摘" " 要：【目的】分析梨園中存在感染Alternaria alternata顯癥的寄主植物種類，驗證顯癥寄主植物中的A. alternata是梨黑斑病發(fā)生的一個潛在侵染源頭。【方法】選取梨園中常見的25種植物為試驗對象，室內(nèi)接種A. alternata孢懸液，篩選和驗證顯癥的植物為A. alternata的寄主植物；分離顯癥寄主植物中A. alternata，并將分離自不同顯癥寄主植物的A. alternata回接至健康的梨葉片上進行致病性驗證。【結(jié)果】蘋果、海棠、櫻桃、月季、花生、棗6種植物葉片分別接種A. alternata孢懸液后出現(xiàn)明顯的癥狀，而顯癥植物中分離的A. alternata回接至健康梨葉片可引起健康梨葉片顯癥?！窘Y(jié)論】梨園中存在可接種侵染并顯癥A. alternata寄主植物，感染A. alternata的寄主植物是梨黑斑病發(fā)生的一個潛在侵染源頭。

關(guān)鍵詞：梨黑斑??；A. alternata；寄主植物；侵染源

中圖分類號：S661.2 文獻標識碼：A 文章編號：1009-9980（2025）02-0391-10

Analysis of plant species enabling to infect with Alternaria alternata in pear orchards

ZHANG Shengping1， CHENG Ying2， ZHAO Shihang1， ZHAO Jiaqiang1， GAO Qi1， WANG Jin1， XU Guoliang1*

（1Shijiazhuang Institute of Fruit Trees， Hebei Academy of Agriculture and Forestry， Shijiazhuang 050061， Hebei， China; 2Modern Agricultural Extension Center， Handan Agricultural and Rural Bureau， Handan 056001， Hebei， China）

Abstract： 【Objective】 The study aimed to determine some plant hosts by Alternaria alternata in pear orchards and these plant hosts could show typical black spot disease. Simultaniously， A. alternata from these diseased plant hosts has the pathogenicity on pear leaves. 【Methods】 The pathogen A. alternata stored at -4 ℃， was activated and cultivated using PDA agar medium at （26±1） ℃ for 4 days. The activation of A. alternata was identified by nested PCR for containing ITS gene of A. alternata. The nested PCR results on ITS gene of A. alternata were used for comparison in follow-up experiment. Healthy pear leaves were inoculated with activated A. alternata suspension to demonstrate its pathogenicity on pear leaves. For 8 days later， we observed symptoms on pear leaves. Nest PCR reaction on the ITS gene of A. alternata was used to detect the diseased pear leaves. The diseased pear leaf tissue of 1 cm2 was inoculated on the PDA agar medium at 26± 1 ℃ in the dark for 72 h. This step was carried out for A. alternata isolation. A microbe was isolated from the diseased pear leaf. The white mycelium of the microbe was gotten from PDA agar medium with a pair of sterilized scissors， and then were inoculated on a new PDA agar medium 96 h for purification. The appearances of colonies were observed. The colonies were identified by nest PCR reaction on the ITS gene of A. alternata. In order to determine plant hosts of A. alternata existing in pear orchards， twenty-five different kinds of plant species were provided to inoculate the same volume of A. alternata isolation suspension respectively. All plant species were transplanted into a incubator for 16 h at 28 ℃ （day） and 8 h at 25 ℃ （night）. Relative humidity in the incubator was controlled to 80% ± 5%. All treated samples were incubated in the incubator for 14 days. According to leaf symptoms and lesion areas， leaves with obvious symptoms were used for pathogen isolation again. The second generation purification of pathogen from diseased leaves infected with A. alternata were observed. In order to identify the second generation of pathogen， the A. alternata was proved to have the ability of pathogenicity on pear leaves. These second generation of pathogen suspensions were separately inoculated on healthy pear leaves. These pear leaves were placed in another incubator with the same environmental conditions as above. For 10 days later， we observed the symptoms on the inoculated pear leaves. The lesion areas on pear leaves with A. alternata treatment were respectively used for statistic analysis. 【Results】 The stored A. alternata could be cultured on the PDA agar medium. By nested PCR on ITS gene of A. alternata， we could observe positive bands （570 bp and 398 bp） as prediction. Healthy pear leaves inoculated with A. alternata suspension showed obvious symptoms as to black spot disease for 8 days later. And also， bands as to ITS genes could be detected in the diseased pear leaves by nest PCR. As predicted， the pathogen isolated from pear leaves had the same phenotype as to A. alternata. A. alternata isolation was identified by method of nested PCR， and the same bands as prediction appeared. The results indicated that A. alternata， stored in the laboratory， could also cause pear black spot. According to symptoms on twenty-five different kinds of plant leaves， we discovered the obvious symptoms appeared on some plant leaves， such as apple， Malus spectabilis， cherry， Chinese rose， peanut and jujube. Through statistical analysis of the lesion areas on these six kinds of diseased plant leaves， the significant difference was discovered. We deduced the six kinds of plant species such as apple， Malus spectabilis， cherry， Chinese rose， peanut and jujube were the appropriate hosts of A. alternata. We could isolate six microbes from these six different kinds of diseased plant leaves respectively. All of the six colonies had the same performance as to A. alternata from pear leaves. The healthy pear leaves were inoculated with pathogen suspension from six different kinds plant host leaves respectively. After 10 days， all healthy pear leaves with pathogen suspension treatment showed typical symptoms as to pear black spot. These pear leaves were collected for molecular detection by method of nest PCR on ITS gene of A. alternata. By agarose gel electrophoresis， it showed that same bands as prediction appeared. Results indicated A. alternata from hosts with A. alternata infection could cause diseases on pear leaves. 【Conclusion】 We discovered some plant hosts of A. alternata widely existed in pear orchards. A. alternata from these plant hosts had the pathogenicity on pear leaves. It indicated that plant hosts containing A. alternata may be one of the potential infective sources for pear black spot disease epidemic.

Key words： Pear black spot; A. alternata; Host plant; Sources of infection

梨黑斑?。≒ear black spot）是由鏈格孢（Alternaria spp.）侵染梨葉片、果實和新梢等組織引起的重要病害之一[1]，該病害在東南亞地區(qū)均有發(fā)生，嚴重影響梨的產(chǎn)量和品質(zhì)，給梨產(chǎn)業(yè)造成了極大的經(jīng)濟損失[2-4]。研究報道，梨黑斑病組織中可分離出9種Alternaria spp.[5-6]，Alternaria gaisen和Alternaria alternata （Fr.） Keissler（簡稱A. alternata）被認為是梨黑斑病的主要病原菌，而引起河北省鴨梨黑斑病的主要病原菌為A. alternata[2]。

通常A. alternata以分生孢子和菌絲體在寄主病殘體上越冬，翌年春季產(chǎn)生的分生孢子借風雨傳播至梨的不同組織上，遇合適的溫、濕度萌發(fā)芽管，芽管頂端膨大形成附著胞，下方生長侵入絲，侵入氣孔、皮孔或傷口，吸取梨組織中的養(yǎng)料和水分，完成初侵染，然后以發(fā)病植株為中心引起再侵染。樹體密閉、樹勢衰弱、地勢低洼、偏施氮肥、土壤貧瘠、害蟲猖獗等不利因素均可加重梨黑斑病的發(fā)生和流行[4]。

當前，針對梨黑斑病的防治仍以化學藥劑為主，但化學藥劑種類的盲目選擇和過量使用加速了A. alternata抗性的產(chǎn)生[7]，造成了環(huán)境污染，影響了人體健康[8-9]。果園生草技術(shù)可改善果園小氣候，改良果園土壤，增強樹勢，惡化病原菌的生長環(huán)境，降低病蟲害的發(fā)生，目前已廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)中。梨園生草技術(shù)應(yīng)用中，園內(nèi)留存的植物種類繁雜多樣，而A. alternata具有廣泛的寄主植物[10]，留存于梨園中的植物種類中或存在A. alternata的良好寄主。理論上，寄主植物可助力A. alternata的增殖，而來自寄主植物的A. alternata亦將成為梨黑斑病傳播和流行的一個潛在侵染源頭。目前，關(guān)于梨園中存在的A. alternata寄主植物種類的研究尚無報道，而顯癥寄主植物中的A. alternata感染梨葉片顯癥的研究亦罕見報道。

筆者擬利用保存的A. alternata室內(nèi)接種健康的梨葉片以活化A. alternata，對分離自顯癥梨葉片中的A. alternata進行鑒定和檢測，選擇梨園中常見的植物種類為接種對象進行A. alternata的室內(nèi)接種試驗，分析和篩選A. alternata的寄主植物種類，然后將分離自顯癥寄主植物中的A. alternata再接種健康的梨葉片進行致病性驗證，研究結(jié)果為后期深入了解梨園中黑斑病的發(fā)生、傳播和流行提供理論支撐。

1 材料和方法

1.1 材料

供試梨品種為鴨梨（Pyrus bretschneideri）。

供試篩選的寄主植物種類：河北省梨園中常見的25種植物（白蘿卜、打碗花、海棠、紅莧菜、狗尾草、白茅草、龍葵、葎草、花生、馬唐草、蘋果、牛筋草、鐵筧菜、櫻桃、小飛蓬、圓葉牽牛、月季、棗、裂葉牽牛、葡萄、苘麻、苦荬菜、甜椒、豬秧秧、蘿藦），詳見表1。

供試A. alternata菌株：Alternaria alternata （Fr.） Keissler-SGS，保存于河北省農(nóng)林科學院石家莊果樹研究所。A. alternata菌株鑒定與檢測的引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，序列見表2。PDA瓊脂培養(yǎng)基制備方法：去皮馬鈴薯200 g切成小塊，加水煮爛（煮沸20～30 min），八層紗布過濾，收集濾液并加入15～20 g瓊脂粉，繼續(xù)加熱攪拌至瓊脂粉完全溶解，加入葡萄糖20 g攪拌均勻至溶解，稍冷卻后補足水（40 ℃）至1000 mL，121 ℃，20 min滅菌。

1.2 方法

1.2.1" " A. alternata孢懸液的制備nbsp; " 使用無菌解剖刀從保存于4 ℃的PDA瓊脂培養(yǎng)基邊緣切取長有A. alternata白色菌絲的瓊脂塊（5 mm×5 mm），接種于新的PDA瓊脂培養(yǎng)基上，在（26 ±1）℃下孵育4 d，活化A.alternata。吸取2 mL無菌水沖洗PDA瓊脂培養(yǎng)基表面的A. alternata，用無菌涂布器刮取生長于PDA瓊脂培養(yǎng)基上的A. alternata，用八層紗布（滅菌烘干）過濾去除菌絲，制備用于接種的A. alternata孢子粗懸液。

1.2.2" " A. alternata的巢氏PCR鑒定" " 吸取1.2.1制備的A. alternata孢懸液800 μL，12 000 r·min-1離心5 min，選用真菌基因組DNA提取試劑盒D2300（北京索萊寶科技有限公司）提取A. alternata的總DNA，使用巢式PCR鑒定A. alternata[11]。

ITS序列PCR擴增體系（25 μL）：10 μL PCR mix，上下游引物（100 nmol·μL-1）各1 μL，2 μL 模板（上述A. alternata孢懸液的總DNA），補足dd H2O（11 μL）至25 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預變性4 min；95 ℃ 變性 30 s，58 ℃ 退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃終延伸 10 min；4 ℃保存，獲得ITS序列的PCR產(chǎn)物。

HB序列（巢氏基因序列）PCR擴增體系（25 μL）：11 μL PCR mix，上下游引物（100 nmol·μL-1）各1 μL，0.05 μL 模板（上述ITS基因序列的PCR產(chǎn)物），補足dd H2O（12.5 μL）至25 μL。反應(yīng)程序：94 ℃預變性4 min；95 ℃變性 30 s，55.8 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)；72 ℃ 終延伸 10 min；4 ℃保存，獲得HB序列的PCR產(chǎn)物。

1.2.3 A. alternata接種梨葉片和分離 用血球計數(shù)板記錄A. alternata孢懸液中的孢子數(shù)量，無菌水稀釋孢懸液至106 cfu·L-1。吸取10 μL稀釋的孢懸液接種于健康梨葉片表面，用滅菌的棉花包裹葉柄，平鋪于無菌的培養(yǎng)皿中，用10 μL無菌水處理的健康梨葉片為對照，選取3個梨葉片為3次生物學重復，所有葉片均置于光照培養(yǎng)箱，設(shè)置光照∶黑暗=16 h （28 ℃）∶8 h（25 ℃），相對濕度（80±5）%，8 d后觀察梨葉片癥狀，驗證活化的A. alternata對梨葉片是否具有致病力。

用無菌水沖洗接種A. alternata孢懸液的梨葉片和無菌水處理的對照組梨葉片，用滅菌的剪刀分別剪取接種顯癥梨葉片和對照梨葉片各10 mg，用植物基因組提取試劑盒DP360[天根生化科技（北京）有限公司]提取葉片中的總DNA，以A. alternata的ITS序列為目標基因進行巢氏PCR反應(yīng)（參照1.2.2），檢測梨葉片中的A. alternata。

用無菌水沖洗接種A. alternata顯癥的梨葉片的正反面，再用95%的酒精沖洗無菌水沖洗過的顯癥梨葉片的正反面；將酒精沖洗消毒的顯癥梨葉片繼續(xù)浸泡于0.3%的NaClO溶液中2 min；用無菌水再次沖洗浸泡NaClO溶液的顯癥梨葉片的正反面，去除梨葉片表面殘留的次氯酸鈉溶液。在超凈臺上，用滅菌的剪刀剪取顯癥梨葉片病健交界處1 cm2的葉組織接種于PDA瓊脂培養(yǎng)基表面，置于（26±1 ）℃下黑暗培養(yǎng)72 h，切取PDA瓊脂培養(yǎng)基邊緣的分離的白色菌絲塊（5 mm×5 mm）接種于新的PDA瓊脂培養(yǎng)基4 d，制備孢懸液（參照1.2.1），以A. alternata的ITS序列為目標基因進行巢氏PCR反應(yīng)，鑒定分離的微生物（參照1.2.2）。

1.2.4" " A. alternata寄主植物的篩選" " 選擇梨園中常見的25種植物（采集的植物需遠離梨園10 km以上）葉片為A. alternata接種對象，室內(nèi)難以栽培的試驗植物種類采用葉片離體接種，其他植物種類（室內(nèi)便于種植的試驗植物種類）進行活體接種（表1）。每種植物選取3片健康完整的葉片作為3次生物學重復，吸取上述1.2.3制備的A. alternata孢懸液10 μL接種于待測植物的葉片表面，10 μL無菌水處理的植物葉片為對照組，所有試驗的葉片均置于光照培養(yǎng)箱中，設(shè)置光照∶黑暗=16 h（28 ℃）∶8 h（25 ℃），相對濕度（80±5）%，14 d后觀察顯癥情況，采用方格紙法測定葉片病斑面積并進行顯著性分析。顯癥的植物葉片用于微生物的分離（參照1.2.3），以A. alternata的ITS序列進行巢氏PCR反應(yīng)，鑒定分離的微生物（參照1.2.2）。

1.2.5 分離自顯癥寄主植物的A. alternata再接種梨葉片 將1.2.4中顯癥植物中分離并驗證的A. alternata制備孢懸液，用無菌水稀釋至106 cfu·L-1，10 μL接種于健康梨葉片表面的一個部位，10 μL無菌水處理的健康梨葉片為對照，每個葉片接種3個部位，置于光照培養(yǎng)箱中，設(shè)置光照∶黑暗=16 h（28 ℃）∶8 h（25 ℃），相對濕度（80± 5）%，10 d觀察顯癥，設(shè)置3次試驗重復。A. alternata的ITS序列為目標基因進行巢氏PCR檢測梨葉片中的A. alternata（參照1.2.2）。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

利用Microsoft Excel進行數(shù)據(jù)匯總和處理，采用SPSS軟件（IBM，Armonk，New York，USA）進行Student t檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 A. alternata的活化

PDA瓊脂培養(yǎng)基活化4 d的A. alternata中部呈棕色，邊緣有白色的菌絲（圖1-A）。選用A. alternata的ITS為目標基因進行巢氏PCR反應(yīng)，瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)與預期大小一致的陽性亮帶（570 bp和398 bp）（圖1-B）。健康梨葉片接種活化的A. alternata孢懸液后8 d，3個接種的健康梨葉片均能出現(xiàn)明顯的黑色病斑，而無菌水處理的3個健康梨葉片無明顯癥狀（圖1-C）。將分離自顯癥梨葉片中的微生物接種于PDA瓊脂培養(yǎng)基上4 d，生長的微生物菌落表型與A. alternata相似，表現(xiàn)為中部呈棕色、邊緣為白色的菌絲（圖1-D）。利用A. alternata的ITS序列進行巢氏PCR反應(yīng)，瓊脂糖凝膠電泳仍出現(xiàn)與預期大小一致的陽性亮帶（570 bp和398 bp）（圖1-E）。利用A. alternata的ITS序列進行巢氏PCR反應(yīng)檢測3個顯癥的梨葉片，瓊脂糖凝膠電泳再次出現(xiàn)與預期大小一致的陽性亮帶（570 bp和398 bp）（圖1-F）。表明儲存于4 ℃的A. alternata活化后接種于健康的梨葉片仍具有致病力，從顯癥的梨葉片中可再分離獲得A. alternata。

2.2 A. alternata寄主植物的分析與篩選

將上述分離自顯癥梨葉片中的A. alternata制備孢懸液，分別接種于25種植物葉片14 d，測定25種不同植物葉片的病斑面積，并進行顯著性分析，結(jié)果表明，6種植物（蘋果、海棠、櫻桃、月季、花生、棗）葉片上的病斑面積顯著大于其無菌水處理的對照葉片（p＜0.01），而接種A. alternata的其他19種植物（白蘿卜、打碗花、紅莧菜、狗尾草、白茅草、龍葵、葎草、馬唐草、牛筋草、鐵莧菜、小飛蓬、圓葉牽牛、裂葉牽牛、葡萄、苘麻、苦荬菜、甜椒、豬秧秧、蘿藦）和其無菌水處理的葉片病斑面積差異不顯著（圖2-A），與觀察到的癥狀相同（圖2-B）。表明蘋果、海棠、櫻桃、月季、花生、棗是A. alternata的寄主植物。

2.3 顯癥寄主植物中A. alternata的再分離

將顯癥的6種寄主植物（蘋果、海棠、櫻桃、月季、花生、棗）葉片中分離的6個微生物在PDA瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d，結(jié)果顯示，6個微生物菌落的表型與A. alternata相同，表現(xiàn)為中部呈棕色、邊緣為白色的菌絲（圖3），表明在感染A. alternata顯癥的寄主植物葉片中，再分離獲得的微生物或為A. alternata。

2.4 自寄主植物分離的A. alternata對梨葉片的致病性

分離自上述6種顯癥寄主植物葉片中的6個微生物菌株按A. alternata孢懸液制備方法制備孢子懸浮液，分別接種于健康的梨葉片10 d，結(jié)果顯示，自顯癥寄主植物中分離獲得的微生物菌株可再感染梨葉片，而無菌水處理的健康梨葉片癥狀不明顯（圖4-A）。以A. alternata的ITS基因序列進行巢氏PCR檢測顯癥的梨葉片，瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)與預期大小一致的陽性亮帶（570 bp和398 bp），而無菌水處理的梨葉片無陽性條帶（圖4-B和圖4-C），表明分離自6種寄主植物中的6株微生物均為A. alternata，這些A. alternata均可感染梨葉片引發(fā)癥狀。

3 討 論

A. alternate以分生孢子和菌絲體在梨病葉、病果、病殘枝中越冬，翌年春季產(chǎn)生的分生孢子借風雨傳播至梨的不同組織中完成初侵染，然后以發(fā)病植株為中心引起再侵染。目前，梨黑斑病以化學防治為主，而化學藥劑長期和廣泛使用加速了病原菌的抗藥性。梨黑斑病防控常用的化學藥劑為14α-脫甲基反應(yīng)抑制劑（14α-demethylation inhibitors，DMIs），如苯醚甲環(huán)唑、烯唑醇等羊毛甾醇，但DMIs殺菌劑作用位點具有專一性，多種植物病原菌均有對DMIs殺菌劑產(chǎn)生田間抗藥性的報道[7]。此外，化學藥劑使用不當會造成環(huán)境污染并危害人體健康[8-9]。為減輕梨園病蟲害發(fā)生，以生態(tài)調(diào)控為目標的果園種草技術(shù)廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)中。在果園種草技術(shù)應(yīng)用中植物種類的留存較為盲目，但A. alternate寄主廣泛[10]，可侵染海南番木瓜[12]、杧果[13]、深州蜜桃[14]、哈密瓜[15]等植物，而關(guān)于梨園中存在A. alternate寄主植物的研究罕有報道。

在實際梨園環(huán)境中，驗證感染A. alternate顯癥的寄主植物是梨黑斑病發(fā)生潛在侵染源頭的田間試驗較難開展。筆者忽略了風雨傳播A. alternate的因素，選用梨園中常見的植物為接種對象，利用室內(nèi)接種的方法分析接種A. alternate顯癥的植物種類，驗證了顯癥寄主植物中的A. alternate對梨葉片的致病能力。通常室內(nèi)接種A. alternate的方法有菌絲塊接貼法[16]和孢子懸浮液噴霧接種法[9]。菌絲塊貼接法需固定菌絲塊的位置，而孢子懸浮液噴霧接種法對噴霧機要求較高，需保證液滴在接種部位均勻展布。為便于定點觀察顯癥，筆者采用制備的A. alternate孢懸液定點接種植物。試驗在分離自顯癥寄主中的A. alternate再接種梨葉片驗證致病性的過程中，若選用的接種對象為梨老葉片，接種后孵育時間較長（如23 d），且會出現(xiàn)黃化及干枯，影響后期癥狀的觀察，故而宜選用幼嫩的梨葉為接種對象以優(yōu)化實驗方案。

關(guān)于A. alternata的鑒定，分子生物學方法（RAPD[17]、AFLP[18]、SSH[19]、SCAR[20]）具有快速、便捷的優(yōu)勢，已廣泛應(yīng)用于試驗中，但這些鑒定方法均不能準確區(qū)分A. alternata至“種”的水平，因此傳統(tǒng)的柯赫氏法則仍是植物病原菌鑒定的常用方法。此外，李云飛等[11]以梨黑斑病菌的ITS序列為目標基因，設(shè)計巢氏PCR引物，在梨組織中成功檢測并鑒定出A. alternate，并把檢測精準度提高到pg水平[11]。盡管ITS基因不是鑒別A. alternata的最優(yōu)基因，筆者在本研究中為避免干擾均采用無菌操作，且所用的A. alternate菌株經(jīng)分離和純化后再進行ITS基因的巢氏PCR鑒定，以確保試驗結(jié)果的科學性和客觀性。

梨園中生態(tài)環(huán)境極其復雜，農(nóng)事操作、昆蟲啃食、風雨冰雹等極易造成留存的植物葉片上產(chǎn)生機械傷口，而機械傷口可助力病原菌侵入寄主[21-22]，增加園內(nèi)菌原基數(shù)，為梨黑斑病的發(fā)生、傳播和流行提供了大量的侵染源頭。因此，實際生產(chǎn)中應(yīng)鏟除梨園內(nèi)部和周圍的A. alternate寄主植物，利用減少A. alternate 潛在侵染源頭的方式降低梨黑斑病的發(fā)生概率。

4 結(jié) 論

梨園中存在黑斑病菌的寄主植物，顯癥寄主植物中的A. alternate具有感染梨葉片致病的能力，A. alternate寄主植物或為梨黑斑病發(fā)生的一個侵染源頭。

參考文獻References：

[1] 楊曉平，胡紅菊，王友平，田瑞，陳啟亮，張靖國. 梨黑斑病病原菌的生物學特性及其致病性觀察[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學學報，2009，28（6）：680-684.

YANG Xiaoping，HU Hongju，WANG Youping，TIAN Rui，CHEN Qiliang，ZHANG Jingguo. Biological characteristics and pathogenicity of pear black spot by Alternaria alternata （Fr.） Keissl[J]. Journal of Huazhong Agricultural University，2009，28（6）：680-684.

[2] 張志銘，宋福，孫淑貞，趙文勝. 河北鴨梨黑斑病病原菌的鑒定[J]. 植物檢疫，2003，17（4）：212-214.

ZHANG Zhiming，SONG Fu，SUN Shuzhen，ZHAO Wensheng. The identification of pathogen causing Ya pears black spot[J]. Plant Quarantine，2003，17（4）：212-214.

[3] TERAKAMI S，ADACHI Y，IKETANI H，SATO Y，SAWAMURA Y，TAKADA N，NISHITANI C，YAMAMOTO T. Genetic mapping of genes for susceptibility to black spot disease in Japanese pears[J]. Genome，2007，50（8）：735-741.

[4] 楊曉平，陳啟亮，張靖國，范凈，何秀娟，胡紅菊. 梨黑斑病及抗病育種研究進展[J]. 果樹學報，2017，34（10）：1340-1348.

YANG Xiaoping，CHEN Qiliang，ZHANG Jingguo，F(xiàn)AN Jing，HE Xiujuan，HU Hongju. Research progress of pear black spot and breeding for disease resistance[J]. Journal of Fruit Science，2017，34（10）：1340-1348.

[5] ROBERTS R G. Alternaria yaliinficiens sp. nov. on Ya Li pear fruit：From interception to identification[J]. Plant Disease，2005，89（2）：134-145.

[6] ROBERTS R G. Two new species of Alternaria from pear fruit[J]. Mycotaxon，2007，100：159-167.

[7] 楊曉平. 梨黑斑病菌Alternaria sp.鑒定及砂梨抗黑斑病分子機制初探[D]. 武漢：武漢大學，2015.

YANG Xiaoping. Identification of pear black spot Alternaria sp. and study on molecular mechanism of sand pear disease resistance to pear black spot[D]. Wuhan：Wuhan University，2015.

[8] KNIGHT S C，ANTHONY V M，BRADY A M，GREENLAND A J，HEANEY S P，MURRAY D C，POWELL K A，SCHULZ M A，SPINKS C A，WORTHINGTON P A，YOULE D. Rationale and perspectives on the development of fungicides[J]. Annual Review of Phytopathology，1997，35：349-372.

[9] NGUYEN V N，NGUYEN D M C，SEO D J，PARK R D，JUNG W J. Antimycotic activities of Cinnamon-derived compounds against Rhizoctonia solani in vitro[J]. BioControl，2009，54（5）：697-707.

[10] ROTEM J. The genus Alternaria：Biology，epidemiology and pathogenicity[M]. Minnesota，USA：Amer Phytopathological Society，1994.

[11] 李云飛，陳雪嬌，張愛芳，楊雪，陳雨，姚劍. 碭山梨黑斑病分子檢測技術(shù)研究[J]. 中國農(nóng)學通報，2016，32（4）：150-154.

LI Yunfei，CHEN Xuejiao，ZHANG Aifang，YANG Xue，CHEN Yu，YAO Jian. Molecular detection of Alternaria alternata causing black spot of Dangshan pear[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，2016，32（4）：150-154.

[12] 劉秀娟，楊業(yè)銅，黃圣明. 海南省番木瓜果實潛伏侵染真菌種類及其分布狀況的研究[J]. 植物病理學報，1994，24（4）：313-317.

LIU Xiujuan，YANG Yetong，HUANG Shengming. The species and distribution of latent fungi of papaya fruit in Hainan province[J]. Acta Phytopathologica Sinica，1994，24（4）：313-317.

[13] PRUSKY D. Assessment of latent infections as a basis for control of postharvest disease of mango[J]. Plant Disease，1983，67（7）：816.

[14] 張志銘，王江柱，李玉琴，趙志芬，曹健美. 深州蜜桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究Ⅰ. 發(fā)生情況、癥狀和病原鑒定[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學學報，1995，18（4）：49-52.

ZHANG Zhiming，WANG Jiangzhu，LI Yuqin，ZHAO Zhifen，CAO Jianmei. The study on occurrence，symptoms and identification on pathogen of Shenzhou peach black spot （Alternaria alternata） Ⅰ[J]. Journal of Hebei Agricultural University，1995，18（4）：49-52.

[15] 張輝，李學文，張唯一，馮宏鷹. 新疆哈密瓜果實潛伏侵染真菌種類研究[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學，2000，37（3）：127-130.

ZHANG Hui，LI Xuewen，ZHANG Weiyi，F(xiàn)ENG Hongying. Studes on the species of latent fungi of Xingjiang Hami melon fruit[J]. Xinjiang Agricultural Sciences，2000，37（3）：127-130.

[16] 王文青，李揚，向均，洪霓，王國平. 我國梨產(chǎn)區(qū)引起黑斑病的鏈格孢種類鑒定與致病性研究[J]. 果樹學報，2020，37（12）：1922-1933.

WANG Wenqing，LI Yang，XIANG Jun，HONG Ni，WANG Guoping. Identification and pathogenicity of Alternaria species causing black spot in pear producing regions in China[J]. Journal of Fruit Science，2020，37（12）：1922-1933.

[17] ROBERTS R G，REYMOND S T，ANDERSEN B. RAPD fragment pattern analysis and morphological segregation of small-spored Alternaria species and species groups[J]. Mycological Research，2000，104（2）：151-160.

[18] SOMMA S，POSE G，PARDO A，MULè G，PINTO V F，MORETTI A，LOGRIECO A F. AFLP variability，toxin production，and pathogenicity of Alternaria species from Argentinean tomato fruits and puree[J]. International Journal of Food Microbiology，2011，145（2/3）：414-419.

[19] ROBERTS R G，BISCHOFF J F，REYMOND S T. Differential gene expression in Alternaria gaisen exposed to dark and light[J]. Mycological Progress，2012，11（2）：373-382.

[20] STEWART J E，ANDREW M，BAO X D，CHILVERS M I，CARRIS L M，PEEVER T L. Development of sequence characterized amplified genomic regions （SCAR） for fungal systematics：Proof of principle using Alternaria，Ascochyta and Tilletia[J]. Mycologia，2013，105（4）：1077-1086.

[21] FERRANTE P，F(xiàn)IORILLO E，MARCELLETTI S，MAROCCHI F，MASTROLEO M，SIMEONI S，SCORTICHINI M. The importance of the main colonization and penetration sites of Pseudomonas syringae pv. actinidiae and prevailing weather conditions in the development of epidemics in yellow kiwifruit，recently observed in central Italy[J]. Journal of Plant Pathology，2012，94：455-461.

[22] WU J P，DIAO Y，GU Y C，HU Z L. Infection pathways of soft rot pathogens on Amorphophallus konjac[J]. African Journal of Microbiology Research，2010，4（14）：1495-1499.

[23] 劉勇，張雅雯，南志標，段廷玉. 天然草地管理措施對植物病害的影響研究進展[J]. 生態(tài)學報，2016，36（14）：4211-4220.

LIU Yong，ZHANG Yawen，NAN Zhibiao，DUAN Tingyu. Progress of research into the effects of native grassland management practices on plant disease[J]. Acta Ecologica Sinica，2016，36（14）：4211-4220.

收稿日期：2024-10-15 接受日期：2024-11-21

基金項目：河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項資金資助項目（HBCT2024150208）；河北省農(nóng)林科學院科技創(chuàng)新人才隊伍建設(shè)資助項目（C23R0702）

作者簡介：張勝平，男，副研究員，博士，主要從事果樹病害致病機制與流行防控研究。E-mail：zspingyouxiang@126.com

*通信作者Author for correspondence. E-mail：sgszbyjs@163.com