衛(wèi)世杰， 霍務(wù)貞， 李曉芳， 方澤浩

(1.廣東藥學(xué)院藥劑系，廣東廣州510006;2.廣東藥學(xué)院中藥開發(fā)研究所，廣東廣州510006)

水飛薊賓(Silybin)是一種對各型病毒性肝炎及肝損害等病癥有良好療效的藥物，具有廣闊的應(yīng)用前景［1］。但該藥難溶于水及一般有機溶劑，且口服吸收差，生物利用度低，因此如何改善該藥的溶解特性，增加其體內(nèi)外溶出，并制備適宜的制劑是制劑研究人員所面臨的重要課題之一。為改善上述問題，本課題組制備了水飛薊賓磷脂復(fù)合物，增大了其脂溶性，并研制了水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化片，以期進一步達到增加體外溶出度、提高生物利用度的目的。

1 儀器與材料

1.1 儀器

METTLER AE240型電子天平(德國);Shimadzu LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器，Hypersil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)(日本島津);Zetasizer Nano ZS90納米粒度及Zeta電位分析儀(英國馬爾文儀器有限公司)。

1.2 試藥

水飛薊賓(西安天一生物科技有限公司，純度為90%);水飛薊賓對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號0856-200203);益肝靈片(陜西利君現(xiàn)代中藥有限公司，批號090602);水飛薊賓磷脂復(fù)合物(實驗室自制);吐溫-80(Tween-80，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司);Cremophor?RH40、EL(德國BASF公司)，其余均為藥用輔料。

2 實驗方法

2.1 水飛薊賓HPLC測定方法

2.1.1 色譜條件 色譜柱Hypersil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相:甲醇-水-冰醋酸(30∶40 ∶30，pH=4);流速:1 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:20 μL。

2.1.2 線性范圍的確定 精密稱取10 mg水飛薊賓對照品置于100 mL棕色量瓶中，甲醇溶解并定容。精密量取1、2、4、6、8、10 mL 分別于50 mL 棕色量瓶中，甲醇稀釋定容，搖勻，進樣，以峰面積對藥物濃度回歸得線性范圍。

2.2 自乳化處方的篩選與優(yōu)化

2.2.1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物在油相、表面活性劑和助表面活性劑中平衡溶解度的考察 將過量的水飛薊賓磷脂復(fù)合物分別加入裝有適量的油相、表面活性劑、助表面活性劑的微量離心管中，渦旋分散后，于37℃水浴平衡48 h后，8 000 r/min離心10 min，取上清液用甲醇溶解后，流動相稀釋后以高效液相方法測定水飛薊賓的含量。

2.2.2 相圖的繪制 在溶解度考察及初步配伍選擇實驗基礎(chǔ)上確定了幾種性能優(yōu)良的油相、表面活性劑和輔助表面活性劑。

三元相圖分別以油相、表面活性劑和輔助表面活性劑為頂點，相圖中各點代表不同的油相、表面活性劑和輔助表面活性劑比例，在處方中三者的總量一定，只是相對含量變化。分別對相圖中各點所對應(yīng)的處方進行自乳化效率考察，主要考察乳化速度和乳化粒徑。取約0.2 mL滴入100 mL水(37°C)中，用磁力攪拌器以50 r/min的速度攪拌，直至完全乳化記錄時間，并于500 nm測其吸光度，同時進行粒徑測定，然后靜置，觀察是否形成澄清透明或略帶乳光的微乳溶液，并記錄乳化時間［2］。

根據(jù)所得的結(jié)果繪制由表面活性劑-油相-輔助表面活性劑三元相圖，考察不同處方形成微乳的能力和區(qū)域，根據(jù)所得三元相圖的乳化區(qū)域大小來確定最優(yōu)處方［3］。

2.2.3 水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化給藥系統(tǒng)的體外評價 將磷脂復(fù)合物溶入表面活性劑中，以處方量的油相、表面活性劑和輔助表面活性劑于60℃水浴中渦旋混合，充分溶解混勻后在30℃水浴中平衡1 h，得到水飛薊賓磷脂復(fù)合物自微乳化液。

乳化后粒徑的測定:水飛薊賓磷脂復(fù)合物自微乳化溶液用0.1 mol/L HCl稀釋100倍后，用馬爾文激光粒度分析儀進行粒徑測定。

穩(wěn)定性考察:分別置于4℃、室溫(25℃)和冷熱循環(huán)(4℃，37℃各放置12 h相交替)3種條件下進行穩(wěn)定性考察。15天后觀察其外觀。

2.3 自乳化片的制備

按優(yōu)化處方配制自乳液，采用等量遞加法，將微粉硅膠與自乳液混合。吸收完畢后，再與處方量的MCC研磨，混合均勻，過篩后直接粉末壓片。

2.4 體外溶出度考察

分別稱取6片水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化片，照中國藥典(2005年版)二部附錄X C溶出度測定法(第一法)測定溶出度，溶出介質(zhì)分別為900 mL的0.1 mol/L鹽酸、蒸餾水和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溶出溫度為(37±0.5)℃，于0.5、1、2、4、8 與12 h取樣。以 HPLC 方法測定水飛薊賓含量，并繪制釋放度曲線。

3 結(jié)果與討論

3.1 水飛薊賓線性范圍考察

標準曲線為A=53 697.2C+37 682.3(R2=0.999 7)，線性范圍為2 ～20 μg/mL。

測定方法的準確度符合要求，方法日內(nèi)精密度＜0.7%，日間精密度＜1.3%，樣品溶液可在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定，表明該方法準確、可行。

3.2 自乳化處方篩選結(jié)果

3.2.1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物平衡溶解度結(jié)果 水飛薊賓磷脂復(fù)合物在不同油相、表面活性劑和輔助表面活性劑中的溶解度見表1。

表中數(shù)據(jù)表明水飛薊賓磷脂復(fù)合物在辛癸酸三甘油酯(GTCC)、乳化劑 OP、RH40中的溶解度較大，輔助乳化劑中異丙醇和無水乙醇溶解度較大，因此后續(xù)研究中采用這幾種輔料的組合。

3.2.2 繪制三元相圖確定處方中各成分的種類和用量 三元相圖結(jié)果見圖1。

表1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物在不同溶媒中的溶解度(37℃，±s，n=3)Tab.1 Solubility of silybin phospholipid complex in various oils and surfactants(37 ℃，±s，n=3)

表1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物在不同溶媒中的溶解度(37℃，±s，n=3)Tab.1 Solubility of silybin phospholipid complex in various oils and surfactants(37 ℃，±s，n=3)

溶媒 溶解度/(mg/mL) 溶媒 溶解度/(mg/mL)橄欖油 7.3±4.7 辛癸酸三甘油酯86.3±7.9油酸乙酯 17.2±1.1 亞油酸乙酯 11.4±3.2乳化劑OP 78.1±6.1 Tween-80 37.3±5.6 Cremophor EL 42±2.9 Cremophor RH40 101.4±7.5無水乙醇 19.2±3.3 PEG400 6.8±2.7丙二醇 10.6±2.4 異丙醇26.1±3.2

由圖1中c，e可見，油相油酸乙酯與GTCC相比較，GTCC形成微乳的區(qū)域明顯大于油酸乙酯;圖1中a、b與d、e相比較可見乳化劑為RH40時，形成微乳的區(qū)域較大;a、d與b、e相比較，異丙醇為輔助乳化劑時，形成微乳的區(qū)域較大。因此，選擇自微乳化區(qū)域最大的相圖e中的體系制備水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化液，進行后續(xù)研究。其中油相GTCC的含量范圍為10% ～35%，乳化劑RH40的含量范圍為40%～80%，輔助乳化劑異丙醇含量范圍為從10% ～55%。

3.2.3 粒徑及乳化時間考察 根據(jù)表2中的數(shù)據(jù)確定GTCC-RH40-異丙醇的最佳比例為20∶60∶20。見表2。

圖1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物自微乳圖Figure 1 Ternary phase diagram of silybin phospholipid complex

表2 不同處方的粒徑及乳化時間考察(n=6)Tab 2 Effect of self-microemulsification in vitro

3.3 自乳化片的制備

采用等量遞加法，將自乳化液與等量的微粉硅膠研磨混勻，制成疏松粉末狀，干法制粒后進行壓片。自乳液的質(zhì)量百分比為56.8%，微粉硅膠的質(zhì)量百分比為33.8%，MCC的質(zhì)量百分比為9.4%。

3.4 自乳化片溶出度考察結(jié)果

溶出度結(jié)果見圖2。

圖2 水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化片及市售片溶出度圖Fig.2 Dissolution curves of SPCMET compared with those in tablet in various cond itions

圖中SBSME為自制的水飛薊賓磷脂復(fù)合物自乳化片，T為市售的益肝靈薄膜衣片。從圖中結(jié)果可見，自制的自乳化片在3種溶出介質(zhì)中的溶出度均明顯高于參比制劑，達到了90%左右，而參比制劑僅為40%左右，且溶出介質(zhì)對溶出度的影響不大。說明將水飛薊賓磷脂復(fù)合物制成自乳化片后，能明顯提高其溶出度。

4 討論

4.1 水飛薊賓磷脂復(fù)合物與水飛薊賓相比，其脂溶性增大，不僅有利于體內(nèi)的跨膜轉(zhuǎn)運，也有利于制備液體制劑。SMEDDS的油相多為脂肪酸酯類和經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造或水解后的植物油類，尤其是鏈長在C8～C10之間的中等鏈長的脂肪酸酯類(MCT)。有研究表明表面活性劑最佳的HLB值在11～15之間，濃度也應(yīng)適中，這樣形成的乳滴粒徑較?。?-5］。本實驗中在溶解度的基礎(chǔ)上選擇了GTCC為油相、RH40為乳化劑，實驗結(jié)果也顯示最佳處方對水飛薊賓磷脂復(fù)合物具有較好的增溶作用，自乳化效率高，粒徑小，制劑穩(wěn)定，溶出度較市售薄膜衣片有明顯提高。

4.2 本實驗在繪制三元相圖時采用了一種新方法，即油相、乳化劑、助乳化劑總量為1 g，按不同比例配比，加入100 mL水中，觀察是否澄清，然后繪制以油相、乳化劑、助乳化劑為頂點的假三元相圖。與常用的加水法［6］相比，具有操作簡便，容易辨別的優(yōu)點，特別是對凝膠相的判斷上具有優(yōu)勢。

4.3 自微乳液可以制備成軟膠囊或以液體的形式直接服用［7］，但是存在諸多不便，如自乳化液一般比較粘稠，灌封時存在困難;軟膠囊囊殼中的水分在干燥過程中會進入自微乳液，從而改變了微乳各相的組成，并導(dǎo)致膠囊殼失水變干易于碎裂等。本實驗將自微乳液制成固體劑型口服，從而解決了微乳傳統(tǒng)給藥方式的不足。

4.4 溶出度結(jié)果顯示本實驗所制備的片劑溶出度明顯優(yōu)于市售片，由于采用的溶出介質(zhì)為蒸餾水、鹽酸溶液和磷酸鹽緩沖溶液，三者對水飛薊賓的溶解度和溶出速率均較差，但自乳化片的溶出度明顯較高，其原因為水飛薊賓磷脂復(fù)合物在溶液中形成微乳，所以制劑最終的溶出度較高。

［1］江 來，劉 歡，王春龍，等.水飛薊賓磷脂復(fù)合物口服微乳制備及性質(zhì)評價［J］.中草藥，2008，39(1):51-54.

［2］周曉堂，王 晶，王 穎，等.吡羅昔康自微乳化藥物傳遞系統(tǒng)的處方篩選與體外評價［J］.藥學(xué)學(xué)報，2008，43(4):415-420.

［3］欽富華，胡巧紅，梁文權(quán)，等.水飛薊素自微乳化膠囊的制備及大鼠體內(nèi)藥動學(xué)［J］.中國藥學(xué)雜志，2007，42(20):1551-1555.

［4］Gershanik T，Benita S.Self-dispersing lipid formulations for improving oral absorption of lipophilic drugs［J］.Eur J Pharm Biopharm，2000，50(2):179-188.

［5］Gershanik T，Benita S.Self-dispersing lipid formulations for improving oral absorption of lipophilic drugs［J］.Eur J Pharm Biopharm，2000，50:179-188.

［6］謝 燕，榮 蓉，楊 峻，等.醋柳黃酮自微乳制劑制備工藝的研究［J］.中國中藥雜志，2009，34(1):43-46.

［7］崔升淼，趙春順，何仲貴.葛根黃酮自微乳化軟膠囊的制備和溶出度的考察［J］.中成藥，2007，29(7):993-996.