王 蕾， 孫寶珍， 呂 楠， 趙 晨， 種影影， 陳衛(wèi)平

(1.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津300020;2.天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠，天津300457)

“體外培育牛黃”(亦稱為“工程牛黃”)，是以仿生學(xué)方法模擬膽紅素鈣結(jié)石在體內(nèi)形成的生化過程和條件，應(yīng)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)在體外牛膽囊膽汁內(nèi)培育的牛膽紅素鈣結(jié)石。本實(shí)驗(yàn)旨在將原牛黃降壓丸中的人工牛黃替換為工程牛黃，觀察和比較含人工黃與不同含量工程黃之牛黃降壓丸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響，為工程牛黃替代人工牛黃提供藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，♂性，體重260～280 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2005－0002。

大鼠用普通全價(jià)顆粒飼料Ⅱ號(hào)，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn)(京動(dòng)許字(2000)第015號(hào))。

標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào) SYXK(津)2005－0001。

1.2 試驗(yàn)藥物

1.2.1 人工黃牛黃降壓丸(CBA－1)，棕黃色粉末，由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供。

1.2.2 工程黃牛黃降壓丸(CBA－2)，棕黃色粉末，處方所含牛黃為工程牛黃，其含量分別為原牛黃降壓丸中人工牛黃含量的80%、60%、30%、10%4種。由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供。

1.2.3 馬來酸依那普利片(陽性對(duì)照品)，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào):07112301。

1.3 儀器與設(shè)備

ALC－NIBP無創(chuàng)血壓測(cè)定分析系統(tǒng)，上海奧爾科特生物科技有限公司產(chǎn)品;恒溫實(shí)驗(yàn)箱，上海奧爾科特生物科技有限公司產(chǎn)品。

2 試驗(yàn)方法

2.1 分組與給藥

試驗(yàn)開始前一周，將SHR放入無創(chuàng)血壓測(cè)定分析系統(tǒng)固定器適應(yīng)性測(cè)定血壓1周，每只大鼠至少測(cè)定3次，選擇3次血壓差值不超過±10%的大鼠為合格動(dòng)物。按照大鼠3次收縮壓平均值隨機(jī)分為7組，分別為模型對(duì)照組、80%ICCB組、60%ICCB 組、30%ICCB 組、10%ICCB 組、CBA－1組、依那普利陽性對(duì)照組。各牛黃降壓丸組給藥量為0.88 g/kg，約為臨床人用劑量的40倍，依那普利給藥量為10 mg/kg，為人臨床常用劑量的30倍，均灌胃給藥，模型對(duì)照組灌胃蒸餾水，體積均為10 mL/kg。

2.2 測(cè)定方法

給藥前測(cè)定SHR基礎(chǔ)血壓和心率，然后各組灌胃相應(yīng)藥物，測(cè)定給藥后1 h、2 h、3 h、5 h血壓值，計(jì)算血壓變化率=(藥后血壓－藥前血壓)×100%/藥前血壓。

2.3 統(tǒng)計(jì)處理

所得數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件方差分析及t檢驗(yàn)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。

3 試驗(yàn)結(jié)果

與模型對(duì)照組比較，各給藥組在藥后1h收縮壓即開始下降，以80%ICCB下降最明顯，降壓幅度14.96%，至藥后5h作用持續(xù)。60%、30%、10%ICCB組血壓顯著降低的起效點(diǎn)為藥后2h。CBA－1組只可見降低收縮壓的趨勢(shì)(P＞0.05);依那普利組降壓起效時(shí)間在藥后2 h，作用強(qiáng)于80%ICCB組，持續(xù)至藥后5 h。見表1。

在降低收縮壓的同時(shí)，80%、60%、30%ICCB組亦呈現(xiàn)降低舒張壓作用，其作用程度與所含ICCB比例呈正相關(guān)，見表2。

與模型對(duì)照組比較各給藥組均未見對(duì)心率有顯著性影響。

表1 不同配比之牛黃降壓丸樣品對(duì)SHR收縮壓(SBP)的影響(±s)(1 mmHg=0.133.3 kPa)

表1 不同配比之牛黃降壓丸樣品對(duì)SHR收縮壓(SBP)的影響(±s)(1 mmHg=0.133.3 kPa)

與模型對(duì)照組比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

66.33±18.78 167.92±18.69 80%ICCB0.88 g/kg 10 186.58±6.06 158.47±11.88▲ 158.45±26.86▲ 147.13±13.20▲ 139.25±19.24▲▲60%ICCB0.88 g/kg 10 181.84±10.79 156.19±24.32▲ 157.95±29.31▲ 145.86±21.32▲ 163.21±26.69 30%ICCB0.88 g/kg 10 180.03±8.15 163.66±22.46 159.79±18.56▲▲ 154.68±11.86 158.20±18.99 10%ICCB0.88 g/kg 10 182.67±9.08 166.61±18.56 159.47±31.04▲ 158.53±31.45 154.78±15.40 CBA－1 0.88 g/kg 10 179.01±10.74 159.07±12.61▲ 166.94±26.65 160.24±22.05 158.64±23.49依那普利10 mg/kg 10 181.56±10.50 173.58±22.59 146.43±28.46▲▲ 142.77±19.76 140.99±27.78 1 h 2 h 3 h 5 h模型對(duì)照組 10 183.24±10.16 173.25±15.34 182.18±10.76 1組別 n 各時(shí)間點(diǎn)收縮壓數(shù)值/mmHg藥前▲

表2 不同配比之牛黃降壓丸樣品對(duì)SHR舒張壓(DBP)的影響(±s)

表2 不同配比之牛黃降壓丸樣品對(duì)SHR舒張壓(DBP)的影響(±s)

與模型對(duì)照組比，▲P＜0.05。

22.94±15.16 123.76±18.43 80%ICCB 0.88 g/kg 10 138.46±6.57 118.99±14.01 116.86±21.32▲ 113.23±14.62 105.69±19.18▲60%ICCB 0.88 g/kg 10 130.60±10.13 124.04±20.09 119.04±20.68 106.41±19.17▲ 126.11±16.25 30%ICCB 0.88 g/kg 10 123.66±18.31 127.97±18.13 118.87±15.58▲ 116.60±9.97 121.43±16.53 10%ICCB 0.88 g/kg 10 136.64±10.24 125.68±16.72 121.10±24.41 113.85±23.05 120.31±11.41 CBA－1 0.88 g/kg 10 133.92±8.29 117.11±14.07 124.90±20.40 119.73±16.16 120.81±16.53依那普利10 mg/kg 10 133.59±9.22 130.81±18.92 109.85±25.89▲1 h 2 h 3 h 5 h模型對(duì)照組 10 137.11±10.53 128.98±12.25 134.47±12.47 1組別 n 各時(shí)間點(diǎn)舒張壓數(shù)值/mmHg藥前115.94±15.75 108.22±22.54

4 討論

牛黃降壓丸是達(dá)仁堂獨(dú)家研制于1979年投入生產(chǎn)的純中藥制劑，通過多年的臨床應(yīng)用已成為我國中藥降壓藥的首選，其主要成分有牛黃、羚羊角、珍珠、水牛角濃縮粉、白芍、決明子、川芎、黃芩素、郁金、冰片、甘松、薄荷等。有清心化痰、平肝安神功效。用于心肝火旺、痰熱壅盛所致的頭暈?zāi)垦?、頭痛失眠、煩躁不安;高血壓病見上述證候者。

其主藥牛黃是一味名貴中藥材，牛黃即干燥的牛膽結(jié)石。根據(jù)我國相關(guān)部門頒布的藥品標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)，用牛黃做原料的國家標(biāo)準(zhǔn)藥品共有600多個(gè)品種，市場(chǎng)需求量很大。但我國天然牛黃產(chǎn)量低、資源匱乏，過去主要依賴進(jìn)口。國家藥監(jiān)局分別于2000、2001、2002年相繼發(fā)文，禁止使用進(jìn)口牛源性材料制備中成藥，如天然牛黃等等，加劇了天然牛黃的供需矛盾。正因?yàn)樘烊慌｜S稀缺昂貴，很多應(yīng)該用天然牛黃投料的中成藥改用人工牛黃，或幾種牛黃摻兌使用，使牛黃應(yīng)用產(chǎn)生混亂，急需對(duì)牛黃市場(chǎng)進(jìn)行規(guī)范。

體外培育牛黃是模擬體內(nèi)膽結(jié)石形成的原理和生物化學(xué)過程，運(yùn)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)，在體外培育的牛膽紅素鈣結(jié)石。指紋圖譜研究結(jié)果表明體外培育牛黃與天然牛黃成分相近，且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更穩(wěn)定［1］。已有藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，體外培育牛黃有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗肝纖維化、耐缺氧、清除自由基、保護(hù)心腦細(xì)胞、誘導(dǎo)人肝母細(xì)胞瘤 HepG2細(xì)胞凋亡等作用［2－6］。本實(shí)驗(yàn)旨在將原牛黃降壓丸中的人工牛黃替換為不同含量的體外培育牛黃，觀察和比較不同含量工程黃與人工黃之牛黃降壓丸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用，并探討其不同配比與療效的關(guān)系。

結(jié)果表明，用體外培育牛黃部分替代人工牛黃之牛黃降壓丸具有明顯降壓作用，且其降低收縮壓的起效時(shí)間及降壓幅度均與ICCB含量有密切關(guān)系，含量高則起效時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長、降壓幅度明顯。至于將工程牛黃完全替代人工牛黃，其牛黃降壓丸的降壓活性是否更加顯著，有待下一步研究。

［1］丁 崗，盛龍生，李明慧，等.體外培育牛黃與天然牛黃指紋圖譜的比較研究［J］.中國天然藥物，2004，5:309－312.

［2］張韶輝，張延琳，王文權(quán)，等.體外培育牛黃鎮(zhèn)痛作用的電生理機(jī)制［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，8:1073－1077.

［3］汪世元，陳孝平，蔡紅嬌，等.體外培育牛黃誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005，6:754.

［4］梁志鵬，楊 鎮(zhèn)，蔡紅嬌，等.體外培育牛黃制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性血吸蟲病家兔肝纖維化組織細(xì)胞外基質(zhì)的影響［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2005，8:1044－1045.

［5］蔡紅嬌，汪世元，劉烈剛，等.體外培育牛黃耐缺氧和清除自由基作用的研究［J］.中藥藥理與臨床，2003，6:20－22.

［6］杜佐華，蔡紅嬌，楊榮光，等.體外培育牛黃抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，1996，1:450－453.