彭 禹 李文春 賽春梅 劉文亮

（1、黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2007級(jí)在職碩士研究生課程班，黑龍江 哈爾濱，150040 2、哈藥集團(tuán)中藥有限公司研發(fā)中心，黑龍江 哈爾濱150078）

骨筋丸膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第十三冊(cè)[1]，由血竭、三七、秦艽、白芍、馬錢子、乳香、沒藥、獨(dú)活、牛膝等十四味藥組成，具活血化瘀，舒筋通絡(luò)，祛風(fēng)止痛的功效。其中血竭為進(jìn)口藥，并且價(jià)格昂貴為保證藥品質(zhì)量，避免廠商少投或不投血竭，筆者建立了血竭的含量測(cè)定指標(biāo)，該方法操作簡單，靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

儀器：Waters515-2487高效液相色譜儀；色譜工作站：N2000（浙江大學(xué)）；TU-1901型 紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；KQ500B型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；對(duì)照品：血竭素高氯酸鹽110811-200203（中國藥品生物制品檢定所提供）；骨筋丸膠囊(哈藥集團(tuán)三精制藥諾捷有限責(zé)任公司)；乙腈為色譜純，水為純化水；其他試劑為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Hypersil BDS 5μm.4.6mm×150mm；流動(dòng)相：乙腈-0.05 moloL-1磷酸二氫鈉溶液(40:60)，流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長：440nm；柱溫：室溫;進(jìn)樣量:10μL；理論板數(shù)：按血竭素高氯酸鹽峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品10.0 mg于100mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度;搖勻，精密量取4 mL至10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL中含血竭素高氯酸鹽40.0μg，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備[2]

取內(nèi)容物約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加3%磷酸甲醇溶液50ml，稱重，超聲處理30分鐘，放置至室溫，加3%磷酸甲醇溶液補(bǔ)至原重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 最大吸收波長的確定

血竭素高氯酸鹽（3%磷酸甲醇溶液）的紫外掃描圖譜顯示，其最大吸收峰位于440.1nm處，因此將檢測(cè)波長定為440nm。見圖1

按處方比例，制成不含血竭的陰性樣品，同法制成陰性樣品的供試品溶液。

2.6 干擾試驗(yàn)

取對(duì)照品、供試品及缺血竭的陰性對(duì)照樣品，各進(jìn)樣10μL測(cè)定。結(jié)果血竭素峰與其它組分峰分離度良好，缺血竭的樣品對(duì)測(cè)定無干擾，見圖。

2.7 線性關(guān)系考察

精密量取血竭素高氯酸鹽對(duì)照品溶液(濃度:0.080mgomL-1)，1、2、4、6、9mL于10mL量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液至刻度，搖勻。進(jìn)樣10?L測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=2172953.706X+38020.767 γ=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明血竭素高氯酸鹽在0.08~072?g范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.8 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液(濃度：40.0μg·mL-1)10μL，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣5次，用峰面積計(jì)算均值與SD值，結(jié)果RSD=1.60%(n=5)，說明精密度符合含量測(cè)定要求。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品6份(批號(hào)：071001)，每份約1.5 g，精密稱定，照2.3項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣10?L測(cè)定含量，血竭素高氯酸鹽含量為0.768mgog-1，RSD為1.24%(n=6)，說明精密度符合含量測(cè)定要求。

2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品(批號(hào):071001)，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10?L測(cè)定峰面積，用峰面積計(jì)算均值與SD值，結(jié)果血竭素室溫條件下，棕色瓶中密閉保存10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.93%(n=6)。

2.11 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量 (批號(hào):071001，0.768mgog-1)的樣品0.75 g，分別精密加入血竭素高氯酸鹽0.5mg，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定，結(jié)果見表1

?

2.12 樣品的測(cè)定

取樣品照2.3項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣10μL測(cè)定，照外標(biāo)法計(jì)算樣品中血竭素高氯酸鹽的含量，并按公式計(jì)算成血竭素的含量。血竭素重量＝血竭素高氯酸鹽重量/1.377。結(jié)果見表2

?

3 討論

3.1 骨筋丸膠囊臨床主要應(yīng)用［3］風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等的抗炎鎮(zhèn)痛及由各種原因引起的骨質(zhì)增生、關(guān)節(jié)和神經(jīng)部位的疼痛。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，與風(fēng)寒濕邪、勞損、外傷有關(guān)，還與年老體衰、元?dú)獠蛔忝芮邢嚓P(guān)，內(nèi)外相合，致氣血痹阻，經(jīng)脈失養(yǎng)，久病入絡(luò)而引發(fā)。骨筋丸膠囊由血竭、三七、乳香、沒藥、制馬錢、延胡索、秦艽、紅花、獨(dú)活、牛膝等組成，有活血化瘀、舒筋通絡(luò)、祛風(fēng)止痛的作用。骨筋丸以三七為君藥，對(duì)改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)椎間的穩(wěn)定性有重要作用；以活血化瘀、行氣止痛的藥為臣佐藥；以牛膝引諸藥入絡(luò)為使藥。方中三七、延胡索、牛膝、血竭活血化瘀，改善血液循環(huán)障礙，馬錢、獨(dú)活、桂枝、秦艽祛風(fēng)濕，溫經(jīng)，通絡(luò)止痛，消除神經(jīng)根水腫，從而解除神經(jīng)受壓刺激癥狀，達(dá)到臨床治愈或改善。該藥配伍恰當(dāng)，使氣血旺行、脈絡(luò)通暢、行氣止痛，達(dá)到了標(biāo)本同治，內(nèi)外因兼顧。

3.2 血竭［4］為傳統(tǒng)中藥，味甘、咸；性溫、平；歸心、肝經(jīng)；具活血化瘀、消腫止痛、收斂止血，生肌斂瘡、補(bǔ)血之功效，常用于內(nèi)外諸科及婦科的各種血癥。如：跌打損傷、瘀血、出血、癰疽潰瘍、瘡面久不愈合、胃腸炎癥、肢體麻木、閉經(jīng)痛經(jīng)、血瘀、瘀阻等病癥。血竭歷來是許多中醫(yī)古方和經(jīng)驗(yàn)方的重要組成藥材，被喻為“和血之圣藥”（《本草綱目》），近代主要為來自印度尼西亞和馬來西亞產(chǎn)的蘇門達(dá)臘血竭。建立其貴細(xì)藥血竭的含量指標(biāo)對(duì)保證臨床療效有重要意義。

3.3 在供試品制備過程中，作者通過熱回流提取與超聲波提取的對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血竭素的熱穩(wěn)定性較差，回流提取的含量較超聲波提取含量少約30%，參照藥典血竭的含量測(cè)定供試品制備方法，采用3%磷酸甲醇提取，該供試品溶液在棕色玻璃容器中，室溫放置10小時(shí)穩(wěn)定性良好。

3.4 通過文獻(xiàn)報(bào)道，骨筋丸膠囊的含量研究報(bào)道較多，其中測(cè)芍藥苷、人參皂苷Rg1、龍膽苦苷、士的寧、馬錢子堿等，且各廠家執(zhí)行各自的注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，執(zhí)行含量標(biāo)準(zhǔn)也各不相同，致使有的廠家不控制血竭投料，或僅按鑒別水平投料致使市售藥品質(zhì)量偏差較大，不能保證臨床用藥的有效性與安全性，故建議各廠家統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)［S］.1997：139

[2]國家藥典委員會(huì).中國藥典2005年版一部［S］.化學(xué)工業(yè)出版社，北京，2005：296

[3]賀芬，李艷春.骨筋丸片治療頸椎病療效觀察［J］.美國中華臨床醫(yī)學(xué)雜志，2006，8（3）:329-330.

[4]鄭慶安，陳江，張穎君等.著名民間藥物血竭的起源與傳播［J］.云南植物研究，2003，增刊16：102-107.