祖立闖,王金良,李 嬌,沈志強(qiáng),*

(1.山東綠都生物科技有限公司,山東濱州 256600;2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東濱州 256600)

膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物疫病診斷上的應(yīng)用*

祖立闖1,王金良2,李 嬌1,沈志強(qiáng)1,2*

(1.山東綠都生物科技有限公司,山東濱州 256600;2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東濱州 256600)

膠體金免疫層析技術(shù)是在膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)和層析分析技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型免疫學(xué)診斷技術(shù)。因其具有簡(jiǎn)便、快速、無(wú)污染、不需特殊儀器、特異性強(qiáng)、敏感性高、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn),成為當(dāng)前廣泛采用的動(dòng)物疫病免疫學(xué)診斷技術(shù)。膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物病毒病、細(xì)菌病、寄生蟲(chóng)病及水產(chǎn)動(dòng)物疫病診斷方面都有非常廣泛的應(yīng)用,在未來(lái)的動(dòng)物疫病診斷中將發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。論文就膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物疫病診斷上的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

膠體金免疫層析;動(dòng)物疫病;診斷

自1971年Faulk WP和Taylor G M用兔抗沙門(mén)菌抗血清與膠體金顆粒結(jié)合,制備成金標(biāo)抗體檢測(cè)細(xì)菌表面抗原的分布[1],將膠體金首次引入免疫化學(xué)后,膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)(immunogold labelling techique)成為繼熒光素標(biāo)記、放射性同位素標(biāo)記和酶標(biāo)記之后發(fā)展起來(lái)的一種新型的固相免疫標(biāo)記技術(shù)[2]。30多年來(lái),膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)得到不斷的發(fā)展和成熟,在醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧業(yè)、環(huán)保及食品安全領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。該技術(shù)在動(dòng)物疫病診斷方面的應(yīng)用雖然起步較晚,但發(fā)展迅速。其中,膠體金免疫層析技術(shù)(gold immunochromatography assay,GICA)由于具有簡(jiǎn)便、快速、特異、靈敏等優(yōu)點(diǎn),已成為當(dāng)前動(dòng)物疫病檢測(cè)中最簡(jiǎn)單、快速、敏感的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一,特別適合于廣大基層獸醫(yī)人員以及大批量檢測(cè)和大面積普查等,有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景[3]。本文就膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)在動(dòng)物疫病快速檢測(cè)上的應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展前景做一簡(jiǎn)要綜述。

1 膠體金免疫層析技術(shù)的原理

膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。它主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒,當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí),肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn),因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中[4]。免疫層析(immunochromatography,IC)技術(shù)是出現(xiàn)于20世紀(jì)80年代初期的一種將免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)單、快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)[5]。膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)是一種將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫層析技術(shù)等多種方法有機(jī)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)[3]。它的原理是以條狀纖維層析材料為固相,通過(guò)毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上泳動(dòng),并同時(shí)使樣品中的待測(cè)物與層析材料上針對(duì)待測(cè)物的受體(抗原或抗體)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng),層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測(cè)帶),運(yùn)用可目測(cè)的標(biāo)記物(膠體金)而得到直觀的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象(顯色),而游離標(biāo)記物則越過(guò)檢測(cè)帶,與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離。膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)就是利用膠體金本身的顯色特點(diǎn)結(jié)合免疫層析技術(shù)而達(dá)到檢測(cè)的目的,層析時(shí)使用膠體金這種標(biāo)記物,標(biāo)記物與待測(cè)物的絡(luò)合物被相應(yīng)的配體捕獲而濃集顯色,以纖維膜上顯色帶的有無(wú)進(jìn)行快速檢測(cè)[6]。

2 膠體金免疫層析技術(shù)的特點(diǎn)

膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)在診斷技術(shù)中的迅速崛起主要是因?yàn)榕c其他檢測(cè)方法相比較,存在著多方面的臨床檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)。

2.1 檢測(cè)面廣

膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)既可用于檢測(cè)抗原,也可用于檢測(cè)抗體。廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疫病快速診斷和獸藥殘留快速檢測(cè)等領(lǐng)域。

2.2 操作方便

具有操作步驟簡(jiǎn)單、無(wú)需特殊儀器、樣本無(wú)需特殊處理、檢測(cè)結(jié)果可直接用肉眼判讀等特點(diǎn),對(duì)操作人員無(wú)特殊技能要求。

2.3 快速

一般只要5 min～10 min就會(huì)出檢測(cè)結(jié)果,相比其他方法,如ELISA 需1 h～2 h,PCR需3 h～4 h,大大的縮短了檢測(cè)時(shí)間,這是目前其他快速檢測(cè)方法所無(wú)法達(dá)到的。

2.4 靈敏

采用高質(zhì)量的單克隆抗體,快速診斷分析檢測(cè)下限可以達(dá)到10 pg。利用金顆粒可催化銀離子還原成金屬銀這一原理,采用銀顯影劑增強(qiáng)金顆粒的可見(jiàn)性,大大提高了測(cè)定的靈敏度,可以超過(guò)ELISA的靈敏度水平。

2.5 特異

膠體金大多用于單克隆抗體標(biāo)記,對(duì)組織細(xì)胞的非特異性吸附作用小,故具有較高的特異性。

2.6 方便

由于膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)是一物理結(jié)合過(guò)程,結(jié)合牢固,很少引起蛋白質(zhì)活性改變,所以試劑非常穩(wěn)定,不受溫度等外界因素影響,可隨身攜帶,隨時(shí)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果也可長(zhǎng)期保存。

2.7 經(jīng)濟(jì)實(shí)用

因?yàn)榫哂小懊庖邼饪s”效應(yīng),檢測(cè)所需試劑和樣本量很少,樣本量可低至100 μ L,再加上無(wú)需任何儀器和設(shè)備,并且可單份標(biāo)本檢測(cè),使檢測(cè)成本大幅下降。

2.8 安全環(huán)保

因?yàn)闆](méi)有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質(zhì)參與,所以既不會(huì)損害操作者健康,也不會(huì)污染環(huán)境,具有放射性同位索或酶標(biāo)等檢測(cè)方法所無(wú)法比擬的安全性。

3 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物病毒病檢測(cè)中的應(yīng)用

Oh J S等[7]建立了檢測(cè)犬瘟熱病毒抗體的膠體金免疫層析方法,通過(guò)檢測(cè)臨床的386份樣品,得出GICA相對(duì)于血凝抑制試驗(yàn)(HI)的敏感性為97.1%,特異性為76.6%。Joon Tam Y等[8]研制了檢測(cè)偽狂犬病病毒抗原的膠體金試紙條,該試紙條檢測(cè)時(shí)只需25 μ L樣品,5 min即可出檢測(cè)結(jié)果,與常見(jiàn)豬病不發(fā)生交叉反應(yīng)。Peng D等[9]在家禽禽流感病毒檢測(cè)中,對(duì)膠體金免疫層析試紙條、血凝抑制試驗(yàn)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)進(jìn)行了比較,得出膠體金免疫層析試紙條具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn),是家禽流感病毒快速檢測(cè)的最有效技術(shù)。Kameyama K等[10]建立了快速檢測(cè)BVDV抗原的膠體金免疫層析試紙條,該方法與病毒分離鑒定的敏感性和特異性分別為100%和97.2%,為BVDV的快速診斷提供了一種有效的檢測(cè)方法。Cui S J等[11]建立了檢測(cè)H5亞型禽流感病毒抗體膠體金試紙條,將該試紙條與HI相比較,敏感性和特異性分別為88.8%和97.6%,并且認(rèn)為該方法簡(jiǎn)便快速、不需儀器設(shè)備,必將在現(xiàn)地H5N1亞型禽流感病毒抗體的檢測(cè)中得到廣泛的應(yīng)用。徐一鳴等[12]用親和層析法純化的禽流感病毒(AIV)H3和H7亞型單克隆抗體包被膠體金,依次將純化的馬抗H3和H7亞型AIV多克隆抗體和山羊抗鼠二抗分別包被于硝酸纖維素(NC)膜上作為檢測(cè)線和質(zhì)控線,建立了鑒別檢測(cè)H3和H7亞型禽流感病毒膠體金免疫層析試紙條,用該試紙條對(duì)H3和H7亞型AIV標(biāo)準(zhǔn)抗原、畢赤酵母真核表達(dá)蛋白和已知樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果與 HA、AC-ElISA和RT-PCR方法相符。彭伏虎等[13-14]在建立H9亞型禽流感病毒膠體金免疫層析檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上組裝成了試劑盒,試劑盒由試紙條、稀釋液、樣品管、塑料吸管、一次性手套及說(shuō)明書(shū)組成,對(duì)試劑盒的特異性、敏感性、保存期和重復(fù)性等進(jìn)行的測(cè)定表明,試劑盒在室溫可以保存6個(gè)月,4℃可以保存12個(gè)月,與HA試驗(yàn)相比特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、方便、快捷,能在10 min內(nèi)準(zhǔn)確檢測(cè)出樣品中是否含有H9亞型禽流感病毒,用該試劑盒對(duì)武漢市及周邊地區(qū)的雞場(chǎng)共抽檢498份樣品,經(jīng)病毒分離鑒定準(zhǔn)確率達(dá)到100%。徐葛林等[15]用膠體金標(biāo)記抗狂犬病病毒單抗建立的檢測(cè)狂犬病毒的膠體金免疫層析法,只與狂犬病毒抗原有特異性反應(yīng),與乙型腦炎病毒、正常小鼠腦組織等無(wú)交叉反應(yīng),檢測(cè)48份可疑狂犬病犬唾液樣品,同酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(EIA)的符合率為88.2%,該診斷試紙條非常適用于野外對(duì)動(dòng)物腦或唾液中的狂犬病病毒抗原的檢測(cè)。李希友等[16]用膠體金標(biāo)記新城疫病毒(NDV)抗原,兔抗NDV抗體和NDV抗原分別包被到NC膜的檢測(cè)線和質(zhì)控線上,研制出了半定量快速測(cè)定新城疫抗體的膠體金免疫層析試紙條。鄭鳴等[17]用膠體金分別標(biāo)記豬瘟強(qiáng)、弱毒抗原,應(yīng)用雙抗原夾心法于國(guó)內(nèi)首先建立了區(qū)分豬瘟強(qiáng)、弱毒抗體的膠體金免疫層析試紙條,該方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性好、能區(qū)分強(qiáng)弱毒感染,適合豬瘟的臨床診斷。蔣韜等[18]以純化的豚鼠抗O型FMDV多克隆抗體制備為金標(biāo)探針,兔抗O型FMDV多克隆抗體和羊抗豚鼠IgG分別標(biāo)記于硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)帶和質(zhì)控帶,研制了O型口蹄疫病毒免疫層析試紙條,靈敏度與特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示:試紙條最高可檢測(cè)到1∶256倍稀釋的O型標(biāo)準(zhǔn)鼠抗原,靈敏度略高于反向間接血凝試驗(yàn)。王中力等[19]標(biāo)記純化的犬細(xì)小病毒單克隆抗體建立了檢測(cè)犬細(xì)小病毒的膠體金免疫層析法,檢測(cè)收集到120份犬糞便樣品,其結(jié)果與HA結(jié)果相對(duì)比,HA效價(jià)在1∶40以上時(shí)試紙條均能檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果,與犬瘟熱病毒及犬傳染性肝炎病毒無(wú)交叉反應(yīng)。王慧杰等[20]引用膠體金標(biāo)記PCV-2重組Cap蛋白制備了檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型Cap抗體的膠體金快速診斷試紙條,試驗(yàn)結(jié)果表明該試紙條特異性高,能夠區(qū)分PCV-2的標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清,用該試紙?jiān)跈z測(cè)來(lái)自不同豬場(chǎng)的165份送檢血清,與間接免疫熒光符合率在 85%以上。國(guó)內(nèi),檢測(cè)豬藍(lán)耳病病毒抗體、牛白血病病毒抗體、動(dòng)物狂犬病毒抗體、新城疫病毒抗原、禽流感病毒抗原的免疫膠體金試紙條均已研制成功并申請(qǐng)了專(zhuān)利。

4 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物細(xì)菌病檢測(cè)中的應(yīng)用

Suzuki T等[21]通過(guò)對(duì)試紙條和PCR的比較,得出膠體金免疫層析方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、安全且同樣具有良好的特異性和敏感性。Soo P C等[22]建立了檢測(cè)結(jié)核分支桿菌的膠體金層析試紙條,臨床評(píng)價(jià)試驗(yàn)證實(shí),建立的膠體金免疫層析方法簡(jiǎn)便、快速、具有良好的特異性和敏感性、該診斷試紙條非常適用于野外及基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室使用。檀華等[23]將膠體金標(biāo)記葡萄球菌蛋白A,用類(lèi)鼻疽多糖抗原包被NC膜,組裝成免疫層析試紙條檢測(cè)類(lèi)鼻疽假單胞桿菌,用該試紙條和間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)了3份兔血清、16份豬血清和26份人血清標(biāo)本,試驗(yàn)表明,試紙條與間接血凝試驗(yàn)的結(jié)果一致,具有較好的特異性和敏感性。張書(shū)環(huán)等[24]建立的牛分支桿菌抗體膠體金快速檢測(cè)技術(shù),交叉試驗(yàn)證明該種試紙條不與牛的其他非相關(guān)疾病的陽(yáng)性血清反應(yīng),具有較高的特異性,進(jìn)行臨床樣品檢測(cè)時(shí),與牛分支桿菌分離培養(yǎng)的符合率為85.00%,與結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)的符合率為79.73%,與韓國(guó)試紙條的符合率為98.75%。朱明東等[25]所建立的診斷布魯菌病的膠體金免疫層析法采用不同血清的用量確定敏感性及特異性,得出GICA的敏感性和特異性分別達(dá)到91.3%和97.3%,認(rèn)為應(yīng)用GICA快速診斷牛布魯菌病具有敏感、特異、血清用量少、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),更適合于布魯菌病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查及現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。高成秀等[26]建立了大腸埃希菌O 157和Stx2毒素的雙抗體夾心免疫膠體金層析法,可以同時(shí)檢測(cè)大腸埃希菌O 157抗原和Stx2毒素,可在較短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)大腸埃希菌O 157并鑒定產(chǎn)Stx2的高致病性大腸埃希菌O 157,具有較高的特異性,在臨床中有較高的應(yīng)用價(jià)值。孫洋等[27]以腸出血性大腸埃希菌O 157單克隆抗體為標(biāo)記探針,以兔抗O 157多克隆抗體固定于硝酸纖維素膜作為捕獲抗體,利用雙抗夾心法,制成O 157膠體金免疫層析檢測(cè)試紙條,該試紙條僅與O 157反應(yīng),與其他受試菌株均不反應(yīng),該試紙條敏感性高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便、可用于現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的檢測(cè)。目前,國(guó)內(nèi)已經(jīng)有檢測(cè)動(dòng)物布魯菌病抗體、動(dòng)物布魯菌病抗原及豬鏈球菌2型抗原的免疫膠體金試紙條研制成功并申請(qǐng)了相關(guān)專(zhuān)利。

5 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物寄生蟲(chóng)病檢測(cè)中的應(yīng)用

何偉等[28]建立了簡(jiǎn)便、快速的膠體金試紙條檢測(cè)家畜血清中的抗血吸蟲(chóng)抗體,檢測(cè)了33份陽(yáng)性牛血清和50份陽(yáng)性豬血清,陽(yáng)性檢出率均為100%,檢測(cè)23份陰性牛血清和50份陰性豬血清,結(jié)果分別出現(xiàn)1份和3份陽(yáng)性反應(yīng),陰性符合率分別為95.7%和94.0%,檢測(cè)感染肝片形吸蟲(chóng)的牛和羊血清共計(jì)16份,有3份陽(yáng)性,交叉反應(yīng)率為18.8%,表明該方法敏感性高,特異性較強(qiáng)。王艷華等[29]用建立的檢測(cè)弓形蟲(chóng)抗體的免疫膠體金快速試紙條對(duì)動(dòng)物弓形蟲(chóng)病血清抗體進(jìn)行檢測(cè),并用弓形蟲(chóng)IHA診斷方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn),結(jié)果表明,金標(biāo)試紙的敏感度高于IHA,與弓形蟲(chóng)IHA檢測(cè)結(jié)果的符合率為82.5%,且較弓形蟲(chóng)IHA診斷試劑提前2 d檢測(cè)到抗體。張守發(fā)等[30]應(yīng)用膠體金免疫層析法與ELISA法檢測(cè)了現(xiàn)地的147份血清樣本,得出GICA相對(duì)于ELISA的陽(yáng)性符合率為100%,陰性符合率為88.4%,總符合率為87.8%,認(rèn)為GICA與ELISA法相比,具有敏感性高、特異性強(qiáng)、快速、準(zhǔn)確、可單份操作、也可大批量檢測(cè)、結(jié)果易懂、無(wú)需儀器設(shè)備、操作人員無(wú)需進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)等優(yōu)點(diǎn),膠體金免疫層析法作為牛新孢子蟲(chóng)病的一種血清學(xué)檢測(cè)方法有著良好的實(shí)用價(jià)值,適宜于基層獸醫(yī)單位的應(yīng)用。

6 膠體金免疫層析技術(shù)在水產(chǎn)動(dòng)物疫病檢測(cè)中的應(yīng)用

隨著我國(guó)畜牧業(yè)的健康發(fā)展和對(duì)動(dòng)物疫病檢側(cè)要求的提高,膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)作為一種可靠的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù),特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、無(wú)需特殊儀器設(shè)備,在動(dòng)物病毒病、細(xì)菌病、寄生蟲(chóng)病的檢疫工作中廣泛用于病原微生物的抗原、抗體檢測(cè),大大提高了動(dòng)物疫病的檢測(cè)效率。但GICA在水產(chǎn)動(dòng)物疫病檢測(cè)中的應(yīng)用才剛剛起步。2006年,Wang X J等[31]建立了檢測(cè)蝦白斑綜合征病毒抗原的膠體金免疫層析試紙條,該方法的敏感性高于斑點(diǎn)免疫印跡測(cè)定試驗(yàn)(dot-blot nitrocellulose enzyme immunoassay,DB-NC-EIA),因不需要儀器設(shè)備,必將成為蝦白斑綜合征病毒的快速檢測(cè)技術(shù)。國(guó)內(nèi),武漢大學(xué)的孟小林等發(fā)明了一種檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒的試紙條制備方法,并申請(qǐng)了專(zhuān)利[32]。

7 膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)

膠體金免疫層析技術(shù)自誕生以來(lái)便以其簡(jiǎn)便、快速、特異、敏感等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于快速檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)診斷上,顯示出了巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。隨著膠體金標(biāo)記對(duì)傳統(tǒng)三大標(biāo)記物的替代,膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)也有逐漸取代ELISA等檢測(cè)方法的趨勢(shì)。隨著該技術(shù)的臨床應(yīng)用,進(jìn)一步提高膠體金免疫層析試驗(yàn)的敏感性、特異性、實(shí)現(xiàn)多元檢測(cè)、實(shí)現(xiàn)定量或半定量檢測(cè)是未來(lái)膠體金免疫層析技術(shù)發(fā)展的方向。

7.1 進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度

靈敏度的提高無(wú)疑會(huì)拓寬膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)范圍,以下二種方法將成為以后的研究方向:①提高膠體金質(zhì)量。進(jìn)一步完善免疫膠體金的制備工藝,使之標(biāo)準(zhǔn)化、程序化,以利于提高檢測(cè)準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,從而減少假陰性(假陽(yáng)性)結(jié)果的產(chǎn)生。②采用生物素-親和素系統(tǒng)以及免疫金銀染色法(IGSS)放大特異抗原抗體的反應(yīng)信號(hào),增強(qiáng)金標(biāo)記物的顯色效果,提高檢測(cè)靈敏度,無(wú)需特殊儀器設(shè)備的支持,將有效地拓寬膠體金免疫結(jié)合試驗(yàn)的檢測(cè)范圍。

7.2 實(shí)現(xiàn)半定量或定量檢測(cè)

目前,免疫膠體金技術(shù)定量檢測(cè)有3種類(lèi)型:第1種是通過(guò)試紙條的顏色深淺的視覺(jué)比較將結(jié)果分為陰性、弱陽(yáng)性、中陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性;第2種是將檢測(cè)線的反應(yīng)劑設(shè)計(jì)成只能結(jié)合已知一定量的分析物,任何過(guò)量的分析物將會(huì)和下一條檢測(cè)線結(jié)合,產(chǎn)生一個(gè)溫度計(jì)式的條帶梯度;第3種是應(yīng)用反射的光密度計(jì)測(cè)量顯色帶或斑點(diǎn)的顏色強(qiáng)度,將顏色強(qiáng)度轉(zhuǎn)化為數(shù)字指標(biāo)。前兩種檢測(cè)方法雖簡(jiǎn)便迅速,但只能提供半定量結(jié)果;第3種檢測(cè)方法雖能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè),但需特殊的儀器,操作不便。新的、簡(jiǎn)便實(shí)用的定量檢測(cè)技術(shù)的實(shí)現(xiàn)將使免疫膠體金技術(shù)在獸醫(yī)快速檢測(cè)上得到更為廣泛的應(yīng)用。

7.3 實(shí)現(xiàn)多元檢測(cè)

在同一膜上固定多種反應(yīng)物,即可作多種項(xiàng)目的測(cè)定,一次測(cè)定可以同時(shí)得到多組的測(cè)定結(jié)果,實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)指標(biāo)的聯(lián)檢。可進(jìn)一步減少待檢時(shí)間,降低檢測(cè)成本,并集中得出數(shù)據(jù)。

7.4 通用試劑的應(yīng)用

研發(fā)多個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的通用試劑,如在間接法檢測(cè)中用膠體金標(biāo)記葡萄球菌蛋白A代替標(biāo)記抗動(dòng)物IgG,用于各種抗體的檢測(cè),有利于減少非特異性反應(yīng),穩(wěn)定檢測(cè)試劑的質(zhì)量。

8 結(jié)語(yǔ)

目前,獸醫(yī)臨床上許多病的診斷方法仍較多地局限于傳統(tǒng)的血清學(xué)診斷方法,難以適應(yīng)快速診斷的要求。近年來(lái),膠體金免疫層析技術(shù)以其快速(僅需幾分鐘)、準(zhǔn)確(特異性強(qiáng)、靈敏度高)、簡(jiǎn)便(不需要昂貴儀器和專(zhuān)業(yè)人員)、肉眼判讀、實(shí)驗(yàn)結(jié)果易保存等優(yōu)點(diǎn),為動(dòng)物疫病診斷技術(shù)提供了新的模式,是未來(lái)動(dòng)物疫病診斷的一個(gè)發(fā)展方向。相信隨著新的標(biāo)記物和制備方法的發(fā)展、標(biāo)記技術(shù)的日趨成熟、單克隆抗體技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用,膠體金免疫層析技術(shù)將會(huì)有更為廣闊的應(yīng)用前景,實(shí)現(xiàn)更加理想的價(jià)值,從而促進(jìn)我國(guó)畜牧獸醫(yī)事業(yè)的健康、快速和持續(xù)發(fā)展。

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Application of Gold Immunochromatography Assay in Animal Disease

ZU Li-chuang1,WANG Jin-liang2,LI Jiao1,SHEN Zhi-qiang1,2

(1.Shandong Lvdu Bio-Sciences&Technology Co.Ltd.,Binzhou,Shandong,256600,China;2.Shandong Binzhou Animal Science&Veterinary Medicine Academy,Binzhou,Shandong,256600,China)

Gold immunochromatography assay technology is a new immunoassay technology developed on the basis of gold labeling technique,immunological diagnosis techniques and chromatography analysis techniques.This immunological diagnostic technique is widely used in animal disease diagnosis because of it's simple,rapid,non-polluting,without special equipment,specific,sensitive and intuitive to judge the results.Gold immunochromatography assay technology can be used for the diagnosis of viruses in animals,bacteria,parasites of aquatic animals,and will play an increasingly important role.In this paper,gold immunochromatography assay for diagnosis of animal diseases was reviewed.

gold immunochromatography assay;animal disease

S851.4

B

1007-5038(2010)08-0101-05

2010-01-25

祖立闖(1981-),男,黑龍江人,碩士,主要從事從事動(dòng)物病毒學(xué)研究。*通訊作者