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人LXR-LBD原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在E.Coli中的表達(dá)

2005-04-29 00:44:03葉治家曹廷兵彭家和
生命科學(xué)研究 2005年1期
關(guān)鍵詞:表達(dá)克隆

鞏 艷 葉治家 曹廷兵 彭家和 江 渝

摘要:從正常中國(guó)人的肝臟組織分離總RNA,采用RT-PCR獲得人的LXR-LBD cDNA,然后克隆至原核表達(dá)載體pET28a,構(gòu)建高效原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中國(guó)人的LXR-LBD cDNA序列與Gene Bank報(bào)道的序列一致。把構(gòu)建的pET28a-LXR-LBD質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),Western blot檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物,在相對(duì)分子質(zhì)量35kD處有特異的蛋白表達(dá)條帶,表達(dá)蛋白以可溶性和包涵體方式存在。在N末端融合6×His純化標(biāo)簽的表達(dá)產(chǎn)物用Ni2+-NTA離子交換樹(shù)脂進(jìn)行純化,純化蛋白進(jìn)行DSD-PAGE純度分析大于90%以上。

關(guān)鍵詞:LXR;LXR-LBD;克?。槐磉_(dá)

中圖分類(lèi)號(hào):Q786

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1007-7847(2005)01-0033-05

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