N1S1較N1脅迫增加了39.2%，N2S2較N2增加了23.1%。N3脅迫下，在第14和21 天時N3S2處理處于最大值，較N3脅迫分別增加了29.0%、102.3%，差異顯著；第7和28天時，N3S1處理處于最大值，較N3分別增加了23.3%、81.3%，差異顯著；在N1S2、N2S2和N3S2處理下，不同脅迫時間Gs值較N1、N2和N3均顯著升高，較其他處理增幅大，S1處理次之，第28天時，N1S2較N1增加21.2%，N2S2較N2增加35.8%，N3S2較N3增加了96.6%；在N1S2、N2S2和N3S2處理下，不同脅迫時間Ci值較N1、N2和N3均顯著升高，較其他處理增幅大，S1處理次之，第28天時，N1S2、N2S2和N3S2分別增加了5.9%、8.1%、3.1%。在N1S2、N2S2和N3S2處理下，不同脅迫時間Tr值較N1、N2和N3均顯著升高，較其他處理增幅大，S1處理次之，第28天時，N1S2、N2S2和N3S2分別較N1、N2、N3增加了34.7%、30.6%、191.4%。在不同NaCl濃度和脅迫時間下，施加S3濃度的SA對緩解Pn、Gs、Ci和Tr值的降低具有局限性。結(jié)果表明低、中濃度的SA可以有效緩解銀杏因NaCl脅迫使Pn、Gs、Ci和Tr值降低的傷害，并以施加0.10 mmol/L效果最佳，高濃度SA的緩解作用較為局限。

2.5 NaCl脅迫下外源水楊酸（SA）對銀杏葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響

SA處理對NaCl脅迫下銀杏葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響見圖5。在未施加SA的情況下，隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，F(xiàn)v/Fm、qP和ETR值呈下降的趨勢，較CK均顯著降低。在N1S2、N2S2和N3S2處理下，不同脅迫時間的Fv/Fm、qP和ETR值較N1、N2和N3脅迫均顯著升高，較其他處理組增幅更大，S1處理次之；第28天時，不同NaCl濃度下Fv/Fm、qP和ETR均處于最小值，N1脅迫下，分別為0.70 μmol/mol、0.83、54.14 μmol/mol，N2脅迫下分別為0.67μmol/mol、0.81、50.02 μmol/mol，N3脅迫下分別為0.64μmol/mol、0.79、45.74μmol/mol，N1S2、N2S2和N3S2處理的Fv/Fm值分別較N1、N2和N3增加了7.9%、10.7%、10.8%，qP值增加了8.7%、3.2%、1.4%，ETR值增加了14.7%、18.7%、17.3%，而N3S3處理的qP值較N3顯著降低，降低了2.0%。第7天時，N3S3處理較N3顯著降低，降低了3.3%。N1脅迫下Y（Ⅱ）值隨脅迫時間的延長呈升高的趨勢，N2脅迫下隨脅迫時間的延長呈先升高后下降的趨勢，N3脅迫下隨脅迫時間的延長呈下降的趨勢，較CK均顯著降低，在N1S2、N2S2和N3S2處理下，不同脅迫時間Y（Ⅱ）值較N1、N2和N3均顯著升高，在各處理中增幅最大，S1處理次之。第28天時，N1S2、N2S2和N3S2處理分別較N1、N2和N3增加了3.1%、6.5%、5.5%；而第7和14天時，N1S3較N1顯著降低，分別降低了4.4%、6.3%，N2S3處理較N2顯著降低，分別降低了6.4%、4.8%；第7天時N3S3處理較N3顯著降低，降低了11.1%。結(jié)果表明，外源施加低、中濃度的SA能有效緩解銀杏因NaCl脅迫使Fv/Fm、qP、Y（Ⅱ）和ETR值降低的傷害，適宜SA濃度能提高銀杏受NaCl脅迫相關(guān)的光合作用過程，并以施加0.10 mmol/L效果最佳，高濃度SA的緩解作用較為局限。

2.6 NaCl脅迫下不同濃度外源水楊酸（SA）對銀杏生長和光合作用影響的綜合評價

2.6.1 主成分分析

NaCl脅迫下不同濃度SA對銀杏生長和光合參數(shù)影響的主成分分析結(jié)果見表2。將NaCl脅迫后的12個指標(biāo)進行主成分分析，并提取兩個特征值大于1的主成分，N1、N2和N3脅迫下，第1主成分貢獻率分別為56.962%、61.645%和78.806%。第1主成分均代表了葉鮮質(zhì)量、Chla、Chlb、總Chl、Pn、Gs、Tr和Fv/Fm 8個指標(biāo)，表明外源施加SA對NaCl脅迫下銀杏主要通過影響這8個指標(biāo)來增強耐鹽性。以每個主成分所對應(yīng)的特征值占所提取主成分總的特征值之和的比例作為權(quán)重，計算主成分綜合模型（表3）。結(jié)果表明，在N1、N2和N3脅迫下，不同濃度外源SA對NaCl脅迫的緩解作用由大到小依次為0.10、0.02、0.50 mmol/L。

2.6.2 隸屬函數(shù)法分析

NaCl脅迫下SA對銀杏生長和光合參數(shù)影響的模糊綜合質(zhì)量評價見表4。在N1、N2和N3脅迫下，按照隸屬度平均值高低綜合排序評價，NaCl脅迫下不同濃度外源SA的緩解作用由大到小依次為0.10、0.02、0.50 mmol/L。

3 討 論

鹽脅迫作為植物生長過程中最主要的非生物脅迫因子之一，在一定程度上限制著植物分布，抑制其生長發(fā)育[17]。在本研究中，NaCl的長期脅迫使銀杏頂梢和葉片出現(xiàn)不同程度的黃化、焦化和脫落現(xiàn)象，并且這種現(xiàn)象隨著NaCl濃度的增加愈加明顯，這與有關(guān)海濱木槿（Hibiscus hamabo）[18]的研究結(jié)果一致；NaCl的長期脅迫使銀杏葉片鮮質(zhì)量顯著降低，這與苦楝（Melia azedarace）的研究結(jié)果一致[19]。施加0.02和0.10 mmol/L的SA能緩解鹽脅迫對生長的抑制作用，而施加0.50 mmol/L的SA緩解作用不明顯甚至抑制生長，說明SA對銀杏鹽脅迫的緩解作用具有濃度效應(yīng)，這與有關(guān)高羊茅（Festuca arundinacea）[20]的研究結(jié)果一致。

葉綠素作為主要的光合色素，在光合作用過程中對光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化起著重要作用，其含量的變化可直接影響著光合作用，進而影響植物耐鹽能力[21]。因此，葉綠素含量的高低能在一定程度上反映出植株抗逆性能的強弱[22]。本研究結(jié)果表明，隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，Chla、Chlb和總Chl含量呈下降的趨勢，這可能是由于葉綠素合成酶活性降低、葉綠體中類囊體結(jié)構(gòu)受損或土壤中與葉綠素合成相關(guān)的離子發(fā)生沉淀等原因造成的[23]，NaCl脅迫下銀杏葉綠素含量的變化規(guī)律與垂絲海棠（Malus halliana）[24]一致。前人研究表明，施加適宜濃度的SA能有效促進葉綠素的合成，而SA濃度過高則會抑制其合成[25]。本試驗中，施加0.02和0.10 mmol/L的SA后，不同濃度NaCl脅迫下銀杏的葉綠素含量出現(xiàn)不同程度升高，這與在香榧（Torreya grandis）研究中[11]得到的結(jié)果一致。出現(xiàn)上述結(jié)果的原因可能是SA減少了植物根系對Na+的吸收，緩解了Na+的毒害作用和葉綠體結(jié)構(gòu)的受損程度[6]。

光合作用是植物所需能量的主要來源，鹽脅迫對植物光合作用的影響機制復(fù)雜[26]。在本研究中，不同濃度NaCl脅迫下，Pn、Tr、Gs始終低于CK，并且隨NaCl濃度的增加和脅迫時間的延長，Pn、Tr、Gs逐漸降低，銀杏的Pn、Tr、Gs對鹽脅迫的響應(yīng)與毛橄欖（Canarium subulatum）[27]一致。鹽脅迫對銀杏的Ci影響則不同，隨NaCl濃度的增加，Ci逐漸降低，而隨脅迫時間延長，Ci呈先升高后降低的趨勢；在低、中NaCl濃度脅迫前期，N1、N2處理的Ci高于CK，低、中濃度NaCl脅迫后期和高濃度NaCl脅迫下的Ci低于CK。這可能是因為在脅迫前期，鹽脅迫降低了植物光合作用強度，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)CO2的消耗速率降低，同時植物氣孔也受到鹽脅迫的影響，短期內(nèi)細(xì)胞呼吸作用產(chǎn)生的CO2無法排出，因此造成CO2在葉片內(nèi)短期積累[28]。而隨著鹽脅迫的持續(xù)，植物呼吸作用受到限制，CO2內(nèi)部產(chǎn)出減少，再加上Gs的持續(xù)降低，CO2外部吸入量減少，使葉片內(nèi)CO2含量開始下降[28]。在鹽脅迫下，如果葉肉細(xì)胞本身光合能力不足，使其轉(zhuǎn)化CO2能力下降，導(dǎo)致Ci升高，則屬于非氣孔限制，如果植物Gs和Ci均明顯減小，則屬于氣孔限制[29]。在本研究中，銀杏在鹽脅迫前期抑制光合作用的因素屬于非氣孔限制，而在鹽脅迫后期則主要是氣孔限制。施加0.02和0.10 mmol/L的SA在任一鹽濃度脅迫前期（前21天）均可有效緩解銀杏鹽害，提高葉片的Pn、Tr、Ci、Gs等指標(biāo)，這與有關(guān)陸地棉[30]的研究結(jié)果一致。出現(xiàn)上述結(jié)果的原因可能是施加SA改變了葉片的Gs，加快了碳的羧化能力，提高了二磷酸核酮糖羧化酶等與光合作用相關(guān)酶的活性，從而增強了銀杏的光合作用能力[31-32]。本研究還發(fā)現(xiàn)施加0.50 mmol/L的SA對提高銀杏的Pn、Tr、Ci和Gs值無明顯效果，持續(xù)施加高濃度SA甚至?xí)觿°y杏各光合參數(shù)的降低，進一步抑制銀杏的光合作用，這與有關(guān)黑麥草（Lolium perenne）[33]的研究結(jié)果一致。

葉綠素?zé)晒馀c植物光合作用密切相關(guān)，植物葉片葉綠素?zé)晒獾淖兓煞从吵鲋参锕夂献饔檬茺}脅迫的損傷程度[23]。植物在沒有遭受環(huán)境脅迫并經(jīng)過充分暗適應(yīng)的情況下，F(xiàn)v/Fm值一般為0.80～0.85，試驗中，隨著NaCl脅迫濃度的增加和脅迫時間的延長，銀杏葉片F(xiàn)v/Fm值顯著降低，并低于0.80，表明PSⅡ反應(yīng)中心受到了損傷[34-35]；隨著NaCl脅迫濃度的增加和脅迫時間的延長，qP、Y（Ⅱ）和ETR值均顯著降低，表明鹽脅迫顯著抑制了銀杏PSⅡ的光合活性，導(dǎo)致實際光能轉(zhuǎn)換效率和電子傳遞效率降低，光合色素吸收的光能更多地以熱的形式耗散[34]。鹽脅迫對銀杏Fv/Fm、qP、Y（Ⅱ）和ETR的影響結(jié)果與銀葉樹（Heritiera littoralis）[34]相同。本試驗中，施加0.02和0.10 mmol/L SA能有效提高鹽脅迫下銀杏的Fv/Fm、qP、Y（Ⅱ）和ETR值，這可能是SA能減輕鹽脅迫對光合作用電子傳遞的抑制，保護PSⅡ及其初級電子受體醌下游電子傳遞通暢，減輕由過剩激發(fā)能引起的光抑制，降低光合系統(tǒng)受損傷程度，從而提高銀杏抗鹽脅迫的能力[36]。其中施加0.10 mmol/L的SA對提高Fv/Fm、qP、Y（Ⅱ）和ETR值的效果最佳，而施加0.50 mmol/L的SA則會降低各光合參數(shù)，這與有關(guān)海南粗榧（Cephalotaxus hainanensis）[37]的研究結(jié)果類似。

對不同NaCl濃度處理下測定的指標(biāo)用主成分分析和隸屬函數(shù)法分析進行綜合評價，不同濃度SA對NaCl脅迫的緩解作用由大到小均為0.10 mmol/L、0.02 mmol/L、0.50 mmol/L，銀杏耐鹽的過程較為復(fù)雜，單一指標(biāo)不能全面評價SA對銀杏鹽脅迫的緩解作用，因此還應(yīng)把生理和分子相結(jié)合進行深入研究。

參考文獻（reference）：

［1］MUNNS R. Genes and salt tolerance： bringing them together[J]. The New Phytol， 2005， 167（3）： 645-663. DOI： 10.1111/j.1469-8137.2005.01487.x.

［2］LIANG W J， MA X L， WAN P， et al. Plant salt-tolerance mechanism： a review[J]. Biochem Biophys Res Commun， 2018， 495（1）： 286-291. DOI：10.1016/j.bbrc.2017.11.043.

［3］毛慶蓮，王勝.國內(nèi)鹽堿地治理趨勢探究淺析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2020， 59（S1）： 302-306. MAO Q L，WANG S. Brief analysis on the trend of improve saline alkali soil in China[J]. Hubei Agric Sci， 2020， 59（S1）： 302-306. DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.S1.085.

［4］MAYER T， ROCHFORT Q， BORGMANN U， et al. Geochemistry and toxicity of sediment porewater in a salt-impacted urban stormwater detention pond[J]. Environ Pollut， 2008， 156（1）： 143-151. DOI： 10.1016/j.envpol.2007.12.018.

［5］JAYAKANNAN M， BOSE J， BABOURINA O， et al. Salicylic acid in plant salinity stress signalling and tolerance[J]. Plant Growth Regul， 2015， 76（1）： 25-40. DOI：10.1007/s10725-015-0028-z.

［6］甘紅豪，趙帥，高明遠，等.外源水楊酸對NaCl脅迫下白榆幼苗光合作用及離子分配的影響[J]. 西北植物學(xué)報， 2020， 40（3）： 478-489. GAN H H， ZHAO S， GAO M Y， et al. Effect of salicylic acid on photosynthesis and ion distribution of Ulmus pumila seedlings under NaCl stress[J]. Acta Bot Boreali-Occidentalia Sin， 2020， 40（3）： 478-489. DOI：10.7606/j.issn.1000-4025.2020.03.0478.

［7］逯亞玲. 外源水楊酸處理和NaCl脅迫對紫花苜蓿種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2018. LU Y L. Effects of salicylic acid and NaCl on seed germination and seeding physiological of alfalfa[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University， 2018. DOI：10.27244/d.cnki.gnjnu.2018.001189.

［8］楊鳳軍，李天來，宿越，等.外源水楊酸對NaCl脅迫下番茄幼苗光合特性的影響[J]. 中國蔬菜， 2012 （22）： 35-40. YANG F J， LI T L， SU Y， et al. Effects of salicylic acid on photosynthesis characteristics of tomato seedlings during NaCl stress[J]. China Veg， 2012 （22）：35-40. DOI：10.19928/j.cnki.1000-6346.2012.22.006.

［9］王立紅，張巨松，李星星，等.外源水楊酸對鹽脅迫下棉花幼苗光合作用的影響[J]. 核農(nóng)學(xué)報， 2016， 30（9）： 1864-1871. WANG L H， ZHANG J S， LI X X， et al. Effects of exogenous salicylic acid on the photosynthesis of cotton seedlings under salt stress[J]. J Nucl Agric Sci， 2016， 30（9）： 1864-1871. DOI：10.11869/j. issn.100-8551.2016.09.1864.

[10]張志剛，尚慶茂.水楊酸、殼聚糖對鹽脅迫下黃瓜葉片光合參數(shù)的調(diào)節(jié)作用[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報， 2010， 19（3）： 174-178. ZHANG Z G， SHANG Q M. Regulation of salicylic acid and chitosan on photosynthetic parameters of cucumber leaves under salt stress[J]. Acta Agric Boreali Occidentalis Sin， 2010， 19（3）： 174-178. DOI：10.3969/j.issn.1004-1389.2010.03.037.

[11]LI T T， HU Y Y， DU X H， et al. Salicylic acid alleviates the adverse effects of salt stress in" Torreya grandis cv. merrillii seedlings by activating photosynthesis and enhancing antioxidant systems[J]. Plos One， 2014， 9（10）：e209492. DOI：10.1371/journal.pone.0109492.

[12]楊策.融雪劑等環(huán)境因素對銀杏葉斑病的影響[D]. 大連：遼寧師范大學(xué)， 2015. YANG C. Effects of deicing salt and other environmental factors on gingko leaf spot[D]. Dalian： Liaoning Normal University， 2015.

[13]趙海燕.銀杏幼樹耐鹽生理機制的研究[D]. 北京：北京林業(yè)大學(xué)， 2020. ZHAO H Y. Physiological mechanism in salt tolerance of Ginkgo biloba L. seedlings[D]. Beijing：Beijing Forestry University， 2020. DOI： 10.26949/d.cnki.gblyu.2020.001482.

[14]ZHAO H Y， LIANG H Y， CHU Y B， et al. Effects of salt stress on chlorophyll fluorescence and the antioxidant system in Ginkgo biloba L. seedlings[J]. Hortscience， 2019， 54（12）： 2125-2133. DOI： 10.21273/HORTSCI14432-19.

[15]XIN Y， WU Y Q， HAN X， et al. Overexpression of the Ginkgo biloba WD40 gene GbLWD1-like improves salt tolerance in transgenic populus[J]. Plant Sci， 2021（2）： 313-320. DOI：10.1016/j.plantsci.2021.111092.

[16]高俊鳳.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M]. 北京：高等教育出版社， 2006： 75-76. GAO J F. Experimental guidance for plant physiology[M]. Beijing： Higher Education Press， 2006： 75-76.

[17]李曉慶，王星斗，樊艷，等.鹽脅迫對杜梨吸收根生長指標(biāo)的影響[J]. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2021， 41（5）： 62-67. LI X Q， WANG X D， FAN Y， et al. Effects of salt stress on the growth index of absorbing roots of" Pyrus betulifolia[J]. J Shanxi Agric Univ （Nat Sci Ed）， 2021， 41（5）： 62-67. DOI：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.202105048.

[18]蘆治國，華建峰，殷云龍，等.鹽脅迫下氮素形態(tài)對海濱木槿幼苗生長及生理特性的影響[J].南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2022， 46（3）： 91-98. LU Z G， HUA J F， YIN Y L， et al. Effects of nitrogen form on growth and physiological characteristics of Hibiscus hamabo under salt stress[J]. J Nanjing For Univ （Nat Sci Ed）， 2022， 46（3）： 91-98. DOI：10.12302/j.issn.1000-2006.202105010.

[19]教忠意.鹽脅迫對苦楝育苗及生理特性的影響[D].南京：南京林業(yè)大學(xué)， 2009. JIAO Z Y. Effect of salt stress on raising seedling and physiological characteristics of Melia azedarace L.[D]. Nanjing： Nanjing Forestry University， 2009.

[20]趙春旭.水楊酸對高羊茅草坪草抗旱性的影響[D].蘭州：蘭州大學(xué)， 2011. ZHAO C X. The effects of salicylic acid （SA） on drought resistance of tall fescue （Festuca arundinacea）[D]. Lanzhou： Lanzhou University， 2011.

[21]MAKINO A. Photosynthesis， grain yield， and nitrogen utilization in rice and wheat[J]. Plant Physiol， 2011， 155（1）： 125-129. DOI：10.1104/pp.110.165076.

[22]王偉華，張希明，閆海龍，等.鹽處理對多枝檉柳光合作用和滲調(diào)物質(zhì)的影響[J]. 干旱區(qū)研究， 2009， 26（4）： 561-568. WANG W H， ZHANG X M， YAN H L， et al. Effects of salt stress on photosynthesis and osmoregulation substances of Tamarix ramosissima Ledeb[J]. Arid Zone Res， 2009， 26（4）： 561-568. DOI：10.13866/j.azr.2009.04.003.

[23]李學(xué)孚，倪智敏，吳月燕，等.鹽脅迫對‘鄞紅’葡萄光合特性及葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響[J]. 生態(tài)學(xué)報， 2015， 35（13）： 4436-4444. LI X F， NI Z M， WU Y Y， et al. Effects of salt stress on photosynthetic characteristics and leaf cell structure of ‘Yinhong’ grape seedlings[J]. Acta Ecol Sin， 2015， 35（13）： 4436-4444. DOI：10.5846/stxb201 409141821.

[24]劉兵，賈旭梅， 朱祖雷，等.鹽堿脅迫對垂絲海棠光合作用及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響[J]. 西北植物學(xué)報， 2019， 39（9）： 1618-1626. LIU B， JIA X M， ZHU Z L， et al. Effect of saline-alkali on photosynthesis and osmotic regulation substances of Malus halliana Koehne[J]. Acta Bot Boreali-Occidentalia Sin， 2019， 39（9）： 1618-1626. DOI：10.7606/j.issn.1000-4025.2019. 09.1618.

[25]VELOSOLLDA， DE LIMA G S， DA SILVA AAR， et al. Attenuation of salt stress on the physiology and production of bell peppers by treatment with salicylic acid[J]. Semina-cienc Agrar， 2021， 42（5）： 2751-2768. DOI：10.5433/1679-0359.2021v42n5p2751.

[26]王旭明，趙夏夏，周鴻凱，等.NaCl脅迫對不同耐鹽性水稻某些生理特性和光合特性的影響[J].熱帶作物學(xué)報， 2019， 40（5）： 882-890. WANG X M， ZHAO X X， ZHOU H K， et al. Effects of NaCl stress on some physiological and biochemical indices and photosynthetic physiology characteristics of rice cultivars with different salt tolerance[J]. Chin J Trop crops， 2019， 40（5）： 882-890. DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2019.05.008.

[27]ALINIAEIFARD S， HAJILOU J， TABATABAEI S J. Photosynthetic and growth responses of olive to proline and salicylic acid under salinity condition[J]. Not Bot Horti Agrobo， 2016， 44（2）：579-585. DOI：10.15835/nbha44210413.

[28]XUE F L， LIU W L， CAO H L， et al.Stomatal conductance of tomato leaves is regulated by both abscisic acid and leaf water potential under combined water and salt stress[J]. Physiol Plant， 2021， 172（4）： 2070-2078. DOI：10.1111/ppl.13441.

[29]蔡琪琪，王堽，董寅壯，等.不同中性鹽脅迫對甜菜幼苗光合作用和抗氧化酶系統(tǒng)的影響[J].作物雜志， 2022 （1）： 130-136. CAI Q Q， WANG G， DONG Y Z， et al. Effects of different neutral salt stress on photosynthesis and antioxidant enzyme system of sugar beet seedlings[J]. Crops， 2022（1）： 130-136. DOI：10.16035/j.issn.1001-7283.2022.01.019.

[30]王立紅， 李星星， 孫影影，等. NaCl脅迫下外源水楊酸對棉花幼苗葉片光合特性的影響[J]. 干旱區(qū)研究， 2017， 34（3）： 655-662. WANG L H， LI X X， SUN Y Y， et al. Effects of exogenous salicylic acid on photosynthetic characteristics of cotton seedlings leaves under salt stress[J]. Arid Zone Res， 2017， 34（3）： 655-662. DOI：10.13866/j.azr.2017.03.23.

[31]NAZAR R， IQBAL N， SYEEDS S， et al. Salicylic acid alleviates decreases in photosynthesis under salt stress by enhancing nitrogen and sulfur assimilation and antioxidant metabolism differentially in two mungbean cultivars[J]. Journal of Plant Physiol， 2011， 168（8）： 807-815. DOI：10.1016/j.jplph.2010.11.001.

[32]LIU S， DONG Y J， XU L L， et al. Effects of foliar applications of nitric oxide and salicylic acid on salt-induced changes in photosynthesis and antioxidative metabolism of cotton seedlings[J]. Plant Growth Regul， 2014， 73（1）： 67-78. DOI：10.1007/s10725-013-9868-6.

[33]董慧，段小春，常智慧.外源水楊酸對多年生黑麥草耐鹽性的影響[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報， 2015， 37（2）： 128-135. DONG H， DUAN X C， CHANG Z H. Effect of exogenous salicylic acid on salt tolerance in perennial ryegrass[J]. Journal of Beijing For Univ， 2015， 37（2）： 128-135.DOI：10.13332/j.cnki.jbfu.2015.02.001.

[34]劉莉娜， 張衛(wèi)強， 黃芳芳，等.鹽脅迫對銀葉樹幼苗光合特性與葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響[J]. 森林與環(huán)境學(xué)報， 2019， 39（6）： 601-607. LIU L N， ZHANG W Q， HUANG F F， et al. Effects of NaCl stress on the photosynthesis and cholorophyll fluorescence of Heritiera littoralis seedlings[J]. J For and Environ， 2019， 39（6）： 601-607. DOI：10.13324/j.cnki.jfcf.2019.06.006.

[35]張露，黃巧玥，程聰，等．大豆GmCLC-d1/d2基因參與鹽脅迫適應(yīng)過程的生理功能[J]．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2023，46（6）：1084-1095．ZHANG L，HUANG Q Y，CHENG C，et al．Physiological function of soybean GmCLC-d1/d2 gene involved in salt stress adaptation[J]．J Nanjing Agric Univ，2023，46（6）：1084-1095．DOI： 10.7685/jnau.202210018.

[36]謝寅峰， 張千千， 劉偉龍，等.外源水楊酸對高氯酸鹽脅迫下水花生葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊慬J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報， 2010， 30（7）： 1457-1465. XIE Y F， ZHANG Q Q， LIU W L， et al. Effects of exogenous salicylic acid on the chlorophyll fluorescence characteristics of Alternanthera philoxeroides under perchlorate stress[J]. Acta Sci Circumstantiae， 2010， 30（7）： 1457-1465. DOI：10.13671/j.hjkxxb.2010.07.017.

[37]于平，喬飛.滲透脅迫及信號處理對海南粗榧葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊慬J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2021， 40（2）： 809-816. YU P， QIAO F. Effects of osmotic stress and signal substance treatment on chlorophyll fluorescence characteristics of Cephalotaxus hainanensis[J]. Genom Appl Biol， 2021， 40（2）： 809-816. DOI：10.13417/j.gab.040.000809.

（責(zé)任編輯 李燕文）