原 靈,陳愛平,詹鑾峰,林震宇,楊勁松

2008年福建省5設(shè)區(qū)市公共場(chǎng)所中央空調(diào)冷卻塔水軍團(tuán)菌污染狀況調(diào)查＊

原 靈,陳愛平,詹鑾峰,林震宇,楊勁松

福建省地處經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的東南沿海,隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們的生活水平的提高,在公共場(chǎng)所如商場(chǎng)、賓館、飯店及醫(yī)院等均已廣泛使用各種空調(diào)系統(tǒng),亦為“城市文明病”——軍團(tuán)病的發(fā)生提供了有利的條件。軍團(tuán)病是一種細(xì)菌性呼吸道傳染病,病原體是軍團(tuán)菌,一但感染得病,如未能及時(shí)治療,病死率很高〔1〕。福建省迄今尚無軍團(tuán)菌污染狀況的較完整的調(diào)查,為了較全面了解福建省公共場(chǎng)所中央空調(diào)冷卻塔水中軍團(tuán)菌污染狀況,制定軍團(tuán)病的監(jiān)測(cè)防治措施和控制該病流行提供科學(xué)依據(jù),作者于2008年7月至10月選擇經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平不同的5個(gè)設(shè)區(qū)市為調(diào)查點(diǎn),在賓館、酒店、大型商場(chǎng)、超市、醫(yī)院等114單位,采集中央空調(diào)冷卻塔水115份進(jìn)行嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 調(diào)查點(diǎn) 調(diào)查點(diǎn)為福建省的5個(gè)設(shè)區(qū)市,即福州市、廈門市、泉州市、漳州市及龍巖市共 114家(其中商場(chǎng)或超市13家,賓館、酒店和大飯店99家,醫(yī)院2家)單位,同時(shí)對(duì)每個(gè)采樣單位進(jìn)行樣品登記。

1.2 采樣時(shí)間及數(shù)量 2008年6月至10月,在114家共采集中央空調(diào)冷卻塔水 115份,每份300m L置滅菌采樣瓶中送檢。

1.3 材料

1.3.1 培養(yǎng)基 GVPC平板、BCYE-α平板、BCYE-cys平板及血平板購自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司,在有效期內(nèi)使用。生化反應(yīng)管購自北京友康有限公司。

1.3.2 診斷試劑 軍團(tuán)菌乳膠試劑購自英國(guó)OXO ID公司,嗜肺軍團(tuán)菌診斷血清購自日本生研。LP7～LP15嗜肺軍團(tuán)菌分型診斷血清購自天津生物芯片公司。

1.3.3 儀器 PCR擴(kuò)增儀、TGL-16B臺(tái)式高速離心機(jī)、水平電泳槽、凝膠成像儀、生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱。

1.3.4 引物 嗜肺軍團(tuán)菌16s rRNA基因及mip基因引物由上海生工合成。嗜肺軍團(tuán)菌16S rRNA基因引物序列參照中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所舉辦《軍團(tuán)菌培訓(xùn)班講課資料》,mip基因引物序列參照文獻(xiàn)〔2〕。

1.3.5 試驗(yàn)菌株 嗜肺軍團(tuán)菌標(biāo)準(zhǔn)株及大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株系本科室菌種組保存。

1.4 檢驗(yàn)方法

1.4.1 樣品處理與分離培養(yǎng) 參照衛(wèi)生部《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》及《ISO 11731 水樣軍團(tuán)菌檢測(cè)》操作。

1.4.2 PCR 鑒定按常規(guī)PCR檢測(cè)方法進(jìn)行,模板制備 (煮沸法):將菌苔刮至含100μL純水的 Eppendorf離心管中,煮沸15min后,12 000r/min離心3min,取上清作為 PCR擴(kuò)增反應(yīng)的DNA模板,保存于 -20℃。陽性對(duì)照為嗜肺軍團(tuán)菌標(biāo)準(zhǔn)株(LP1)系本科室菌種組保存。引物序列如下。

目的基因 PCR引物序列(5’-3’) 片段大小(bp)16S rRNA F:GAGGGTTGATAGGTTAAGAGC 430 R:CGGTCAACTTATCGCGTTTGCT mip F:GGTGACTGCGGCTGTTATGG 630 R:GGCCAATAGGTCCGCCAACG

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)菌分離 115份樣品中分離出47株嗜肺軍團(tuán)菌,檢出率為40.86%。所分離的菌株均為革蘭氏陰性桿菌;在BCYE-α平板上均能生長(zhǎng),BCYE-cys和血平板上均不能生長(zhǎng);生化反應(yīng)均為:觸酶-、氧化酶-、馬尿酸水解 + 、尿素-、硝酸鹽-、糖發(fā)酵管-、明膠液化試驗(yàn)+。

2.2 乳膠凝集試驗(yàn) 能與LP1乳膠試劑產(chǎn)生凝集30株,占63.82%;與LP2-14乳膠試劑產(chǎn)生 凝集17株占36.17%(17/47)。

2.3 血清分型 用嗜肺軍團(tuán)菌診斷血清LP1-LP15對(duì)47株嗜肺軍團(tuán)菌進(jìn)行分型,定為L(zhǎng)P1 30株 ,占 63.82%、LP5 5 株 、LP6 12 株 。

2.4 PCR鑒定 采用16s rRNA及mip基因引物從分離的47株可疑培養(yǎng)物制備的摸板中擴(kuò)增出與相應(yīng)陽性對(duì)照一致的條帶。PCR檢測(cè)結(jié)果見圖1(圖1為部分分離菌株P(guān)CR檢測(cè)鑒定結(jié)果)。

2.5 5個(gè)設(shè)區(qū)市冷卻塔水嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)結(jié)果將5個(gè)設(shè)區(qū)市(漳州市、龍巖市、福州市、泉州市、廈門市)冷卻塔水嗜肺軍團(tuán)菌檢出率進(jìn)行比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=22.159,P<0.05),見表1。考慮到龍巖市、漳州市數(shù)據(jù)較少,將兩組數(shù)據(jù)合并為一組即合并組,并采用卡方分割的方法與其余3個(gè)設(shè)區(qū)市進(jìn)行兩兩比較 (α’=0.007143),χ2合并-廈門=16.856,P合并-廈門<α’,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;χ2合并-泉州=14.964,P合并-泉州<α’,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;χ2合并-福州=2.743,P合并-福州>α’,兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析合并組(即龍巖市與漳州市)冷卻塔水嗜肺軍團(tuán)菌檢出率高于泉州市、廈門市,與福州市比較,無顯著差異。

圖1 部分分離的嗜肺軍團(tuán)菌菌株P(guān)CR鑒定結(jié)果1:陽性對(duì)照菌株(嗜肺軍團(tuán)菌標(biāo)準(zhǔn)株),2～8:樣品株,菌株號(hào)依次為水 2008-8、水 2008-10、水 2008-12、水2008-14、水 2008-15、水 2008-19、水 2008-24,9～10:分別是大腸桿菌為陰性對(duì)照和空白對(duì)照,M為DL2000 Marker。

2.6 公共場(chǎng)所嗜肺軍團(tuán)菌的污染狀況 在本次調(diào)查檢測(cè)的114家公共場(chǎng)所中,檢出嗜肺軍團(tuán)菌的公共場(chǎng)所為46家,公共場(chǎng)所嗜肺軍團(tuán)菌的污染率為40.35%。在檢出嗜肺軍團(tuán)菌的46家公共場(chǎng)所,商場(chǎng)、超市嗜肺軍團(tuán)菌的污染率為61.54%,賓館、酒店、飯店污染率也接近40.0%;醫(yī)院2份均檢出嗜肺軍團(tuán)菌,見表2。

3 討 論

調(diào)查結(jié)果顯示我省5個(gè)設(shè)區(qū)市114家公共場(chǎng)所受嗜肺軍團(tuán)菌污染有46家,污染率達(dá)40.35%,采集的115份冷卻塔水,嗜肺軍團(tuán)菌檢出陽性的冷卻塔水有 47份,陽性檢出率為 40.86%,與湖北省〔3〕、北京市〔4〕、廣州市〔5〕、深圳〔6〕、杭州〔7〕報(bào)道的陽性率大致相同;從鑒定結(jié)果來看,檢出的47株均為嗜肺軍團(tuán)菌,血清分型以LP1血清型為主要菌型,占總數(shù)的63.82%(30/47),其次是LP6,占總數(shù)的25.53%(12/47),與北京市〔4〕、杭州市〔7〕LP1 的血清型基本相符。

本文調(diào)查結(jié)果闡明,福建省5個(gè)設(shè)區(qū)市的商場(chǎng)、超市、賓館、酒店、飯店的空調(diào)冷卻塔水受到嗜肺軍團(tuán)菌污染比較嚴(yán)重;LP1血清型為主要優(yōu)勢(shì)菌型;本次檢測(cè)有2家醫(yī)院的2份水樣均檢測(cè)到嗜肺軍團(tuán)菌,由于份數(shù)少,有待今后調(diào)查研究。醫(yī)院人群流動(dòng)量大,病人的抵抗力都比較低,屬于高危人群,一旦發(fā)生軍團(tuán)菌污染暴發(fā)其后果嚴(yán)重,必需引起重視。

調(diào)查研究結(jié)果還顯示,龍巖市及漳州市冷卻塔水嗜肺軍團(tuán)菌檢出率高于泉州市、廈門市,福州市檢出率也達(dá)56.00%,提示5個(gè)設(shè)區(qū)市集中式中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)已對(duì)人群產(chǎn)生潛在的危害。隨著國(guó)民經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人民生活水平的日益提高,中央空調(diào)系統(tǒng)越來越多地被廣泛使用,軍團(tuán)菌病發(fā)生的危險(xiǎn)勢(shì)必明顯增加。建議開展對(duì)公共場(chǎng)所集中式中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的日常監(jiān)測(cè)、定期換水和按時(shí)清洗消毒。各地衛(wèi)生部門應(yīng)加大對(duì)公共場(chǎng)所中央空調(diào)系統(tǒng)的監(jiān)督監(jiān)測(cè)力度,消除軍團(tuán)菌生長(zhǎng)繁殖的條件,保證冷卻塔水質(zhì)衛(wèi)生安全,從而控制軍團(tuán)菌病的發(fā)生;同時(shí)要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)軍團(tuán)菌有關(guān)知識(shí)的宣傳教育,提高人們對(duì)軍團(tuán)菌病有關(guān)知識(shí)的了解、提高防范意識(shí)。

表1 5個(gè)設(shè)區(qū)市冷卻塔水嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)結(jié)果

表2 公共場(chǎng)所嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè)結(jié)果

〔1〕陳悅,沈健民,王剛毅.軍團(tuán)菌流行現(xiàn)況及其對(duì)策研究〔J〕.上海預(yù)防醫(yī)學(xué),2003:17.

〔2〕Jaulhac B,Nowicki M,Bornstein N,et al.Detection of Legionella spp.In bronchoalveolar lavage fluids by DNA amplification〔J〕.J Clin Microbiol,1992 Ap r,30(4):920-4.

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1002-2694(2010)11-1080-03

R379.9

B

＊本課題為福建省2009年自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.31091732)

福建省疾病預(yù)防控制中心,福州 350001;Email:fjcdcxjyuanling@yahoo.com.cn

2010-05-27;

2010-08-31