摘""要：查爾酮合成酶（chalcone"synthase，"CHS）是植物類(lèi)黃酮化合物合成途徑的第一個(gè)關(guān)鍵酶。前期在龍眼（Dimocarpus"longan"Lour.）中鑒定了與花色素苷合成密切相關(guān)的DlCHS9，發(fā)現(xiàn)與紅皮龍眼相比，其在石硤龍眼果皮中的表達(dá)水平較低。為了進(jìn)一步探究DlCHS9的生物學(xué)功能，本研究分別克隆石硤龍眼DlCHS9-SX和紅皮龍眼DlCHS9-HP基因，氨基酸序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，兩二者僅在第328位氨基酸位點(diǎn)有差異，但該位點(diǎn)并不是關(guān)鍵酶活性位點(diǎn)。進(jìn)一步構(gòu)建植物表達(dá)載體，并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法將DlCHS9-SX轉(zhuǎn)入煙草。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因煙草花瓣更紅，花色素苷含量更高，說(shuō)明DlCHS9-SX超表達(dá)能促進(jìn)煙草花瓣花色素苷的積累。分析DlCHS9的啟動(dòng)子序列表明，相似度為96.2%，與DlCHS9-HP的啟動(dòng)子相比，DlCHS9-SX的啟動(dòng)子有32個(gè)SNP、14個(gè)堿基插入和12個(gè)堿基刪除，多1個(gè)脫落酸響應(yīng)元件（ABRE），少1個(gè)光反應(yīng)元件（Box4）、1個(gè)低溫響應(yīng)元件（LTR）和1個(gè)MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件。綜上所述，DlCHS9-SX是石硤龍眼花色素苷合成的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因之一，而其啟動(dòng)子序列與紅皮龍眼差異較大，可能是其在石硤果皮中表達(dá)較低的重要原因之一。

關(guān)鍵詞：龍眼；DlCHS9；煙草；花色素苷中圖分類(lèi)號(hào)：S667.2""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Sequence"and"Function"Analysis"of"DlCHS9"rRelated"to"Anthocyanin"Biosynthesis"in"Longan

LI"Yanhong2，"CAI"Qin2，"SHEN"Wei2，"DU"Lina2，"CHEN"Zhe1，"TAN"Fang2，"LAI"Biao2，"HU"Fuchu*1*

1."Institute"of"Tropical"Fruit"Trees，"Hainan"Academy"of"Agricultural"Sciences"/"Key"Laboratory"of"Genetic"Resources"Evaluation"and"Utilization"of"Tropical"Fruits"and"Vegetables"（Co-construction"by"Ministry"and"Province"and"Ministry"of"Agriculture"and"Rural"Affairs）"/"Key"Laboratory"of"Tropical"Fruit"Tree"Biology"of"Hainan"Province"/"Haikou"Scientific"Observation"and"Experimental"Station"for"Tropical"Fruit"Trees，"Ministry"of"Agriculture"andnbsp;Rural"Affairs，"Haikou，"Hainan"571100，"China;"2."School"of"Advanced"Agriculture"and"Bioengineering，"Yangtze"Normal"University，"Chongqing"408100，"China

Abstract："Chalcone"synthase"is"a"crucial"enzyme"in"the"initial"stage"of"the"flavonoid"biosynthetic"pathway."To"explore"the"biological"functions"of"our"previously"identified"chalcone"synthase"coding"gene"DlCHS9"from"longan，"which"is"associated"with"anthocyanin"accumulation，"DlCHS9-SX"and"DlCHS9-HP"from"Shixia"and"Hongpi"longan，"were"cloned"respectively."Amino"acid"sequences"of"DlCHS9-SX"and"DlCHS9-HP"were"compared"and"found"to"differ"only"at"position"328，"which"was"not"a"key"active"site."Subsequently，"an"expression"vector"was"created，"and"the"Agrobacterium-mediated"leaf"disc"method"was"used"to"introduce"DlCHS9-SX"into"wild"tobacco."The"anthocyanin"content"in"the"petals"of"transgenic"tobacco"was"notably"higher"than"that"in"the"wild"type，"suggesting"that"the"DlCHS9-SX"gene"enhances"anthocyanin"accumulation"in"tobacco"petals."The"promoter"sequences"of"the"two"DlCHS9"genes"revealed"a"similarity"of"96.2%."Compared"to"the"promoter"of"DlCHS9-HP，"the"promoter"of"DlCHS9-SX"had"32"SNPs，"14"base"insertions，"and"12"base"deletions."Specifically，"the"DlCHS9-SX"promoter"contained"an"additional"abscisic"acid"responsive"element"（ABRE），"one"fewer"light-responsive"element"（Box4），"one"less"low"temperature-responsive"element"（LTR），"and"one"less"MYC"transcription"factor"binding"site."In"conclusion，"DlCHS9-SX"plays"a"pivotal"role"as"a"structural"gene"in"longan"anthocyanin"biosynthesis."The"differences"in"the"DlCHS9"promoter"in"Shixia"longan"may"contribute"to"its"lower"expression"level.

Keywords："Dimocarpus"longan"Lour;"DlCHS9;"tobacco;"anthocyanin

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2024.11.007

果實(shí)顏色是決定果實(shí)品質(zhì)和影響商品價(jià)值的重要因素之一。豐富多樣的果實(shí)顏色深受消費(fèi)者的喜愛(ài)，也是育種者的重要育種目標(biāo)?；ㄉ剀帐枪麑?shí)重要的呈色黃酮類(lèi)物質(zhì)。花色素苷生物合成途徑是植物類(lèi)黃酮代謝途徑的一個(gè)分支，是通過(guò)多個(gè)基因參與的苯丙氨酸途徑。查爾酮合成酶基因（chalcone"synthase，"CHS）是該途徑核心階段的第一個(gè)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因，屬于花色素苷生物合成的早期合成基因[1]。在許多物種如蘿卜[2]、鴛鴦茉莉[3]、小蒼蘭[4]等的研究均表明CHS的表達(dá)水平與不同組織花色素苷的積累量密切相關(guān)?；ㄉ剀丈锖铣傻慕Y(jié)構(gòu)基因受到MYB、bHLH和WD40這三3類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控[5]。研究表明，光在MYB轉(zhuǎn)錄因子對(duì)CHS基因調(diào)控的過(guò)程可能發(fā)揮了重要作用[6]。

龍眼（Dimocarpus"longan"Lour）是無(wú)患子科龍眼屬植物，是中國(guó)南方地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)果樹(shù)作物。我國(guó)主栽的龍眼品種果皮通常呈現(xiàn)黃褐色或者黃灰色，色澤單一，限制了果實(shí)生物學(xué)特征的多樣性和市場(chǎng)潛力。而在東南亞地區(qū)有一個(gè)果皮呈紅色的紅皮龍眼野生品種，它的發(fā)現(xiàn)增加了龍眼果實(shí)顏色類(lèi)型并為龍眼新品種培育提供了候選材料[7]。YiI等[8]研究表明紅皮龍眼果皮的紅色主要因?yàn)榛ㄉ剀盏姆e累。本研究前期發(fā)現(xiàn)龍眼基因組中DlCHS有8個(gè)成員，其中DlCHS9的表達(dá)水平與紅皮龍眼和石硤龍眼各組織的花色素苷含量呈正相關(guān)，且DlCHS9在紅皮龍眼果皮中的表達(dá)水平明顯高于石硤龍眼果皮，因此DlCHS9是龍眼花色素苷的生物合成的關(guān)鍵基因[9]。為了進(jìn)一步探究龍眼DlCHS9的生物學(xué)功能，本研究以石硤龍眼（SX）和紅皮龍眼（HP）為材料，分析兩者DlCHS9的推測(cè)氨基酸序列差異，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化煙草分析DlCHS9-SX功能，并比較兩二者的啟動(dòng)子序列。本研究為探明普通龍眼果皮不積累花色素苷的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1""材料與方法

1.1""材料

石硤龍眼、紅皮龍眼葉片樣品采自重慶市涪陵區(qū)長(zhǎng)江師范學(xué)院校內(nèi)龍眼基地。樣品采集后使用液氮迅速冷凍，并置于–80"℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2""方法

1.2.1""DNA、RNA提取及反轉(zhuǎn)錄合成cDNA""利用CTAB法提取石硤龍眼、紅皮龍眼和轉(zhuǎn)基因煙草植株葉片DNA。使用Magen公司的Hipure"Plant"RNA"Mini"Kit試劑盒分別提取石硤龍眼葉片、紅皮龍眼葉片、煙草W38的RNA。采用TaKaRa的SuperScipt"OneStep"RT-PCR"System試劑盒進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄合成第一1條鏈cDNA。

1.2.2""DlCHS9基因克隆、超表達(dá)載體的構(gòu)建及其啟動(dòng)子的克隆""根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的轉(zhuǎn)錄組序列，設(shè)計(jì)特異引物DlCHS9-F和DlCHS9-R（表1），分別以石硤龍眼葉片的cDNA和泰國(guó)紅皮龍眼葉片的cDNA為模板進(jìn)行特異PCR擴(kuò)增，然后將得到的片段通過(guò)Gibson組裝的方法分別重組到EcoR"Ⅰ和Xhonbsp;Ⅰ線性化的pSAK277載體上，將連接產(chǎn)物分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α，經(jīng)菌落PCR初篩，將陽(yáng)性質(zhì)粒送至華大基因進(jìn)行序列測(cè)定。

根據(jù)龍眼基因組數(shù)據(jù)庫(kù)查找選取DlCHS9基因的上游2000"bp當(dāng)作啟動(dòng)子序列，設(shè)計(jì)特異引物proDlCHS9-F和proDlCHS9-R（表1），分別以石硤龍眼的DNA和紅皮龍眼的DNA為模板進(jìn)行特異PCR擴(kuò)增，純化后連接到用KpnⅠ"Ⅰ和XhoⅠ"Ⅰ雙酶切線性化的pGreen-0800-luc載體上。同上述將連接產(chǎn)物分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌而后將篩選陽(yáng)性質(zhì)粒送至華大基因進(jìn)行序列測(cè)定。

1.2.3""生物信息學(xué)分析""使用Clustal"X軟件進(jìn)行氨基酸序列的比對(duì)分析。利用PlantCARE（https：//"bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站預(yù)測(cè)啟動(dòng)子上的順式作用元件。

1.2.4""植物表達(dá)載體構(gòu)建及煙草遺傳轉(zhuǎn)化""使用EcoR"Ⅰ和Xho"Ⅰ對(duì)質(zhì)粒pSAK277雙酶切獲得線性化pSAK277載體片段，通過(guò)Gibson組裝的方法將PEG純化后的DlCHS9-SX基因重組到線性化的pSAK277載體上獲得超表達(dá)載體。利用化學(xué)農(nóng)桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞GV3101。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化野生型煙草[10]。

1.2.5""花色素苷含量測(cè)定""利用pH差示法測(cè)定煙草花瓣中花色素苷的含量，參照WeiEI等[11]的方法進(jìn)行測(cè)定，具體步驟為：分別取3個(gè)生物學(xué)重復(fù)花瓣樣品于1"mL浸提液（甲醇∶水∶濃鹽酸="85∶12∶3）中，室溫避光充分浸提。取0.1"mL浸提液分別加入2支試管中，分別加入0.4"mL"Buffer"1[（0.2"mol/L"KCl∶0.2"mol/L"HCl（25∶67），pH"1]）和Buffer"2[（1"mol/L"NaAc∶0.4"mol/L"HCI（100∶150），pH"5]），用酶標(biāo)儀分別測(cè)定其在530"nm處的吸光值（OD）。根據(jù)公式計(jì)算，花色素苷含量（mg/g）=DOD530×5×1×445.2×W/（29"600×W）29600/W/W；式中，5為稀釋倍數(shù)，1為提取液體積（mL），445.2為矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷的相對(duì)分子質(zhì)量，29"600為矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷的摩爾比吸收系數(shù)，W為樣品質(zhì)量（g）。

1.23""數(shù)據(jù)處理

利用Microsoft"Excel"2016軟件計(jì)算W38和DlCHS9-SX轉(zhuǎn)基因植株花瓣花色素苷含量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)誤差。利用Sigmaplot"14.0軟件分別對(duì)W38和DlCHS9-SX轉(zhuǎn)基因植株各株系數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行T測(cè)試，明確是否存在顯著性差異。

2""結(jié)果與分析

2.1""龍眼DlCHS9基因克隆及序列分析

根據(jù)前期通過(guò)全基因組鑒定到的可能參與龍眼花色素苷生物合成的關(guān)鍵DlCHS9的序列設(shè)計(jì)特異引物[9]，分別以石硤和紅皮龍眼葉片的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。測(cè)序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)2個(gè)DlCHS9基因的開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度均為1182"bp，編碼了393個(gè)氨基酸，分別命名為DlCHS9-SX和DlCHS9-HP，兩二者核苷酸序列相似度高達(dá)98.82%，在14個(gè)核苷酸位點(diǎn)存在差異。

使用Clustal"X軟件，將DlCHS9-SX和DlCHS9-HP推測(cè)氨基酸序列與荔枝（Litchi"chinensis）的LcCHS、非洲菊（Gerbera"hybrida）的GhCHS1和、GhCHS3、玉米（Zea"mays）的ZmC2和ZmWhp、擬南蕎（Arabidopsis"ihaliana）的AtTT4的6個(gè)CHS同源基因氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，保守位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析方法參照考蔣雅欣等[9]的方法，發(fā)現(xiàn)8個(gè)CHS均含有4個(gè)保守的活性位點(diǎn)氨基酸殘基（紅色方框）、典型的13個(gè)惰性活性位點(diǎn)（藍(lán)色方框）、CHS的特征序列（WGVLFGFGPGLT）（黃色方框）。而DlCHS9-SX和DlCHS9-HP氨基酸序列僅在328位點(diǎn)上存在差異，DlCHS9-SX的氨基酸為谷氨酸（glutamic"acid，"E），DlCHS9-HP的328位氨基酸為天冬氨酸（aspartic"acid，"D）（綠色方框），而該位點(diǎn)不是關(guān)鍵活性位點(diǎn)（圖1），因此，初步推測(cè)DlCHS9-SX在該位點(diǎn)氨基酸的差異可能對(duì)其基因功能沒(méi)有無(wú)影響（圖1）。

2.2""DlCHS9-SX超表達(dá)載體的構(gòu)建及煙草遺傳轉(zhuǎn)化

將利用特異引物擴(kuò)增得到的DlCHS9-SX基因片段通過(guò)Gibson組裝的方法重組到超表達(dá)載體pSAK277上，陽(yáng)性克隆質(zhì)粒測(cè)序分析結(jié)果正確，表明超表達(dá)載體已成功構(gòu)建，同時(shí)利用SnapGene軟件繪制pSAK277-DlCHS9-SX重組質(zhì)粒圖譜（圖2）。

紅色框內(nèi)為聚酮合成酶的4個(gè)保守的活性位點(diǎn)；黃色框內(nèi)為CHS的模式序列（WGVLFGPGLT）；藍(lán)色框內(nèi)為13個(gè)塑造活性位點(diǎn)幾何結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基；綠色框內(nèi)為DlCHS9-SX和DlCHS9-HP的氨基酸的差異位點(diǎn)?；虻卿浱?hào)：荔枝（AtTT4：GU288820.1）、非洲菊（GhCHS1：Z38096.1；GhCHS3：Z38098.1）、擬南芥（AtTT4：，AT5G13930）、玉米（ZmC2：X60205.1；ZmWhp：X60204.1）。

The"four"conserved"active"sites"of"the"polyketide"synthase"are"marked"in"the"red"box;"The"pattern"sequence"（WGVLFGPGLT）"of"CHS"is"highlighted"in"the"yellow"box;"the"amino"acid"residues"that"shape"the"geometry"of"13"the"active"sites"are"highlighted"in"the"blue"box;"The"differences"in"amino"acid"residues"between"DlCHS9-SX"and"DlCHS9-HP"are"highlighted"in"the"green"box."GenBank"register"number："Litchi"chinensis"（AtTT4："GU288820.1），"Gerbera"hybrida"（GhCHS1："Z38096.1;"GhCHS3："Z38098.1），"Arabidopsis"ihaliana"（AtTT4："AT5G13930），"Zea"mays"（ZmC2："X60205.1;"ZmWhp："X60204.1）.

為進(jìn)一步驗(yàn)證DlCHS9-SX是否參與龍眼花色素苷生物合成，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞GV3101中，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化野生型煙草共獲得29株抗性植株，提取轉(zhuǎn)基因煙草植株葉片DNA并進(jìn)行目的基因PCR檢測(cè)，有陽(yáng)性植株23株，陽(yáng)性率為79%。選取3株陽(yáng)性植株進(jìn)一步分析。以轉(zhuǎn)基因煙草花瓣cDNA為模板（重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照，野生型煙草為陰性對(duì)照，無(wú)菌水為空白對(duì)照）檢測(cè)煙草內(nèi)參基因（圖3A）和DlCHS9-SX（圖3B）是否表達(dá)。結(jié)果表明3株轉(zhuǎn)化植株中的DlCHS9-SX基因在花瓣中成功表達(dá)。

2.3""轉(zhuǎn)基因煙草花瓣表型分析

從圖4A可以看出，轉(zhuǎn)基因的3個(gè)株系煙草花瓣明顯比對(duì)照更紅。進(jìn)一步利用pH差示法測(cè)定了野生型W38和轉(zhuǎn)基因煙草花瓣中花色素苷的含量。結(jié)果分析顯示，3個(gè)轉(zhuǎn)基因株系花瓣花色素苷含量均顯著高于野生型。其中10號(hào)株系花瓣的花色素苷含量最高（0.074"mg/g），為野生型的4.37倍；3號(hào)株系花瓣花色素苷含量為野生型的3.17倍；2237號(hào)株系花瓣花色素苷含量為野生型的3.08倍（圖4B）。表明DlCHS9-SX基因在煙草中異源表達(dá)促進(jìn)了花瓣花色素苷的積累。2.4""紅皮龍眼和石硤龍眼DlCHS9基因啟動(dòng)子分析

進(jìn)一步分別克隆了石硤DlCHS9-SX的啟動(dòng)子序列與紅皮龍眼DlCHS9-HP的啟動(dòng)子序列，比對(duì)發(fā)現(xiàn)它們的相似度高達(dá)96.2%，與DlCHS9-HP的啟動(dòng)子序列相比，DlCHS9-SX的啟動(dòng)子有32個(gè)SNP、14個(gè)堿基插入和12個(gè)堿基刪除（圖5）。利用PlantCARE植物啟動(dòng)子在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站對(duì)DlCHS9-SX的啟動(dòng)子和DlCHS9-HP的啟動(dòng)子進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2條啟動(dòng)子序列除含有核心啟動(dòng)子元件（TATA-Box、CAAT-Box）之外，還存在一些其他重要順式作用元件。這些元件的功能包括參與脫落酸響應(yīng)（ABRE）、光反應(yīng)（G-box、ACE、GA-motif、Box"4）、脫氧誘導(dǎo)（ARE）、茉莉酸甲酯（MeJA）響應(yīng)（CGTCA-motif、TGACG-motif）和種子特異性調(diào)控（RY-element）等。與DlCHS9-HP的啟動(dòng)子相比，DlCHS9-SX的啟動(dòng)子多1個(gè)脫落酸響應(yīng)的順式作用元件（ABRE）（紫色底紋），缺少1個(gè)光照響應(yīng)（Box"4）（淺綠色底紋）、1個(gè)低溫響應(yīng)（LTR）（綠色底紋）和1個(gè)MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)（藍(lán)色底紋）順式元件，但均含有與查爾酮合成酶調(diào)控功能相關(guān)的順式作用元件，包括MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)順式元件，MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)順式元件等（圖5）。推測(cè)DlCHS9基因的啟動(dòng)子序列差異可能是引起石硤DlCHS9表達(dá)水平低的原因之一。

3""討論

CHS負(fù)責(zé)催化3分子的丙二酰-CoA和1分子的對(duì)香豆酰-CoA結(jié)合形成查爾酮，這該反應(yīng)是類(lèi)黃酮合成途徑的關(guān)鍵限速步驟[12]。CHS基因在植物中通常以多基因家族的形式存在，但其中只有少數(shù)成員與植物花色素苷合成密切相關(guān)。非洲菊（Gerbera"hybrida）中GCHS1和GCHS4與花色素苷合成有關(guān)，當(dāng)沉默GCHS1時(shí)花瓣變?yōu)榘咨玔13]。李文飛等[14]從紅皮香蕉和天寶香蕉中發(fā)現(xiàn)了4個(gè)差異表達(dá)的MaCHS可能是紅皮香蕉花色素苷積累的重要原因。本研究前期從龍眼中鑒定到8個(gè)DlCHS家族成員，通過(guò)基因表達(dá)分析篩選出了與花色素苷合成緊密相關(guān)的DlCHS9[9]。本研究發(fā)現(xiàn)石硤龍眼DlCHS9-SX和紅皮龍眼DlCHS9-HP的核苷酸相似度達(dá)98.82%，僅有14個(gè)位點(diǎn)存在差異。王志彬等[15]的研究中也發(fā)現(xiàn)CHS在不同種質(zhì)的柑橘中的核苷酸序列高度保守，相似性達(dá)98%以上。而氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)兩二者均僅在328位氨基酸位點(diǎn)有差異，且該位點(diǎn)不在關(guān)鍵活性位點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)CHS關(guān)鍵位點(diǎn)的差異會(huì)導(dǎo)致其功能差異，例如，紫羅蘭（Matthiola"incana）白花突變體是由于CHS其中一個(gè)編碼精氨酸的AGG變成了編碼絲氨酸的AGT，從而導(dǎo)致CHS失去生理活性而影響花色素的形成[16]。本研究轉(zhuǎn)DlCHS9-SX基因煙草的花冠花色素苷含量明顯更高，顏色更紅?？梢?jiàn)，石硤和紅皮龍眼中CHS單個(gè)氨基酸的差異并沒(méi)有未影響其誘導(dǎo)花色素苷的積累的功能。

花色素苷生物合成受到轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控、激素信號(hào)（乙烯、赤霉素和脫落酸等）和環(huán)境脅迫（光照、溫度、水分及機(jī)械損傷等）的影響[17]。作為包含花色素苷在內(nèi)的類(lèi)黃酮物質(zhì)合成的第一個(gè)關(guān)鍵酶基因，CHS屬于誘導(dǎo)表達(dá)型，其在轉(zhuǎn)錄水平也受到轉(zhuǎn)錄因子、激素、光等因素的影響[18]。

方框內(nèi)為DlCHS9啟動(dòng)子相同順式作用元件；有顏色底紋部分為石峽或紅皮龍眼DlCHS9啟動(dòng)子單獨(dú)含有順式作用元件。

在多種植物的CHS啟動(dòng)子的研究中發(fā)現(xiàn)MYB和MYC（bHLH）轉(zhuǎn)錄因子可以與CHS啟動(dòng)子直接結(jié)合從而調(diào)控其表達(dá)[19-21]。本研究DlCHS9-SX和DlCHS9-HP的啟動(dòng)子順式作用元件均含有MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)順式元件，MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)等順式元件，但也存在多個(gè)差異的與激素、光、溫度等響應(yīng)的順式作用元件及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)元件，而這些差異可能會(huì)引起DlCHS9-SX的表達(dá)差異。因此，DlCHS9基因的啟動(dòng)子序列差異可能是引起石硤和紅皮龍眼果實(shí)顏色差異的重要原因之一。

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