張正華 吳學(xué)勇 侯凱生*

1 復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院腫瘤科（復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院）（200040）

2 上海市靜安區(qū)中心醫(yī)院腫瘤科（200040）

前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）是花生四烯酸代謝的主要產(chǎn)物之一，廣泛存在于機(jī)體各組織器官內(nèi)，在維護(hù)細(xì)胞自穩(wěn)及增殖方面有著重要的意義。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，多種惡性腫瘤具有釋放PGE2的特性，外周血PGE2水平與機(jī)體免疫狀態(tài)、療效和預(yù)后密切相關(guān)，已有文獻(xiàn)將惡性腫瘤患者手術(shù)前后外周血PGE2含量變化，作為評(píng)判手術(shù)療效輔助性指標(biāo)[1]。結(jié)直腸癌組織是目前所知分泌PGE2能力最高的惡性腫瘤，其PGE2含量為其他腫瘤的1.7～5.2倍[2]，故PGE2在結(jié)直腸癌手術(shù)療效的判斷中具有更大的臨床價(jià)值。本研究旨在通過(guò)測(cè)定結(jié)直腸癌患者外周血PGE2水平動(dòng)態(tài)變化，探討全身熱療在治療結(jié)直腸癌患者中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象選自復(fù)旦大學(xué)華山醫(yī)院腫瘤科2002年6月至2006年12月收治的結(jié)腸癌患者24例，男13 例，女11 例，年齡14～73歲，平均（56.3±17.1）歲，對(duì)照組為24名健康體檢者。本組患者入組條件是：術(shù)前肝腎功能正常；均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為癌，均為術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)及常規(guī)放化療失敗的Duke Ⅳ期患者，除外大量吸煙、酗酒、全身急慢性炎癥、常服非甾體類抗炎藥、有其他惡性腫瘤病史、肺廣泛毀損、術(shù)前已經(jīng)接受放療、化療、生物治療或術(shù)后發(fā)生切口感染、腹腔膿腫、吻合口瘺者。在術(shù)前4周內(nèi)均無(wú)放化療史，術(shù)前均無(wú)明顯感染史。

1.2 方法

1.2.1 全身熱療

全身熱療設(shè)備采用美國(guó)FCM-TEMETTM1000型體外循環(huán)熱療系統(tǒng)及中國(guó)深圳ET-SPACE太空艙全身熱療系統(tǒng).在全麻下全身核心溫度控制在41.8～42.5℃持續(xù)2h，整個(gè)熱療全過(guò)程4～6h。

1.2.2 標(biāo)本采集和處理

1.2.2.1 外周血PGE2

外周血樣品取自手術(shù)前3d及術(shù)后10d抽取外周靜脈血2mL，注入抗凝試管（抗凝劑為EDTA鈉及indomethain溶液），1h內(nèi)低溫離心（3500轉(zhuǎn)/分，4℃，15min），取上清液，-70℃保存待測(cè)。另抽取24例健康檢者外周血作對(duì)照，處理同前。

PGE2測(cè)定用英國(guó)Amersham公司提供的PGE2·EIA藥盒，敏感度為0.8pg/well，與PGD2、PGB2、PGA2、PGF1α、15-keto-PGF2α、TXB2的交叉反應(yīng)＜0.01%。測(cè)定時(shí)嚴(yán)格按照規(guī)定的步驟操作和系統(tǒng)提供的公式計(jì)算。

1.2.2.2 細(xì)胞免疫功能檢測(cè)

使用外周血淋巴細(xì)胞多項(xiàng)免疫指標(biāo)檢測(cè)。

材料與儀器：小鼠抗人單克隆抗體CD4/CD8/CD3、CD19、CD20、CD3/CD16+56、CD3/HLA-DR、CD3/CD25及同型對(duì)照、紅細(xì)胞裂解液（Optilyse C）（法國(guó)Immunotech公司）。Epics XL·MCL流式細(xì)胞儀（美國(guó)BECKMAN COULTER公司）。

使用直接免疫熒光標(biāo)記全血溶血法，流式細(xì)胞儀測(cè)定腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞表面抗原表達(dá)。 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記，溶血，洗滌，重懸，檢測(cè)，上計(jì)算淋巴細(xì)胞中各標(biāo)記細(xì)胞的百分率。最后所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)處理

2 結(jié) 果

2.1 術(shù)前檢測(cè)結(jié)果

結(jié)直腸癌患者的外周血PGE2與對(duì)照組比較見表1，結(jié)直腸癌患者外周血PGE2為（178.33±65.35）pg/mL，明顯高于對(duì)照組24例正常人（獻(xiàn)血員）的外周血PGE2[（11.69±5.6）pg/mL）]，P＜0.01；T細(xì)胞亞群以CD4+下降為主。提示結(jié)直腸癌患者較良性疾病患者以及正常人可產(chǎn)生更多的PGE2。

3.2 圍手術(shù)期動(dòng)態(tài)檢測(cè)結(jié)果

結(jié)直腸癌組圍手術(shù)期T細(xì)胞亞群和PGE 濃度變化特點(diǎn)見表1。結(jié)直腸癌組患者行全身熱療術(shù)10d后，外周血PGE2由（178.33±65.35）pg/mL 降至（25.82±4.37）pg/mL。呈顯著降低。經(jīng)相關(guān)性分析可發(fā)現(xiàn)CD4細(xì)胞與PGE 變化呈負(fù)相關(guān)。其r=-1.03，y=249.16-6.32 x（x為CD4細(xì)胞百分率，y為外周血PGE2濃度）。

表1 結(jié)直腸癌患者圍手術(shù)期血漿PGE2的檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

全身熱療是通過(guò)人為方法提高體溫，運(yùn)用熱作用及繼發(fā)效應(yīng)選擇性殺滅癌細(xì)胞，控制癌細(xì)胞廣泛轉(zhuǎn)移的治療方法，其特點(diǎn)是不僅要使癌灶處的溫度升高，而且使全身溫度都升高到同一溫度，已成為繼手術(shù)、化療、放療和生物免疫治療后出現(xiàn)的第5種腫瘤治療方法，成為腫瘤綜合治療的有效手段。

通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，許多學(xué)者認(rèn)為，熱療殺傷腫瘤分子和細(xì)胞的機(jī)制有以下幾種：①高溫殺傷細(xì)胞膜蛋白，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，低分子蛋白外滲，腫瘤細(xì)胞被破壞；還可能通過(guò)殺傷線粒體膜蛋白引起其流動(dòng)性改變，導(dǎo)致能量轉(zhuǎn)換障礙，腫瘤細(xì)胞因呼吸抑制而缺氧死亡；也可通過(guò)抑制參與腫瘤細(xì)胞復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)有關(guān)的酶類及滅活染色體的組蛋白，引起DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成受到抑制；殺傷細(xì)胞核支架、細(xì)胞骨架修復(fù)酶，使細(xì)胞骨架散亂。②提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能，促進(jìn)白細(xì)胞介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子（TNF）的生成[3,4]并使腫瘤局部淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（LI）增加[5]。③提高野生型p53基因的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[6]。④抑制腫瘤微血管的形成和促進(jìn)血纖維蛋白溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）的表達(dá)[7]。⑤還可使腫瘤血管閉塞、破壞，滲出增加。其中增強(qiáng)機(jī)體免疫力是很重要的一個(gè)方面，有文獻(xiàn)報(bào)道，熱療后血清TNF-α水平升高[8]，也有學(xué)者觀察微波熱療后，患者CD4細(xì)胞增加，CD4/CD8增大，表明免疫機(jī)制起一定的作用[9]。

自1971年Jaffe等[2]首次報(bào)道人類結(jié)直腸癌細(xì)胞在組織培養(yǎng)過(guò)程中可釋放多量的前列腺素E（PGE）以來(lái)，人們相繼發(fā)現(xiàn)多種腫瘤均有產(chǎn)生PG的特性[10]。我們以結(jié)直腸癌患者為研究對(duì)象，觀察其PGE2含量變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者外周血PGE2含量比正常人高（P＜0.01）；全身熱療后，外周血PGE2含量較術(shù)前明顯降低。上述結(jié)果均提示，結(jié)直腸癌可產(chǎn)生大量的癌源性PG，結(jié)直腸癌患者血循環(huán)中具有持續(xù)高水平的PGE2。癌源性PG的增高可能與腫瘤組織內(nèi)PG的合成及分泌增多有關(guān)，環(huán)氧化酶是PGE2合成起始步驟中的關(guān)鍵酶。環(huán)氧化酶抑制物可影響腫瘤組織內(nèi)PG的含量。一些酸性抗炎藥物如阿司匹林、吲哚美辛、芳基丙酸等都是環(huán)氧化酶的抑制物。它們無(wú)論在體內(nèi)、體外均可明顯抑制PG的合成與釋放[11]。另外，腫瘤組織內(nèi)除腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞外，尚含有其他一些細(xì)胞，如單核-巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等。這些細(xì)胞均能產(chǎn)生大量的PG，已有研究表明，PGE2能降低NK細(xì)胞的活性，且有促進(jìn)腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的作用[12]。

本文結(jié)直腸癌組既不伴有免疫缺陷病變，又無(wú)免疫抑制藥治療史，患者表現(xiàn)為CD4、CD3和CD4/CD8比值下降，且以CD4下降為主，表明T細(xì)胞亞群嚴(yán)重失街，聃能受抑或受損，提示為腫瘤負(fù)荷所致，與文獻(xiàn)報(bào)道[13,14]相同。PGE2是一種能抑制淋巴細(xì)胞分化增殖的可溶性免疫抑制因子[15]，一般認(rèn)為是通過(guò)抑制T細(xì)胞增殖而發(fā)揮作用。從本文結(jié)直腸癌組圍手術(shù)期動(dòng)態(tài)檢測(cè)資料可看出PGE2顯著增高同時(shí)CD4細(xì)胞顯著下降，CD4/CD8比值顯著下降，經(jīng)過(guò)全身熱療術(shù)后PGE2下降，CD4細(xì)胞漸升，CD4/CD8比值漸趨正常。PGE2濃度變化與T細(xì)胞亞群失衡之間存在較好的相關(guān)性。

鑒于結(jié)直腸癌患者具有高水平的PGE2，且又與細(xì)胞免疫功能異常關(guān)系密切，全身熱療在殺滅癌細(xì)胞同時(shí)提高機(jī)體免疫力。外周血PGE2作為結(jié)直腸癌患者全身熱療治療判斷療效的一項(xiàng)輔助性監(jiān)測(cè)指標(biāo)有較好的應(yīng)用前景。

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