杜英俊

[摘要]目的：探討山波苓體外抗腫瘤作用的活性部位。方法：MTT染色法對山波苓五種溶劑提取物體外抗腫瘤活性進(jìn)行初步的研究。結(jié)果：氯仿提取物對乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）、神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）、肺癌細(xì)胞（Lu-04）有較好的抑制生長作用，IC50分別為0.2699mg/ml、0.2634mg/ml、0.4961mg/ml，對肝癌細(xì)胞HepG2抑制作用差，IC50為0.9379mg/ml；山波苓石油醚提取部位對乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）、神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）、肺癌細(xì)胞（Lu-04）、肝癌細(xì)胞HepG2的IC50分別為0.5902mg/ml、0.5725mg/ml、0.7938mg/ml、0.6374mg/ml；乙酸乙酯提取物對肺癌細(xì)胞（Lu-04）有一定的抑制作用，IC50為0.7343mg/ml；水溶性提取物以及正丁醇提取物無明顯抑制腫瘤作用。結(jié)論：山波苓氯仿提取部位、石油醚提取部位體外抗腫瘤作用較好，值得對其提取部位進(jìn)一步分離純化并研究其抗腫瘤作用機(jī)制。

[關(guān)鍵詞]山波苓 抗腫瘤 活性

中圖分類號：R2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1671－7597（2009）0520004－01

山波苓為藍(lán)雪科藍(lán)雪屬植物，又名白花丹、白雪花、白皂藥、一見消、烏面馬、火靈丹、假茉莉、猛老虎、白花巖陀等。主要分布在東南亞地區(qū)和我國四川、福建、臺灣、廣東、廣西省等地區(qū)，為東南亞許多國家及我國多民族醫(yī)用藥材。在民間有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)，藥理作用廣泛，其抗腫瘤作用有很大的研究開發(fā)價值。本實(shí)驗(yàn)對山波苓不同溶劑的提取部位進(jìn)行了體外抗腫瘤活性篩選，以期能為進(jìn)一步的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

一、選用材料和方法

（一）材料

1．供試品。山波苓石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物以及水溶性提取物均由西南民族大學(xué)少數(shù)民族藥物研究所提供。

2．癌細(xì)胞株。乳腺癌細(xì)胞株（Bre-04）、神經(jīng)癌細(xì)胞株（N-04）、肺癌細(xì)胞株（Lu-04）、肝癌細(xì)胞株（HepG2）由成都地奧制藥有限公司惠贈。

3．主要試劑及培養(yǎng)用液等。RPMI-1640培養(yǎng)基、DMEM（低糖）培養(yǎng)基（GIBCOBRL）；小牛血清（成都哈里）；胰蛋白酶（GIBCO）；MTT染料、DMSO（sigma）。

4．主要儀器。CO2培養(yǎng)箱（Thermo3111美國）；熒光相差顯微鏡（LX-71日本）；板式酶標(biāo)儀（ZS-2北京新風(fēng)機(jī)電技術(shù)公司）

（二）方法

乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）、神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）、肺癌細(xì)胞（Lu-04）均用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，肝癌細(xì)胞（HepG2）用含10%小牛血清的DMEM（低糖）培養(yǎng)基培養(yǎng)，兩種培養(yǎng)基均含青霉素和鏈霉素，濃度為100IU/ml。細(xì)胞均置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

次日加藥，將待測物配成5個2倍稀釋的濃度，96孔板每孔加80μl培養(yǎng)基，20μl藥液，每個濃度3個復(fù)孔。正常對照細(xì)胞組加100μl培養(yǎng)基，溶媒對照組加80μl培養(yǎng)基，20μl溶媒，加藥后，繼續(xù)置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

24～48h后，96孔板每孔加50μl MTT染料（5mg/ml），繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入150μl DMSO，充分振蕩后迅速于492nm波長處用酶標(biāo)儀測OD值，測時減去空白對照值。計算待測樣品對腫瘤細(xì)胞的抑制率。

二、結(jié)果

樣品在492nm波長處測定OD值，數(shù)據(jù)分析采用CS2000簡明統(tǒng)計分析軟件，以溶劑對照處理組的腫瘤細(xì)胞為對照組，計算不同濃度藥物對腫瘤細(xì)胞的抑制率，以抑制率和濃度作直線回歸計算，得到藥物的半數(shù)抑制濃度IC50。山波苓石油醚及氯仿提取物對體外培養(yǎng)的四種腫瘤細(xì)胞的抑制作用；山波苓水溶性及正丁醇提取物對體外培養(yǎng)的四種腫瘤細(xì)胞的抑制作用；山波苓乙酸乙酯提取物對體外培養(yǎng)的四種腫瘤細(xì)胞的抑制作用。腫瘤細(xì)胞的抑制率（％）＝對照組平均A值－給藥組平均A值對照組平均A值×100%。

實(shí)驗(yàn)中山波苓氯仿和石油醚提取物所用溶媒為PBS和DMSO的混合溶液，結(jié)果顯示，溶媒對腫瘤細(xì)胞也有一定的細(xì)胞毒作用，以未經(jīng)溶劑處理的腫瘤細(xì)胞為對照組，溶媒對腫瘤細(xì)胞的平均抑制率為24.06%，樣品對腫瘤細(xì)胞的抑制率以溶劑處理的腫瘤細(xì)胞為對照計算而得。乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）有一定的抑制作用，但無明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，對神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）有較弱的抑制作用，無明顯劑量效應(yīng)關(guān)系，對肝癌細(xì)胞HepG2幾乎無抑制作用；山波苓水溶性提取物高濃度時對乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）有一定的抑制作用，無明顯劑量效應(yīng)關(guān)系，對神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）在高濃度時有較弱的抑制作用，其IC50為5.8222mg/ml，對肺癌細(xì)胞（Lu-04）、肝癌細(xì)胞（HepG2）幾乎無抑制作用；山波苓正丁醇提物高濃度對乳腺癌細(xì)胞（Bre-04）顯示一定的抑制作用，IC50為3.5361mg/ml，對神經(jīng)癌細(xì)胞（N-04）、肺癌細(xì)胞（Lu-04）、肝癌細(xì)胞HepG2無明顯抑制作用。

三、討論

惡性腫瘤對人類的健康威脅很大，同心血管疾病成為醫(yī)學(xué)上的兩大難關(guān)，每年大約有700萬新增患者，約500萬人死于癌癥。目前對腫瘤的治療仍然是以放療、化療、手術(shù)治療為主，近年來發(fā)展起來的生物治療也顯示出了強(qiáng)大的生命力。在腫瘤的藥物治療方面，由于開發(fā)治療腫瘤的化學(xué)合成藥物耗資巨大，因此從植物藥、礦物藥、動物藥中尋找具有高效低毒的抗腫瘤活性的成分就成為抗腫瘤藥物研究的一個熱點(diǎn)。

山波苓為我國多民族醫(yī)藥用的藥材，在民間有廣泛的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)。云南哈尼族及傣族、廣西瑤族、維吾爾族、印度醫(yī)生均用其治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、跌打損傷、血淤經(jīng)閉、痛經(jīng)、癥瘕積聚、癰疥、瘡疥、癬癩、瘰疬、蛇咬、瘧疾、目翳、迎風(fēng)流淚等。壯醫(yī)用山波苓治療上頜癌、齒齦癌、食道癌、胰腺癌、惡性淋巴瘤、外陰癌等。24例晚期鼻咽癌患者給予山波苓湯等治療，結(jié)果有獨(dú)特的療效及優(yōu)越性。文獻(xiàn)報道稱山波苓提取物有抗腫瘤活性，但國內(nèi)外關(guān)于其抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究報道比較少，未見對不同溶媒提取部位的抗腫瘤篩選。本實(shí)驗(yàn)對山波苓的不同溶劑提取部位進(jìn)行了體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示氯仿提物部位和石油醚提取部位抗腫瘤活性較好，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但是IC50偏大，有必要對其進(jìn)一步純化。其抗腫瘤作用的機(jī)制也有待進(jìn)一步探明。

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