王 青

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院病理科，山東 泰安 271000)

粘液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma, MEC)是涎腺最常見的惡性腫瘤之一，占涎腺腫瘤5%～12%，好發(fā)于腮腺。手術(shù)切除是其治療的主要方法，但術(shù)后易局部復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移是預(yù)后不良的主要原因。腫瘤術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是一個多步驟的連續(xù)性的過程，腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是其中的一個重要方面。隨著腫瘤增殖動力學(xué)研究的不斷深人，通過細(xì)胞增殖活性檢測來評價腫瘤的惡性度、預(yù)測預(yù)后的可能性成為一種趨勢。本實驗采用免疫組化技術(shù)(SABC法)對涎腺粘液表皮樣癌的增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表達(dá)及其臨床意義進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 臨床資料及切片制備

30例涎腺粘液表皮樣癌組織均取自我院1984年～2010年手術(shù)切除標(biāo)本蠟塊，患者年齡27～72(平均51.7)歲，男11例，女19例，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以術(shù)后病理檢查結(jié)果為準(zhǔn)。所有患者術(shù)前均未接受化療或放療， 根據(jù)WHO的MEC分級標(biāo)準(zhǔn)[1]，高分化21例，低分化9例。其中大涎腺粘液表皮樣癌20例，小涎腺粘液表皮樣癌10例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。蠟塊制備5μm厚連續(xù)切片，抗PCNA單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并做常規(guī)蘇木精-伊紅染色。

1.2 免疫組化染色

第一抗體PCNA為武漢博士德公司提供，3,3-二氨基苯聯(lián)胺(DAB)為Sigma公司產(chǎn)品，染色方法參照試劑盒說明按SABC法進(jìn)行。分別用1.5%正常兔血清和0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)取代第一抗體作為替代對照和空白對照。用己證實 PCNA染色陽性的乳粘液表皮樣癌切片作陽性對照。

1.3 PCNA標(biāo)記指數(shù)(proliferating cell nuclear antigen label index，PLI)

絕大多數(shù)陽性細(xì)胞以胞核棕褐色染色，顆粒狀或彌散(圖1)，部分也可胞質(zhì)著色。觀察500個腫瘤細(xì)胞，PCNA陽性細(xì)胞數(shù)所占的百分?jǐn)?shù)即為PLI。

圖1 PCNA陽性細(xì)胞核內(nèi)含有棕褐色顆粒(免疫組化DAB染色×400)

Fig1 There was a cytoplasmic staining of the tumour cells(DAB staining,×400)

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，PCNA表達(dá)與臨床病理的關(guān)系用X2檢驗。

2 結(jié) 果

PCNA染色定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核被染成棕黃色或褐色，核顯色較深時，細(xì)胞質(zhì)著色較淺，染色方式呈顆粒型或彌漫型，以前者多見。在涎腺粘液表皮樣癌不同分化程度或癌的不同區(qū)域，PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量和分布呈異質(zhì)性。高分化粘液表皮樣癌陽性細(xì)胞主要圍繞在癌巣周邊和浸潤前緣，低分化粘液表皮樣癌陽性細(xì)胞很密集，分布無規(guī)律性。

30例涎腺粘液表皮樣癌 PLI的均數(shù)為(75.47士17.83)%，范圍在21%～93%。以PLI平均值分為低25例(21%～57%)、高22例(57.01%～93%)兩組進(jìn)行分析。PCNA表達(dá)與涎腺粘液表皮樣癌臨床病理因素的關(guān)系見表1。

表1 PCNA的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

3 討 論

細(xì)胞增殖的評估是腫瘤的組織學(xué)分類所依據(jù)的重要指標(biāo)，與腫瘤的治療和復(fù)發(fā)有著潛在的相關(guān)性。PCNA是一種分子量為36kD的酸性核蛋白，是DNA聚合酶的輔助蛋白[2], 定位于20號染色體上。含有6個外顯子與5個內(nèi)含子，長約7.0Kb，在內(nèi)含子之間及內(nèi)含子與外顯子之間存在大量重復(fù)序列，在5'端和3'端存在廣泛的側(cè)翼序列，這些側(cè)翼序列參與細(xì)胞內(nèi)的某些調(diào)控并受控于其他基因和細(xì)胞因子。PCNA與細(xì)胞增殖狀態(tài)明顯相關(guān)，是伴隨細(xì)胞增殖而表達(dá)的一種核內(nèi)蛋白。PCNA在增殖細(xì)胞中的含量變化有明顯的周期性，在靜止細(xì)胞中量很少,G1晚期開始增加，S期達(dá)高峰，G2、M期明顯下降。這種變化與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的時相變化一致，說明其表達(dá)程度與細(xì)胞增殖周期關(guān)系密切，因此作為評價細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)之一[3]。腫瘤生長不僅是病變體積的增長，更重要的是細(xì)胞增殖活性發(fā)生變化，增殖活性是了解腫瘤生物學(xué)行為的一個有用的輔助手段。腫瘤細(xì)胞增殖活性的增加可能導(dǎo)致多克隆亞群的產(chǎn)生并有助于其中的某些亞群獲得浸潤、轉(zhuǎn)移的能力。在包括結(jié)腸癌、肺癌、甲狀粘液表皮樣癌、胃癌的許多惡性腫瘤中，增殖活性與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能、復(fù)發(fā)均有顯著相關(guān)性[4]。

不同分化程度的粘液表皮樣癌有著明顯不同的臨床表現(xiàn)和預(yù)后。目前一般根據(jù)其分化程度判斷惡性程度。WHO對粘液表皮樣癌分化程度的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)為，高分化粘液表皮樣癌，粘液細(xì)胞數(shù)量50%,表皮樣細(xì)胞分化好,低分化粘液表皮樣癌，腫瘤主要由未分化的中間細(xì)胞或分化差的表皮樣細(xì)胞構(gòu)成，粘液細(xì)胞數(shù)量不足10%[1]。有些病例，組織病理學(xué)上精確地判定其細(xì)胞組成比較困難，其組織病理學(xué)的分級不夠客觀，使得組織病理學(xué)診斷有時和臨床的生物學(xué)行為表現(xiàn)不一致。近年來，有些研究報告[5]用生物學(xué)標(biāo)記物試圖區(qū)分其惡性程度以獲得更客觀的評估。Zhu等[6]認(rèn)為PCNA的表達(dá)指數(shù)是區(qū)分涎腺腫瘤良惡性可靠的標(biāo)記物。Cardoso等[7]認(rèn)為PCNA的表達(dá)可作為粘液表皮樣癌分級輔助方法。

目前對涎腺粘液表皮樣癌生物學(xué)行為的判斷仍主要靠組織學(xué)分級和臨床分期，但受主客觀因素的影響，由于涎腺粘液表皮樣癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移是預(yù)后不良的主要原因，所以尋找可靠、準(zhǔn)確的判定預(yù)后的指標(biāo)已成為涎腺粘液表皮樣癌生物學(xué)行為研究的重點(diǎn)之一。本研究結(jié)果表明，PCNA指數(shù)與涎腺粘液表皮樣癌的組織分化程度相關(guān)，這與子宮內(nèi)膜癌、胃癌報道結(jié)果一致〔8，9，10〕。在組織分化程度高的腫瘤中PCNA陽性細(xì)胞數(shù)少，染色較淡，呈棕色，而腫瘤組織分化程度低者，PCNA表達(dá)量高，染色加深呈棕褐色，有時呈顆粒狀，反映出腫瘤細(xì)胞增殖活性和分化的一般規(guī)律，提示PCNA高表達(dá)者細(xì)胞增生活躍，生長繁殖能力更強(qiáng)，其分化差，惡性程度高。

本實驗還顯示，PCNA 表達(dá)與涎腺粘液表皮樣癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著的相關(guān)性，這與胃癌報道結(jié)果一致[11]，說明增殖活性較高的腫瘤更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。以上表明PCNA在常規(guī)病理切片上能敏感檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性或狀態(tài)，是判斷涎腺粘液表皮樣癌患者預(yù)后的良好指標(biāo)。這在其它腫瘤檢測中也有類似發(fā)現(xiàn)報道。PCNA免疫反應(yīng)能原位檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性，其方法簡便、重復(fù)性強(qiáng)，除可進(jìn)行細(xì)胞動力學(xué)研究外，對指導(dǎo)臨床腫瘤化療和放療，判斷預(yù)后都具有重要價值。檢測涎腺粘液表皮樣癌PCNA的表達(dá)可用于判斷其惡性程度及預(yù)后，PCNA高表達(dá)者需嚴(yán)密隨訪，并加強(qiáng)術(shù)后輔助治療。

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