劉 爽，趙麗麗，孫學(xué)強(qiáng)，姚火春

（1.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266032；2.農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 南京 農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇 南京 210095）

豬鏈球菌（Streptococcus suis type 2，SS2）已經(jīng)成為危害養(yǎng)豬生產(chǎn)及人類(lèi)健康的重要人畜共患病。可引起豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及猝死等；致人敗血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎，嚴(yán)重的致人鏈球菌毒素休克綜合征而死亡。1998年7月江蘇南通某地豬群暴發(fā)豬鏈球菌2型，同時(shí)導(dǎo)致21人感染發(fā)病和14人死亡。2005年7月，四川資陽(yáng)等地農(nóng)戶豬急性死亡，隨后人群發(fā)生不明疫病，致使204人感染發(fā)病、38人死亡，經(jīng)農(nóng)業(yè)部專(zhuān)家組診斷，病原也為豬鏈球菌2型。豬鏈球菌2型在我國(guó)的流行日趨嚴(yán)重，威脅公共衛(wèi)生安全，使得豬鏈球菌感染的相關(guān)研究受到高度關(guān)注。

1 病原學(xué)及流行病學(xué)

根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，SS可分為35個(gè)血清型（1～34型及1/2型）。SS2按蘭氏分群為R群，菌落小，灰白透明，稍黏，在液體中培養(yǎng)才呈短鏈狀。血平板培養(yǎng)一般先表現(xiàn)為α溶血，延時(shí)培養(yǎng)后則變?yōu)棣氯苎?，或者菌落周?chē)灰?jiàn)溶血，刮去菌落則可見(jiàn)α或β溶血。在綿羊血平板呈α溶血，馬血平板則為β溶血。

豬鏈球菌病的流行病學(xué)非常復(fù)雜，許多健康豬攜帶SS2但不出現(xiàn)典型的臨床癥狀。SS2還分為高致病株，中等毒力株和弱毒力株。病豬和病尸是豬鏈球菌主要的傳染源，其次是病愈帶菌豬和隱性感染豬，李小軍等從送檢的非法屠宰的豬肉中檢出豬鏈球菌2型。病豬與健康豬接觸，或經(jīng)由病豬排泄物等引起豬發(fā)病。在自然情況下，鏈球菌病多半通過(guò)消化道、呼吸道、受損傷的皮膚及粘膜感染，病原菌很快能通過(guò)粘膜和組織的屏障而侵入淋巴道與血液，隨即隨血流播散全身。通常從口腔或鼻腔侵入機(jī)體，而后在扁桃體定居，活豬扁桃體帶菌率變化較大（0%～100%）。表現(xiàn)亞臨床癥狀病豬的鼻腔可分離出SS2，成為傳染源。Clifton-Hadley等報(bào)道，健康帶菌種豬、斷奶豬引入一個(gè)未感染的豬群后，接受豬群的斷奶豬及育肥豬通常會(huì)暴發(fā)本病，母豬經(jīng)呼吸道可將該菌傳給哺乳仔豬。Enright證實(shí)，蒼蠅能在豬場(chǎng)內(nèi)或不同場(chǎng)間傳播本病，其它動(dòng)物或鳥(niǎo)類(lèi)作為傳染源或傳播媒介的重要性仍有待證實(shí)。SS2垂直傳播的機(jī)制仍不十分清楚，Robertson等發(fā)現(xiàn)，母豬生殖道內(nèi)存在豬鏈球菌，分娩過(guò)程中仔豬可能被感染，另一方面，目前仍沒(méi)有證據(jù)表明，公豬生殖器攜帶本菌。

自1999年姚火春等報(bào)道豬鏈球菌2型起，廣東、江蘇、浙江、上海、四川、福建、河南、河北、安徽、山東、香港及東北地區(qū)等均有關(guān)于豬鏈球菌2型的分離鑒定或者診斷報(bào)道，引起了科研領(lǐng)域及社會(huì)各階層的普遍關(guān)注。

2 診斷

豬鏈球菌2型引致的豬鏈球菌病的診斷，在臨床上主要通過(guò)腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、支氣管肺炎、多發(fā)性漿膜炎、腦炎、流產(chǎn)、敗血癥、膿腫及猝死等癥狀進(jìn)行初步判定，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的細(xì)菌分離、鏡檢、生化鑒定及單因子血清進(jìn)行凝集分型。當(dāng)然，分離病原菌及動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)是最為可靠的診斷方法，但是目前我國(guó)的流行日趨嚴(yán)重且血清型種類(lèi)繁多，致病機(jī)理仍未明確，建立快速、敏感、特異的檢測(cè)方法及制備高效的疫苗是防制該病的當(dāng)務(wù)之急。從快速便捷的角度上看，PCR方法不失為一種快速診斷的捷徑，目前已報(bào)道的多種PCR檢測(cè)方法。

Okwumabua等建立一種PCR方法，引物對(duì)根據(jù)SS2的谷氨酸脫氫酶基因（gdh）設(shè)計(jì)，能有效擴(kuò)增所有測(cè)試的306株SS臨床分離株（豬305；人1）的DNA，產(chǎn)生與設(shè)計(jì)相同的688 bp片段。測(cè)試的分離株分離自不同器官、地理來(lái)源不同的所有SS血清型。引物用于其他細(xì)菌DNA的檢測(cè)時(shí)，未能檢測(cè)到產(chǎn)物，說(shuō)明其檢測(cè)SS特異。用gdh基因引物和SS莢膜合成基因的引物建立多重PCR。可分別檢測(cè)屬于 1/2、1、2、7 和 9 的血清型菌株。倪艷秀等建立sly、epf、mrp的檢測(cè)方法；孫理云等建立了檢測(cè)fbps的PCR方法且發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)SS2分離株與國(guó)外SS2分離株同源性99%以上。李干武建立了檢測(cè)orf2的PCR方法。

3 防制

Holt等及Quessy等用無(wú)毒株作為活疫苗可使豬得到保護(hù)，但不能清除帶菌豬或預(yù)防新的帶菌豬出現(xiàn)。Kebede等研制豬鏈球菌2型的溫度敏感缺失株疫苗，只獲得了同源保護(hù)。Elliott等用豬鏈球菌2型的純化莢膜免疫豬，結(jié)果不能抵抗全菌的攻擊。Jacobs等用豬鏈球菌2型的溶血素，能完全保護(hù)小鼠抵抗致死性豬鏈球菌2型菌株的攻擊，同樣用純化的溶血素給豬靜脈注射免疫，能很好的保護(hù)豬抵抗致死性豬鏈球菌2型菌株的攻擊。Quessy等證實(shí)用EF蛋白免疫可抵抗該菌異源株的攻擊。Blecha等評(píng)價(jià)了白細(xì)胞介素-1β與白細(xì)胞介素-2重組體對(duì)豬鏈球菌全菌疫苗保護(hù)性的影響。

國(guó)內(nèi)豬鏈球菌2型研究和應(yīng)用相對(duì)比較成功的滅活疫苗是源于姚火春等在1998年分離自江蘇海安的HA9801株的全菌滅活疫苗，王建等于2001年報(bào)道對(duì)上海地區(qū)豬鏈球菌病的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果證明在上海地區(qū)的豬鏈球菌病的病原以C群鏈球菌為主，同時(shí)存在較多比例的豬鏈球菌2型，并以馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株和豬鏈球菌2型HA9801株作為生產(chǎn)菌株，制備鋁膠滅活疫苗，并對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，免疫豬后測(cè)定了抗體消長(zhǎng)規(guī)律，最后建立了仔豬感染動(dòng)物模型并進(jìn)行了免疫保護(hù)試驗(yàn)，分別用2株疫苗強(qiáng)毒株攻擊，結(jié)果對(duì)豬鏈球菌2型保護(hù)率為 100%（10/10），對(duì) C群的 ATCC 35246的保護(hù)率為90%，在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)用5批疫苗免疫妊娠母豬、保育豬后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)哺乳仔豬的平均保護(hù)率達(dá)到88.09%（SS2）和79.06%（SeZ），對(duì)保育豬的平均保護(hù)率達(dá)到 90%（SS2）和 76.7%（SeZ），游啟有等對(duì)豬鏈球菌2型滅活疫苗在2005—2008年全國(guó)十多個(gè)地區(qū)使用的調(diào)查證明該疫苗安全性好，副作用小，免疫效果可靠。豬鏈球菌滅活疫苗（馬鏈球菌獸疫亞種+豬鏈球菌2型）于2006年獲得農(nóng)業(yè)部二類(lèi)新獸藥證書(shū)。豬鏈球菌滅活疫苗（馬鏈球菌獸疫亞種+豬鏈球菌2型）現(xiàn)已在全國(guó)范圍得到廣泛應(yīng)用和認(rèn)可。

基因工程亞單位疫苗（subunit vaccine）又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗是只含有病原體的一種或幾種抗原，而不含有病原體的其他遺傳信息。原則上講，用這些疫苗接種動(dòng)物，都可使之獲得抗性而免受病原體的感染。亞單位疫苗不含有感染性組分，因而無(wú)須滅活，也無(wú)致病性。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的日漸成熟和豬鏈球菌2型毒力基因以及保護(hù)性抗原的逐漸發(fā)現(xiàn)，國(guó)內(nèi)開(kāi)展表達(dá)SS2亞單位的研究工作及報(bào)道也日漸增多，所表達(dá)亞單位主要有MRP又稱M蛋白、EF（Extra-cellular protein factor）、溶血素（Suilysin，SLY）、莢膜多糖以及新發(fā)現(xiàn)的保護(hù)性抗原纖連蛋白/血纖蛋白原、次黃嘌呤核苷酸脫氫酶、谷氨酸脫氫酶、烯醇化酶（Enolase）、溶血素樣蛋白、組氨酸三聚體蛋白。大部分SS2亞單位研究集中于基因的克隆、表達(dá)及反應(yīng)原性的鑒定，少數(shù)報(bào)道進(jìn)行了動(dòng)物模型免疫及攻毒實(shí)驗(yàn)，極少數(shù)報(bào)道進(jìn)行了豬的免疫保護(hù)試驗(yàn)，在進(jìn)行了動(dòng)物免疫保護(hù)試驗(yàn)的報(bào)道中有的實(shí)驗(yàn)中并未設(shè)立全菌滅活疫苗對(duì)照組，在為數(shù)不多的設(shè)計(jì)有全菌滅活苗對(duì)照組的報(bào)道中，無(wú)論是單獨(dú)表達(dá)或是多個(gè)亞單位疫苗串聯(lián)表達(dá)的相對(duì)保護(hù)率均低于全菌滅活疫苗免疫組。

（略）