張 捷，張艷萍，王 歡，劉昌葉，譚生建

（1.中國人民解放軍第306醫(yī)院藥學部，北京 100101； 2.中國人民解放軍白求恩軍醫(yī)學院藥學系，河北 石家莊 050000）

固經丸由黃柏、黃芩、白芍、香附等6味藥材細粉用水泛丸制成，具有滋陰清熱、固經止帶功能，用于治療陰虛血熱，月經先期，經血量多、色紫黑，赤白帶下[1]。黃芩苷為固經丸中清熱、抗炎的活性成分。2005年版《中國藥典（一部）》中收載了固經丸的性狀、鑒別、檢查等項目，但無含量測定方法；黃芩及其制劑中的黃芩苷含量測定報道有高效液相色譜（HPLC）法[1-3]。目前，固經丸中黃芩苷的含量測定方法尚未見報道。為此，本試驗建立了測定固經丸中黃芩苷含量的HPLC法，報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括2800液相色譜泵、7215型手動進樣器、BIO-Dimension紫外可見分光光度檢測器（美國BIO-RAD公司）；TL-9900型色譜數據工作站（北京泰樂公司）。黃芩苷對照品（批號為0715-9708，中國藥品生物制品檢定所）；試驗用藥材經本院藥檢室鑒別均符合2005年版《中國藥典（一部）》規(guī)定；試驗用固經丸及陰性樣品（本院制劑室制備）；乙腈（天津市西華特種試劑廠，批號為20041018）為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Intersil C18分析色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），C18保護柱（北京分析儀器廠，5 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -水（26 ∶74，含 5 mL 三乙胺，以磷酸調 pH=2.6）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：276 nm；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下，取 2.2項下3種溶液，分別進樣并記錄色譜圖（圖1）?？梢?，黃芩苷保留時間約為13.5 min，與相鄰峰的分離度大于1.5，理論塔板數為2 950。

2.2 溶液制備

取黃芩苷對照品20.2 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（每1 mL含黃芩苷202.0 μg）。取固經丸12 g，研細，取細粉0.38 g（相當于黃芩0.05 g），精密稱定，置25 mL量瓶中，精密加70%乙醇25 mL，精密稱定，超聲處理（功率240 W，頻率45 kHz）40 min，放冷，精密稱定，補足減失的溶劑，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺黃芩陰性樣品0.38 g，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備液（202.0 μg/mL）1，5，10，20，25 mL，置 50 mL 量瓶中，加 70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別取各稀釋液注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，以峰面積 Y對進樣質量濃度 X進行線性回歸，回歸方程為 Y=796 121.5 X+621 926.0，r=0.999 9（n=5）。結果表明，黃芩苷質量濃度線性范圍是 20.20 ～ 202.00 μg/mL。

精密度試驗：取對照品溶液（101.0 μg/mL），重復進樣5次。結果峰面積的 RSD=1.6%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現性試驗：取樣品10 g，研細，依法制備供試品溶液并測定含量。結果黃芩苷含量的 RSD=1.7%（n=6），表明方法重現性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，于0，1，2，4，6 h時依法進樣，記錄色譜峰面積。結果峰面積的 RSD=1.3%（n=5），表明供試品溶液在6 h內穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20050304-1）10 g，研細，取細粉0.19 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，精密加入對照品貯備液12.5 mL，加70%乙醇12.5 mL，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定黃芩苷的含量，計算回收率。結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄黃芩苷色譜峰面積，外標法以峰面積計算含量。結果批號為20050304-1，20050304-2，20050304-3的3批樣品中黃芩苷含量分別為1.2%，1.1%，1.2%。

3 討論

經紫外光譜掃描發(fā)現，黃芩苷在276 nm波長處有最大吸收，因此選擇276 nm作為測定波長。對2005年版《中國藥典（一部）》黃芩項下含量測定采用的流動相和本試驗中的流動相進行了對比，結果顯示，以黃芩苷色譜峰計算，藥典方法的流動相理論塔板數在1 900～2 000，本試驗中流動相的理論塔板數在2 900～3 000，表明本試驗中的流動相的適用性較好。參考2005年版《中國藥典（一部）》黃芩項下含量測定方法，以70%乙醇為溶劑，分別試驗了超聲提取30，40，50 min的提取效果，以超聲50 min的提取率為100%計算，超聲30 min和40 min的提取率分別為99.9%和101.2%，故確定超聲提取時間為40 min。

本方法操作簡便，測定結果準確可靠，可用于固經丸中黃芩苷的含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2005:211.

[2]楊立新，列 岱，馮學鋒，等.高效液相色譜法測定不同產地黃芩中黃酮化合物的含量[J]. 中國中藥雜志，2002，27（3）：166-168.

[3]楊 帆，李 攀，鄧開英.高效液相色譜法測定小兒牛黃清肺丸中黃芩苷含量[J]. 中國藥業(yè)，2008，17（18）：32-33.