摘要：為構(gòu)建穩(wěn)定可靠的肺炎克雷伯菌肝膿腫（KPLA）動(dòng)物模型，選取18 g左右健康ICR小鼠，以高毒力動(dòng)物源肺炎克雷伯菌臨床分離株KP001為造模菌株，分別從接種方式（灌胃、滴鼻和腹腔注射，接種菌數(shù)為1×107 CFU）和接種劑量進(jìn)行摸索，并對(duì)造模成功小鼠的血清樣品進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、白蛋白、乳酸脫氫酶、總膽紅素等生化指標(biāo)的測(cè)定。結(jié)果表明：灌胃小鼠存活率100%，但肝臟未出現(xiàn)膿腫；滴鼻小鼠死亡率100%，肺臟病變明顯，40%死亡小鼠肝臟出現(xiàn)膿腫；腹腔注射1×106 CFU細(xì)菌后，小鼠存活率為75%以上，且存活小鼠肝臟均出現(xiàn)膿腫，成模率100%。病理切片顯示造模成功小鼠肝細(xì)胞排列紊亂，中央靜脈周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。生化指標(biāo)檢測(cè)顯示，與對(duì)照小鼠相比，造模成功小鼠的血清樣品中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶極顯著升高（P＜0.01），堿性磷酸酶極顯著下降（P＜0.01），谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白顯著下降（P＜0.05）。綜上分析表明，通過(guò)腹腔注射方式，接種1×106 CFU KP001菌株后可成功構(gòu)建KPLA小鼠模型，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶和堿性磷酸酶等生化指標(biāo)可用于評(píng)估模型建立效果。

關(guān)鍵詞：肺炎克雷伯菌；肝膿腫；動(dòng)物模型；生化指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S575.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0253?2301（2024）10?0029?07

DOI：10.13651/j.cnki.fjnykj.2024.10.005

陳紫怡，路佳臻，萬(wàn)兆豐，等.肺炎克雷伯菌肝膿腫小鼠模型的建立[J].福建農(nóng)業(yè)科技，2024，55（10）：29?35.

Establishment of the Mouse Model of Klebsiella pneumoniae Liver Abscess

CHEN Zi-yi1，LU Jia-zhen1，2，WAN Zhao-feng1，WEN Hui-ya1，2，WEI Jing-yun1，ZHANG Xin-yi1，ZENG Xu-jian1，HUANG Cui-qin1，3＊，BAO Yin-li1，3*

（1.College of Life Science，Longyan University，Longyan，F(xiàn)ujian 364012，China;2.College of Animal Science，F(xiàn)ujianAgriculture and Forestry University，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian 350002，China;3.Fujian University Engineering Research Centerfor the Prevention and Control of Animal Original Zoonosis，Longyan，F(xiàn)ujian 364012，China）

Abstract：In order to construct a stable and reliable animal model of Klebsiella pneumoniae liver abscess（KPLA），about 18 g healthy ICR mice were selected，and the highly virulent animal-derived Klebsiella pneumoniae clinical isolated strain KP001 was used as the model strain.Then，the inoculation methods（including the gastric irrigation，nasal drip and intraperitoneal injection，with the number of inoculated bacteria was 1×107 CFU）and the inoculation dosage were explored.The biochemical indexes of serum samples from the mice with successful modeling were determined，including the alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase，alkaline phosphatase，γ-glutamyl transferase，albumin，lactate dehydrogenase，and total bilirubin.The results showed that the survival rate of mice treated with gastric irrigation was 100%，but there was no abscess in the liver.The mortality rate of mice treated with nasal dripping was 100%，with obvious lung lesions，and the liver abscess occurred in 40%of the dead mice.After the intraperitoneal injection of 1×106 CFU bacteria，the survival rate of mice was more than 75%，and the liver abscesses appeared in the surviving mice，with the modeling rate of 100%.The pathological sections showed that the liver cells of the successfully modeled mice arranged in disorder，and a large number of inflammatory cells infiltrated around the central vein.The detection of biochemical indicators showed that compared with the control mice，theγ-glutamyl transferase in the serum samples of the successfully modeled mice was significantly increased（P＜0.01），the alkaline phosphatase was significantly decreased（P＜0.01），and the alanine aminotransferase and albumin were significantly decreased（P＜0.05）.In conclusion，the analysis showed that the KPLA mouse model could be successfully construct-ed by the intraperitoneal injection of 1×106 CFU KP001 strain.The biochemical indexes such asγ-glutamyl transferase and alkaline phosphatase could be used to evaluate the effect of model establishment.

Key words：Klebsiella pneumoniae；Liver abscess；Animal model；Biochemical indicators

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）是一種重要的人畜共患條件致病菌，屬于腸桿菌科克雷伯菌屬。通常情況下，這種菌在健康人和動(dòng)物的呼吸道和腸道中存在而不具致病性，然而，當(dāng)宿主免疫功能減弱、身體虛弱或長(zhǎng)期使用抗生素時(shí)，其可轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【?，引發(fā)人和動(dòng)物發(fā)病[1]。20世紀(jì)80年代，高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP）在我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)被首次報(bào)道，隨后亞洲、歐洲、北美等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)相繼報(bào)道[2?3]。與經(jīng)典型肺炎克雷伯菌（classic Klebsiella pneumonia，cKP）相比，hvKP具有更強(qiáng)的致病性、侵襲力和轉(zhuǎn)移性，并可導(dǎo)致原發(fā)性肝膿腫[3]。

肝膿腫（Liver abscess，LA）是由病原體侵入肝臟而引起的一種嚴(yán)重的化膿性疾病。導(dǎo)致肝膿腫發(fā)生的病原體較多，包括細(xì)菌、阿米巴、真菌、寄生蟲(chóng)等，其中細(xì)菌占比最高，達(dá)80%[4]。目前，KP已經(jīng)超過(guò)大腸桿菌成為獨(dú)立導(dǎo)致肝膿腫的首要病原菌[5?6]。數(shù)據(jù)顯示，在從肝膿腫感染者分離的病原菌中，KP約占50%[5?6]。此外，KP導(dǎo)致的肝膿腫（Klebsiella pneumoniae liver abscess，KPLA）具有一定的遷移性。HvKP可以從肝臟遷移至其他臟器或組織，引發(fā)感染，如肺、胸膜、前列腺、骨、關(guān)節(jié)、腎臟、脾臟、肌肉、筋膜、軟組織、皮膚、眼睛以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，在臨床防治中難度更大[7]。

目前，KPLA的發(fā)病機(jī)制仍未闡釋清楚，限制了新的防治技術(shù)的開(kāi)發(fā)，降低了從源頭遏制疾病發(fā)生的可能性。缺乏穩(wěn)定的、便于操作和獲得的KPLA動(dòng)物模型在一定程度上影響了相關(guān)工作的開(kāi)展。因此，本研究以1株動(dòng)物源hvKP臨床分離株為造模菌株，通過(guò)接種方式和接種劑量的摸索，建立穩(wěn)定的KPLA小鼠模型，并進(jìn)一步測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶等多個(gè)肝功能相關(guān)生化指標(biāo)，以期為研究KPLA發(fā)病機(jī)制提供良好的動(dòng)物模型，并便于評(píng)估模型建立效果。

1材料與方法

1.1菌株和試驗(yàn)動(dòng)物

本研究所用菌株KP001為hvKP，由獸醫(yī)公共衛(wèi)生研究室分離和保存。18 g左右SPF級(jí)健康ICR小鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，試驗(yàn)中按組飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房中，并每日給予潔凈飲用水和飼料。

1.2主要試劑

酵母提取物、胰蛋白胨購(gòu)自O(shè)XOID公司；瓊脂粉、革蘭氏染色試劑盒購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司；氯化鈉、PBS緩沖液、瓊脂糖、無(wú)菌無(wú)酶ddH2O購(gòu)自上海生工生物工程股份有限公司；4%多聚甲醛購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司；堿性磷酸酶測(cè)試盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶測(cè)試盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶測(cè)試盒、乳酸脫氫酶測(cè)試盒、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒、總膽紅素測(cè)試盒、白蛋白測(cè)試盒、總蛋白定量測(cè)定（BCA法）試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所有限公司；PCR Mix和核酸染料購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.3菌株復(fù)蘇及培養(yǎng)

以三區(qū)劃線法，將菌株KP001甘油凍存菌轉(zhuǎn)接至LB固體培養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)18 h。次日取出，挑取典型單菌落轉(zhuǎn)接至LB試管中，37℃、180 r·min?1過(guò)夜培養(yǎng)，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4動(dòng)物模型的建立

1.4.1接種方式的摸索按照1：100的比例將過(guò)夜培養(yǎng)的菌株KP001轉(zhuǎn)接至LB試管中，37℃、180 r·min?1培養(yǎng)至OD600≈1.0。4℃、5 000 r·min?1離心富集菌體，用無(wú)菌PBS緩沖液清洗菌體3遍，并調(diào)整菌數(shù)至5×107 CFU·mL?1。將30只健康ICR小鼠隨機(jī)分成6組，每組5只，分別標(biāo)記為A1～A6。其中A1～A3組分別以灌胃、滴鼻和腹腔注射的方式接種0.2 mL菌液，A4～A6組分別以相應(yīng)的方式接種等量PBS緩沖液。接種后0～7 d內(nèi)定時(shí)觀察小鼠臨床癥狀及存活情況。期間死亡小鼠立即剖檢，并觀察組織病變。存活小鼠于觀察期結(jié)束后采用頸椎脫臼法處死，并剖檢觀察肝臟是否出現(xiàn)膿腫。

1.4.2接種劑量的摸索參照1.4.1培養(yǎng)菌株KP001并富集菌體，調(diào)整菌數(shù)分別至5×108、5×107、5×106、5×105、5×104、5×103 CFU·mL?1。將56只健康ICR小鼠隨機(jī)分為7組，每組8只，分別標(biāo)記為B1～B7。其中，B1～B6組以腹腔注射的方式接種0.2 mL菌液，接種菌數(shù)分別為1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103 CFU；B7組作為對(duì)照組，以腹腔注射的方式接種等體積PBS緩沖液。參照1.4.1方法觀察小鼠。

1.4.3肝膿腫模型的建立參照1.4.1培養(yǎng)菌株KP001并富集菌體，調(diào)整菌數(shù)至5×106 CFU·mL?1。選擇13只健康ICR小鼠，隨機(jī)分成2組，分別標(biāo)記為KP感染致肝膿腫組（KPLA組）和對(duì)照組（CON組）。其中KPLA組8只小鼠，腹腔接種0.2 mL菌液；CON組5只小鼠，腹腔接種0.2 mL PBS。接種后0～7d內(nèi)定時(shí)觀察小鼠臨床癥狀及存活情況。存活小鼠通過(guò)眼球摘除法采集血液，并將全血于25℃孵育2 h后置于4℃過(guò)夜，次日吸取血清至1.5 mL EP管中，?80℃保存。隨后采用頸椎脫臼法處死小鼠，剖檢并肉眼觀察肝臟有無(wú)膿腫形成以及膿腫大小、分布等情況。取肝臟固定于4%多聚甲醛，送至杭州厚愛(ài)生物科技有限公司進(jìn)行標(biāo)本包埋、石蠟切片和HE染色。

1.5肝膿腫小鼠病原菌的鑒定

用無(wú)菌一次性接種環(huán)蘸取肝臟膿腫部位，三區(qū)劃線法接種于LB固體培養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)18 h后，挑取代表性單菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及KP特異性鑒定PCR。引物序列為F：5'-TGAT TGCATTCGCCACTGG-3'；R：5'-GGTCAACCCAAC GATCCTG-3'，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成[7]。反應(yīng)體系為2×PCR Mix 12.5μL、上下游引物各1μL、ddH2O 10.5μL，蘸取菌落與PCR反應(yīng)液混合。反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后于紫外凝膠成像系統(tǒng)儀觀察。

1.6肝功能相關(guān)生化指標(biāo)的測(cè)定

參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)KPLA組和CON組中存活小鼠血清樣品進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、白蛋白、乳酸脫氫酶、總膽紅素等生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用GraphPad Prism 8.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，兩組間數(shù)據(jù)差異性分析采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行。

2結(jié)果與分析

2.1小鼠肝膿腫模型接種方式的摸索

分別采用灌胃（A1組）、滴鼻（A2組）和腹腔注射（A3組）3種方式接種小鼠，接種菌數(shù)為1×107 CFU；對(duì)照組（A4～A6組）分別以相同方式接種等體積PBS緩沖液。接種后觀察7 d，結(jié)果顯示A1組和A4～A6組小鼠均未發(fā)生死亡，剖檢未見(jiàn)明顯病理變化，肺臟正常（圖1A、1B），肝臟未出現(xiàn)膿腫（圖1E、1F）。A2組在接種后4 d內(nèi)小鼠全部死亡，剖檢可見(jiàn)肺臟嚴(yán)重腫脹、淤血（圖1C），其中2只小鼠肝臟邊緣可見(jiàn)輕微膿腫（圖1G）。A3組小鼠存活2只，剖檢肝臟可見(jiàn)明顯膿腫（圖1H），肺臟無(wú)明顯變化（圖1D）；死亡小鼠剖檢可見(jiàn)肺臟淤血、腫脹，肝臟無(wú)膿腫。膿腫部位細(xì)菌分離鑒定見(jiàn)圖2A，菌體為兩端鈍圓的革蘭氏陰性短桿菌，呈單個(gè)或成對(duì)排列；KP特異性鑒定PCR結(jié)果（圖2B）顯示，挑取的多個(gè)單菌落在428 bp處擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的目的條帶，證實(shí)該膿腫是由KP感染導(dǎo)致的。因此，后續(xù)試驗(yàn)選擇腹腔注射方法用于肝膿腫模型的建立。

2.2小鼠肝膿腫模型接種劑量的摸索

采用腹腔注射方法，B1～B6組分別接種1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103 CFU細(xì)菌，B7組接種等體積PBS。接種后觀察7 d，由圖3可知，B6組和B7組未發(fā)生小鼠死亡；B1組小鼠死亡6只，存活率為25%；B2組小鼠死亡5只小鼠，存活率為37.5%；B3組小鼠死亡2只，存活率為75%；B4、B5組小鼠各死亡1只，存活率均為87.5%；說(shuō)明小鼠存活率與接種菌數(shù)呈負(fù)相關(guān)。存活小鼠剖檢可見(jiàn)，B1、B2、B3組小鼠肝臟均出現(xiàn)膿腫，B4組存活的7只小鼠中3只小鼠肝臟出現(xiàn)膿腫，B5、B6組存活小鼠肝臟未出現(xiàn)膿腫，說(shuō)明肝膿腫出現(xiàn)的概率與接種菌數(shù)呈正相關(guān)。因此，后續(xù)試驗(yàn)選擇接種劑量為1×106 CFU。

2.3小鼠肝膿腫模型的建立

以最佳接種劑量（1×106 CFU）腹腔注射8只小鼠（KPLA組），并觀察7 d。結(jié)果顯示，1只小鼠死亡，存活7只小鼠剖檢可見(jiàn)肝臟出現(xiàn)膿腫，但不同小鼠之間膿腫部位和大小存在差異。5只對(duì)照小鼠（CON組）全部健活，剖檢肝臟正常，未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)的病理變化。

2.4小鼠肝臟組織切片觀察

由圖4可知，CON組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)緊密，肝小葉緊湊有序，肝細(xì)胞形態(tài)正常，中央靜脈周圍無(wú)炎性細(xì)胞（圖4A）；KPLA組小鼠在腹腔注射1×106 CFU細(xì)菌7 d后，肝臟出現(xiàn)膿腫，肝細(xì)胞排列紊亂，少量肝細(xì)胞壞死溶解，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，尤其是在中央靜脈周圍（圖4B）。

2.5小鼠肝功能相關(guān)生化指標(biāo)的測(cè)定

分別對(duì)KPLA組和CON組小鼠血清樣品進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、白蛋白、乳酸脫氫酶、總膽紅素的測(cè)定。由圖5可知，與CON組相比，接種1×106 CFU細(xì)菌7 d后，KPLA組小鼠血清樣品中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶極顯著升高（P＜0.01），堿性磷酸酶極顯著下降（P＜0.01），谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白顯著下降（P＜0.05），谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶和總膽紅素差異不顯著（P＞0.05）。

Fig.5 Measurement of liver function-related biochemical indicatorsin KPLA model mice

3討論與結(jié)論

動(dòng)物模型的建立對(duì)研究KPLA的發(fā)病機(jī)制、防治效果的評(píng)價(jià)具有重要的意義。本試驗(yàn)以健康ICR小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)腹腔注射1×106 CFU hvKP菌株KP001，成功構(gòu)建了KPLA小鼠模型，為hvKP致病機(jī)理研究和療效評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。

試驗(yàn)動(dòng)物、病原微生物以及造模方式是動(dòng)物模型構(gòu)建的三大主要因素。以往的研究中，KPLA動(dòng)物模型常采用免疫力缺陷小鼠進(jìn)行，如在糖尿病小鼠基礎(chǔ)上灌胃KP菌株等，但存在“造模成功率低”“無(wú)法排除高糖干擾”等問(wèn)題[8]。本試驗(yàn)以免疫力正常的健康小鼠為對(duì)象，成功構(gòu)建了KPLA模型，小鼠存活率75%以上，存活小鼠膿腫成模率為100%。在健康小鼠中成功造模，這可能與優(yōu)質(zhì)的菌株密切相關(guān)。大量研究表明，引起肝膿腫的KP大多為hvKP[9]。本研究所用KP001菌株分離自1例急性死亡華南虎幼虎的肺臟細(xì)支氣管。前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其具有較強(qiáng)的致病力，LD50為3.21×106 CFU，并攜帶黏液表型調(diào)節(jié)基因A（rmpA）、鐵載體相關(guān)毒力基因（iroB、aerobactin、iucA）、假定轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白編碼基因（peg344）等與hvKP高度相關(guān)的毒力基因。這些毒力基因的存在，可以幫助細(xì)菌抵抗宿主補(bǔ)體系統(tǒng)介導(dǎo)的殺菌作用，競(jìng)爭(zhēng)組織血液中的鐵，并通過(guò)生成催化羥基自由基發(fā)揮抗氧化作用，從而增強(qiáng)菌株毒力，加重菌株對(duì)宿主組織的損傷[10?12]。此外，正確的造模方式也是關(guān)鍵因素。KP研究中常通過(guò)鼻腔注射、氣溶膠感染、尾靜脈注射等方法構(gòu)建基于呼吸道感染模型，并進(jìn)一步用于KP的評(píng)價(jià)[13?14]。但這些模型無(wú)法適用于KPLA的研究。本研究摸索了灌胃、滴鼻和腹腔注射3種方法，結(jié)果顯示灌胃小鼠存活率最高，但無(wú)法產(chǎn)生肝膿腫；滴鼻小鼠死亡率最高，肺臟病變明顯，少量小鼠可產(chǎn)生肝膿腫，成模率低；腹腔注射小鼠在接種適量菌液后，存活率較高，大部分存活小鼠可產(chǎn)生肝膿腫，成模率高。

肝膿腫具有隱匿性。KPLA模型在臨床使用時(shí)，無(wú)法通過(guò)臨床癥狀來(lái)判定模型建立是否成功。為了便于模型建立效果的評(píng)價(jià)，本研究在病理剖檢確認(rèn)肝膿腫產(chǎn)生的情況下，進(jìn)一步測(cè)定和比對(duì)了血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、白蛋白、乳酸脫氫酶和總膽紅素等肝臟相關(guān)生化指標(biāo)，結(jié)果顯示，KP感染并產(chǎn)生肝膿腫小鼠血清樣品中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶極顯著升高（P＜0.01），堿性磷酸酶極顯著下降（P＜0.01），谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白顯著下降（P＜0.05）。這些指標(biāo)的變化，將有助于在不進(jìn)行動(dòng)物剖檢的情況下評(píng)估KPLA小鼠模型是否成功建立。鄭亞虹等利用人源K1血清型hvKP菌株建立了基于C57BL/6J小鼠的肝膿腫模型，造模小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶均明顯升高[15]。這與本試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果存在差異，可能是由于不同的菌株和小鼠品系所造成的，同時(shí)也提示不同種hvKP菌株導(dǎo)致的KPLA可能在生化指標(biāo)上存在差異。

綜上所述，本研究建立了基于hvKP菌株的腹腔接種KPLA小鼠模型，最佳接種劑量為1×106 CFU，同時(shí)篩選出γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白等多個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)可用于評(píng)估模型建立效果，為KPLA的研究提供了良好的模型基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]陸承平，劉永杰.獸醫(yī)微生物學(xué)（第六版）［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2021.

[2]LIU Y C，CHENG D L，LIN C L.Klebsiella pneumoniae liver abscess associated with septic endophthalmitis［J］.Arch Intern Med，1986，146（10）：1913?1916.

[3]CHEN J J，ZHANG H，LIAO X L.Hypervirulent Klebsiellapneumoiniae［J］.Infect Drug Resist，2023，16：5243?5249.

[4]李花.肝膿腫肺炎克雷伯菌血清分型及毒力基因的研究［D］.遼寧：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，2018.

[5]劉霞，陳雪娥，陳金通，等.細(xì)菌性肝膿腫的臨床特點(diǎn)分析［J］.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)自然版，2018，52（4）：271?273.

[6]雷云生.醫(yī)院細(xì)菌性肝膿腫患者病原菌分布、耐藥性及危險(xiǎn)因素分析［J］.中國(guó)處方藥，2022，20（4）：168?170.

[7]CHUANG Y C，SU J H，LIN C N，et al.Cloning of a gene encoding a unique haemolysin from Klebsiella pneumoniae and its potential use as a species-specific gene probe［J］.Microb Pathog，2002，33（1）：1?6.

[8]ZHANG M L，PAN L，XU D，et al.The NF-κB signaling pathway serves an important regulatory role in Klebsiella pneumoniae liver abscesses［J］.Exp Ther Med，2018，15（6）：5443?5449.

[9]JUN J B.Klebsiella pneumoniae liver abscess［J］.J Infect Chemother，2018，50（3）：210?218.

[10]馬玉蘭.肺炎克雷伯菌鐵載體產(chǎn)量與毒力和碳青霉烯類耐藥的關(guān)系［D］.石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2019.

[11]PACZOSA M K，MECSAS J.Klebsiella pneumoniae：going on the offense with a strong defense［J］.Microbiol Mol Biol Rev，2016，80（3）：629?661.

[12]RUSSO T A，OLSON R，F(xiàn)ANG C T，et al.Identification of biomarkers for differentiation of hypervirulent Klebsiella pneumoniae from classical K.pneumoniae［J］.J Clin Microbiol，2018，56（9）：e00776?18.

[13]劉洋，李艷菊，淘奕汐，等.肺炎克雷伯菌兩種感染方法小鼠模型的研究［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2018，28（19）：2881?2884.

[14]張之珺，張麗麗，呂蒙，等.高毒力肺炎克雷伯菌兩種金黃地鼠呼吸道感染模型比較研究［J］.軍事醫(yī)學(xué)，2024，48（1）：30?35.

[15]鄭亞虹，岳程程，張慧，等.肺炎克雷伯菌肝膿腫小鼠模型的制備與評(píng)價(jià)［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2021，56（11）：1701?1706.

（責(zé)任編輯：林玲娜）