摘 要：本試驗對一例蛋雞大腸桿菌和球蟲混合感染病例進行診治，通過剖檢病死雞，觀察病理變化，并采集病死雞的心、肝、盲腸等器官組織進行細菌分離、革蘭氏染色鏡檢、生化試驗，取腹瀉糞便采用飽和食鹽水法檢查球蟲卵囊，以及對分離菌進行耐藥性檢測。結(jié)果顯示，分離菌在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中產(chǎn)生周圍光滑、表面濕潤的灰白色菌落，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基中形成紅色、表面光滑、中等大小的菌落，在大腸桿菌顯色培養(yǎng)基中形成稍隆起的藍色菌落；革蘭氏染色鏡檢為粉紅色的革蘭氏陰性短桿菌；分離菌發(fā)酵麥芽糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露醇、鼠李糖，不發(fā)酵蔗糖，不產(chǎn)生H2S，VP試驗陰性，MR試驗陽性，分離菌的生物學(xué)特點與大腸桿菌高度符合。飽和食鹽水漂浮法檢查，可見視野內(nèi)有大小不等、卵圓形的球蟲卵囊。大腸桿菌藥敏檢測結(jié)果顯示，大腸桿菌僅對氟苯尼考、頭孢曲松和頭孢他啶表現(xiàn)為敏感，而對其他藥物表現(xiàn)為耐藥。結(jié)果表明，本病例由大腸桿菌和球蟲混合感染引起，并對發(fā)病雞群采取綜合防控措施控制住了病情。

關(guān)鍵詞：蛋雞；大腸桿菌；球蟲；診治

中圖分類號：S858.31 文獻標(biāo)識碼：B 文章編號：1673-1085（2024）07-0079-05

當(dāng)前養(yǎng)雞生產(chǎn)中，多種病原體混合感染在臨床上十分常見，癥狀復(fù)雜，易與其它疾病混淆，僅靠臨床特征和病理特征難以作出準(zhǔn)確的判斷，需要結(jié)合實驗室診斷技術(shù)才能找到疫病的病因。雞大腸桿菌病是由某些致病性大腸桿菌引起的細菌性傳染病，該疾病的急性期以敗血癥為特征，亞急性期多表現(xiàn)為氣囊炎和纖維素性漿膜炎，包括心包炎、肝周炎和腹膜炎等[1]，發(fā)病率高，傳播迅速，防治不及時通常導(dǎo)致死亡率上升，對養(yǎng)雞業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。雞球蟲病主要由某些寄生于雞腸道的艾美耳屬球蟲引起[2]，可使感染雞消瘦、腹瀉，甚至貧血，雛雞生長遲緩，成年雞生產(chǎn)性能下降，在養(yǎng)雞場流行比較廣泛，嚴重阻礙雞群健康生長和發(fā)育。

1 "材料與方法

1.1 "病料

2023年8月，采集來自西峽縣某蛋雞養(yǎng)殖場不同發(fā)病日齡的病死雞的心、肝、脾和盲腸等器官組織以及腹瀉糞便，裝袋送檢。同時剖檢病死雞并觀察、記錄病理變化。

1.2 "試劑及儀器

普通瓊脂培養(yǎng)基、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、大腸桿菌成套生化鑒定管，均購自青島海博生物科技有限公司。18種抗生素藥敏紙片，購自杭州濱河微生物試劑有限公司。飽和食鹽水（具體配制方法為稱取400 g NaCL加入1 000 mL沸水，加熱產(chǎn)生沉淀為止。）、量筒和60目銅篩，由本實驗室提供。顯微鏡，由日本OLYMPUS公司生產(chǎn)。

1.3 "細菌分離培養(yǎng)

將采集的病料分別無菌接種于大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 18～24 h，觀察菌落特征。挑取特征性單個菌落進行革蘭氏染色，并涂片鏡檢。

1.4 "生化鑒定

按照大腸桿菌成套生化鑒定管說明書進行操作，取上述純化的菌落接種于生化反應(yīng)管，并參考《伯杰細菌鑒定手冊》判斷結(jié)果。

1.5 "飽和鹽水漂浮蟲卵檢查法[3]

取糞樣病料2～3ｇ加入約50 mL飽和鹽水，混勻，經(jīng)60目銅篩過濾去除沉渣，濾液置入燒杯中，用鐵絲吊環(huán)蘸取濾液數(shù)滴，滴在載玻片中央，蓋上蓋玻片、壓實，在低倍顯微鏡下觀察球蟲卵囊。

1.6 "藥敏試驗

對分離菌采用K-B紙片擴散法測定其對18種抗菌藥物的敏感性。將純化分離菌液接種于肉湯培養(yǎng)基増菌，用生理鹽水調(diào)整菌液濃度至1×108 CFU/mL，均勻涂布于平皿表面，待干燥后，按照適當(dāng)間距平鋪藥敏紙片，置于37 ℃溫箱內(nèi)18～24 h，然后測定抑菌圈直徑（D）。根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）公布的標(biāo)準(zhǔn)判定分離菌藥敏性[4]，D＞20 mm為敏感（S），15 mm＜D≤20 mm為中度敏感（I），D≤15 mm為耐藥（R）。

2 "結(jié)果

2.1 "剖檢變化

病死雞肝臟病變主要表現(xiàn)為肝周炎，肝臟腫大，表面充血或有出血點，外面包裝一層纖維性薄膜；心包積液，心臟外膜有纖維性滲出物，形成心包炎；腸道病變比較嚴重，剪開明顯看到腸壁薄、黏膜水腫、充血，盲腸腫大、內(nèi)糜爛，潰瘍嚴重。其它器官未見明顯病變。

2.2 "細菌培養(yǎng)

分離菌在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中產(chǎn)生周圍光滑、表面濕潤的灰白色菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基中形成紅色、表面光滑、中等大小的菌落；在大腸桿菌顯色培養(yǎng)基中形成稍隆起的藍色菌落。革蘭氏染色鏡檢為粉紅色的革蘭氏陰性短桿菌。見圖1。

2.3 "生化反應(yīng)結(jié)果

分離菌發(fā)酵麥芽糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露醇、鼠李糖，不發(fā)酵蔗糖，不產(chǎn)生H2S，VP試驗陰性，MR試驗陽性。分離菌的生化反應(yīng)結(jié)果見表1。

分離菌生化特性與《伯杰細菌鑒定手冊》中的大腸桿菌生化特性一致，結(jié)合細菌培養(yǎng)結(jié)果和剖解特征，判斷該分離菌為大腸桿菌。

2.4 "球蟲檢查

取腹瀉糞便按步驟制成壓片，置40倍顯微鏡下觀察，可見視野內(nèi)有大小不等、卵圓形的球蟲卵囊。球蟲卵囊檢查結(jié)果見圖2。

2.5 "診斷結(jié)果

本試驗通過病死雞的剖檢變化、細菌培養(yǎng)、生化試驗和飽和鹽水漂浮法檢查球蟲卵囊等診斷方法，確診該病為大腸桿菌和球蟲混合感染引起的。

2.6 "藥敏試驗

采用K-B紙片法檢測大腸桿菌耐藥性，試驗結(jié)果見表2。大腸桿菌僅對氟苯尼考、頭孢曲松和頭孢他啶表現(xiàn)為敏感，而對復(fù)方新諾明、萬古霉素、氨芐西林、四環(huán)素、紅霉素、慶大霉素、磺胺甲氧異噁唑、多黏霉素、強力霉素表現(xiàn)為耐藥。

3 "預(yù)防與治療

根據(jù)上述診斷結(jié)果，綜合判斷為大腸桿菌和球蟲混合感染而導(dǎo)致雞群發(fā)病。及時清理糞污和病死雞，立即對發(fā)病雞的圈舍、料槽、飲水器具、地面等使用二氧化氯消毒粉配成的消毒液進行噴灑消毒，保持圈舍干燥、通風(fēng)良好。雞群輪換使用0.2%次氯酸鈉與0.2%過氧乙酸帶雞消毒。在飲水中添加多維素，供全部雞群飲用，增加免疫力。根據(jù)藥敏結(jié)果，給病雞飼喂添加地克珠利預(yù)混劑（每100g拌料150 kg，1次/d）、白頭翁散（2 g/只，2次/d）和10%氟苯尼考粉（按1 kg體重內(nèi)服0.2 g，2次/d）的飼料，連用5 d。經(jīng)過5 d的治療，病死雞未見增加，發(fā)病雞只也未增加，雞群逐漸恢復(fù)正常。鑒于該雞場先前多次發(fā)生過雞球蟲病，建議根據(jù)雞場實際情況進行球蟲病疫苗的免疫接種，并定期在飼料中交替添加青蒿常山顆粒、五味常青顆粒（福建中農(nóng)牧生物藥業(yè)有限公司）、升蛋專家（主要成分為地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌、雙歧因子以及中草藥提取物等，山東德福達生物科技開發(fā)有限公司）等中獸藥產(chǎn)品和微生態(tài)制劑，杜絕球蟲病的發(fā)生。

4 "討論

大腸桿菌菌體表面抗原主要有O、H和K，抗原結(jié)構(gòu)不同導(dǎo)致致病力和血清型存在差異，少數(shù)血清型如K88、K99等有致病力，多數(shù)沒有致病性。大腸桿菌屬于條件性致病菌，當(dāng)雞保持健康狀況，致病性大腸桿菌不會導(dǎo)致雞發(fā)?。灰坏┯龅酵饨绛h(huán)境和飼養(yǎng)條件發(fā)生變化，如天氣突變、更換飼料、轉(zhuǎn)群、驅(qū)趕等應(yīng)激，或者感染其它病原微生物導(dǎo)致機體免疫力下降，致病性大腸桿菌便會迅速在腸道內(nèi)大量繁殖成為優(yōu)勢菌群，釋放大量毒素，引發(fā)全身性病理癥狀[5]。縱觀臨床上一些合并感染和繼發(fā)感染的病例，多數(shù)能從典型病變器官或組織中分離出大腸桿菌[6]。走訪該場得知，在雞群發(fā)病前幾天，降雨較多，雞舍潮濕、溫度下降且未及時清理糞污，可能雞舍衛(wèi)生條件和空氣質(zhì)量差誘使雞群發(fā)病。因此，建議養(yǎng)雞場改善舍內(nèi)衛(wèi)生，注意天氣變化，做好雞舍防潮措施，保持干燥和良好的通風(fēng)；加強營養(yǎng)管理，補充電解多維提高機體免疫力。調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)，本場部分雞舍內(nèi)雞群，飼養(yǎng)密度較大，舍內(nèi)有刺鼻的氨氣味道和較多粉塵，可通過加強飼養(yǎng)管理，減少各種應(yīng)激因素，為雞群創(chuàng)造事宜的生活環(huán)境。

大腸桿菌血清型較多且不同地區(qū)流行的血清型不同，加上其極易產(chǎn)生耐藥性[7]，給防治本病增加了較大難度，因此，對大腸桿菌進行抗生素耐藥性檢測對于診治本病十分必要。由于試驗條件限制，本試驗未對大腸桿菌血清型進行鑒定，但藥敏試驗有助于了解大腸桿菌對不同抗生素耐藥性的情況，從而為臨床抗生素篩選和使用提供參考。從大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果可知，大腸桿菌僅對氟苯尼考、頭孢曲松和頭孢他啶表現(xiàn)為敏感，而對復(fù)方新諾明、萬古霉素、氨芐西林、四環(huán)素、紅霉素、慶大霉素、磺胺甲氧異唑、多黏霉素、強力霉素表現(xiàn)為耐藥。表明該場流行的大腸桿菌耐藥比較嚴重，這與飼養(yǎng)者的用藥行為習(xí)慣、流行菌株血清型和攜帶不同致病力的毒力因子等因素有關(guān)。本次發(fā)病選用了高敏藥物氟苯尼考治療，為減少耐藥菌株進一步增多和耐藥性增強，最好交替使用兩種以上敏感藥物，建議多采用中草藥、益生菌、抗菌肽等防治。

球蟲病主要是由艾美耳球蟲引起的腸道疾病，流行于全球各地，其發(fā)病率可高達100%。目前的主要控制方法包括抗球蟲藥物和疫苗。然而，球蟲耐藥性和疫苗效力問題對有效防治球蟲病構(gòu)成了新的挑戰(zhàn)。對絕大多數(shù)抗球蟲藥來講，一旦球蟲對哪種藥物產(chǎn)生了耐藥性，球蟲就可耐受其連續(xù)使用濃度的4～8倍，乃至更高的濃度，而這種濃度必然會對雞自身帶來嚴重的毒害作用[8]。本病例在治療雞球蟲病中采用了地克珠利，取得了較好的治療效果。地克珠利作為一種廣譜高效、新型、低毒的抗球蟲藥，抗球蟲指數(shù)較高，具有無毒、安全、無停藥期、無殘留及作用迅速的特點，在球蟲生活史整個生長發(fā)育階段都可以干擾蟲體線粒體呼吸代謝功能和阻礙細胞核的分裂，抑制孢子化卵囊形成，從而徹底殺死球蟲，被廣泛用于雞球蟲病的治療[9]。近年來，中草藥、微生態(tài)制劑在防治球蟲病方面發(fā)揮了顯著作用，受到大家的關(guān)注。中草藥中的某些成分和微生態(tài)制劑能夠刺激機體的免疫應(yīng)答，提高胃腸道的抗應(yīng)激能力和腸道損傷修復(fù)能力，從而起到防治球蟲病的作用[10]。

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