楊永林，楊 華，何其宏，白丁平

（1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，石河子 832000；2.新疆石河子紫泥泉綿羊研究所）

雜交改良是提高低產(chǎn)家畜生產(chǎn)性能的有效途徑之一，但不同雜交后代的生產(chǎn)性能并不相同，薩福克羊與湖羊雜交，是以薩?？搜蚣?jí)進(jìn)雜交來提高后代的產(chǎn)肉性能，但同時(shí)又要考慮多胎性狀的保留，湖羊的多胎性狀主效基因是FecB（BMPR-IB）基因。因此，本試驗(yàn)利用分子標(biāo)記技術(shù)，檢測薩湖F1、F2繁殖性狀主效基因，分析其不同基因型與薩湖雜交后代產(chǎn)羔率的相關(guān)性，為生產(chǎn)實(shí)踐中利用薩湖雜交后代提供一定的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試羊群及基因組 供試羊選自新疆農(nóng)墾科學(xué)院試驗(yàn)種羊場的薩福克羊和湖羊雜交F1母羊82只，薩?？搜蚝秃螂s交F2母羊35只。

DNA的提取方法：分別取薩?？搜蚝秃螂s交F1母羊和F2母羊的耳組織樣，采用酚、氯仿抽提，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)綿羊BMPR-IB基因（Gen－Bank登錄號(hào)：AF357007，AF298885）序列設(shè)計(jì)并合成1對(duì)強(qiáng)制產(chǎn)生限制性酶切位點(diǎn)的引物P1和P2，引物由上海博亞生物公司合成。

1.3 試劑 限制性內(nèi)切酶AvaⅡ，PCR試劑盒均購自TaKaRa公司。

1.4 基因型命名 參照Wilson等［1］的方法，應(yīng)用PCR－RFLP方法進(jìn)行BMPR-IB基因檢測。綿羊基因組DNA的PCR產(chǎn)物經(jīng)AvaⅡ酶切后，出現(xiàn)純合子命名為BB，雜合子命名為B+，野生型命名為++。

1.5 產(chǎn)羔數(shù) 試驗(yàn)羊春季4月進(jìn)行同期發(fā)情處理，配種后受胎母羊在其分娩時(shí)記錄個(gè)體產(chǎn)羔數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 BMPR-IB基因不同基因型對(duì)薩湖F1、F2母羊產(chǎn)羔性能的影響 由表1可以看出，BMPR-IB基因型為++的薩湖F1母羊產(chǎn)羔率145.4%，薩湖F2母羊產(chǎn)羔率134.8%，不同雜交代數(shù)母羊產(chǎn)羔率差異不顯著（P＞0.05）；BMPRIB基因型為B+的薩湖F1母羊產(chǎn)羔率為197.6%，薩湖F2母羊產(chǎn)羔率212.5%，不同雜交代數(shù)母羊產(chǎn)羔率差異也不顯著（P＞0.05）。BMPR-IB基因型為BB的薩湖F1母羊產(chǎn)羔率206.6%，薩湖F2母羊產(chǎn)羔率225.0%，不同雜交代數(shù)母羊產(chǎn)羔率差異也不顯著（P＞0.05）。由此表明，基因型++、基因型B+和基因型BB決定著不同雜交代數(shù)母羊的繁殖性能（產(chǎn)羔率），而母羊的產(chǎn)羔率與雜交代數(shù)無關(guān)。

表1 不同基因型薩湖F1、F2母羊產(chǎn)羔性能

2.2 薩湖不同雜交代數(shù)對(duì)母羊基因型頻率和基因頻率的影響 由表2可以看出，薩湖F1母羊BB基因型頻率為0.37，薩湖F2母羊?yàn)?.11，薩湖F1BB基因型頻率極顯著高于F2（P＜0.01）；薩湖F1母羊B+基因型頻率為0.50，薩湖F2母羊?yàn)?.23，薩湖F1B+基因型頻率極顯著高于F2（P＜0.01）；薩湖F1母羊++基因型頻率為0.13，薩湖F2母羊?yàn)?.66，薩湖F1++基因型頻率極顯著低于F2（P＜0.01）。薩湖F1母羊B基因頻率為0.62，薩湖F2母羊?yàn)?.23，薩湖F1B基因頻率極顯著高于F2（P＜0.01）；薩湖F1母羊+基因頻率為0.38，薩湖F2母羊?yàn)?.77，薩湖F2+基因頻率極顯著高于F1（P＜0.01）。由此可知，隨著薩湖雜交代數(shù)的升高，B+基因型頻率、B基因頻率出現(xiàn)明顯降低趨勢，++基因型頻率、+基因頻率出現(xiàn)明顯增高趨勢，表明隨著級(jí)進(jìn)雜交代數(shù)的升高，下一代母羊的產(chǎn)羔率會(huì)出現(xiàn)明顯下降。

3 討論

眾多研究表明，BMPR-IB基因?yàn)橛绊懢d羊排卵率和產(chǎn)羔數(shù)的主效基因，攜帶BMPR-IB基因的母羊平均產(chǎn)羔率極顯著高于野生型母羊產(chǎn)羔率［2－4］。王啟貴等［5］在新疆研究湖羊、中國美利奴單胎品系、中國美利奴肉用和毛用多胎品系時(shí)發(fā)現(xiàn)，BMPR-IB基因?qū)d羊產(chǎn)羔數(shù)的影響十分明顯，并認(rèn)為可以用該基因在新疆進(jìn)行多胎綿羊品系選育。朱二勇等［6］在新疆采用PCRRFLP技術(shù)對(duì)策勒羊（44只）、多浪羊（49只）、湖羊（32只）、中國美利奴羊（新疆型）多胎類型（40只）和中國美利奴羊（新疆型）（47只）進(jìn)行了分析研究，發(fā)現(xiàn)基因型BB、B+、++影響母羊平均產(chǎn)羔數(shù)，差異極顯著（P＜0.01），其中BB、B+基因型表現(xiàn)為多胎，++基因型表現(xiàn)為單胎。

表2 薩湖不同雜交代數(shù)母羊基因型頻率與基因頻率

本研究表明，在BMPR-IB基因++基因型作用下，薩湖F1、F2母羊產(chǎn)羔率分別為145.4%和134.8%；在B+基因型存在時(shí)，薩湖F1、F2母羊產(chǎn)羔率分別為197.6%和212.5%；在BB基因型存在時(shí)，薩湖F1、F2母羊產(chǎn)羔率分別為206.6%和225.0%，2個(gè)世代相同基因型母羊產(chǎn)羔率差異不顯著（P＞0.05）。該研究結(jié)果與王啟貴等的研究結(jié)論一致。本研究也證明，隨著雜交代數(shù)的增加，雜交后代的多胎繁殖性能明顯下降，我們也將在今后的薩湖后代選育中進(jìn)一步驗(yàn)證以上結(jié)論。因此，在培育多胎品系時(shí)，建議準(zhǔn)確檢測培育后代的BMPR-IB基因型，選留基因型為BB和B+的雜交后代，全部淘汰基因型為++的雜交后代，以加快育種進(jìn)展。

4 結(jié)論

薩湖F1、F2母羊繁殖性能（產(chǎn)羔率）主要受BMPR-IB基因BB、B+和++基因型影響，不受雜交代數(shù)影響。利用分子標(biāo)記對(duì)高產(chǎn)母羊的選擇，可能是在雜交后代中選留肉用和高繁殖力兩個(gè)性狀的理想方法。在利用分子標(biāo)記技術(shù)培育綿羊多胎品系時(shí)，應(yīng)該準(zhǔn)確檢測所培育后代的基因型，選留基因型為BB和B+的雜交后代，全部淘汰基因型為++的雜交后代，以加快育種進(jìn)展。

［1］Wilson T，Wu X Y，Juengel J L，et al.Highly prolific Booroola sheep have a mutation in the intracellular kinase domain of bone morphogenetic protein IB receptor（ALK－6）that is expressed in both oocytes and granulosa cells［J］.Biology of Reproduction，2001，64（4）：1225－1235.

［2］Davis G H.Fecundity genes in sheep［J］.Animal Reproduction Science，2004，82：247-253.

［3］Piper L R，Bindon B M.Genetic segregation for fecundity in Booroola Merino sheep［C］.Proceedings of the World Congress on Sheep and Beef Cattle Breeding，1982，1：394-400.

［4］楊華，張永勝，何其宏，等.中國美利奴羊多胎品系選育中多胎性狀分離與BMPR-IB基因型的相關(guān)性分析［J］.中國草食動(dòng)物，2009，29（1）：16-18.

［5］王啟貴，鐘發(fā)剛，李輝，等.綿羊產(chǎn)羔性狀主效基因檢測研究［J］.遺傳，2005，27（1）：80-84.

［6］朱二勇，史洪才，武堅(jiān)，等.BMPR-IB基因作為綿羊多胎性能候選基因的研究［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，15（6）：20-23.