袁盛勇, 孔 瓊, 張宏瑞, 李正躍, 張雪梅, 李雄強, 李文偉

(1.云南紅河學院農(nóng)學系,蒙自 661100; 2.云南紅河學院生物系,蒙自 661100;3.云南農(nóng)業(yè)大學植保學院,昆明 650201)

昆蟲病原真菌是一類通過菌絲穿透寄主體壁侵染昆蟲的病原微生物,對于防治刺吸式口器害蟲,如蚜蟲、葉蟬、飛虱等具有獨到之處,因此研究和開發(fā)針對刺吸式口器害蟲的真菌制劑受到國內外的普遍關注[1]。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前研究和應用最多的一種重要昆蟲病原真菌,寄主范圍廣,可侵染15個目149個科的700余種昆蟲和螨類,致病性強,適應性強[2],對控制害蟲嚴重發(fā)生和減少環(huán)境污染起到了很大的作用。

平菇厲眼蕈蚊(Lycoriella pleuroti Yang et Zhang)隸屬于雙翅目,長角亞目,眼蕈蚊科,厲眼蕈蚊屬,是國內食用菌的優(yōu)勢危害種,俗稱菌蚊、菌蛆。該蟲能為害平菇、猴頭菇、茶樹菇、靈芝等多種食用菌和藥用菌[3]。成蟲常在培養(yǎng)料和出菇期的菌袋口端及子實體上爬行、交尾、產(chǎn)卵。幼蟲潛入培養(yǎng)料及子實體中,直接取食食用菌的菌絲和培養(yǎng)料的原基或鉆蛀幼嫩菇體,造成退菌、原基消失,培養(yǎng)料松散、逐漸變成黃褐色,菇蕾萎縮死亡、菌柄折斷倒伏、耳片缺刻和菇體孔洞,嚴重時子實體完全失去商品價值[4]。關于應用球孢白僵菌防治平菇厲眼蕈蚊的研究尚未見報道,本研究以能侵染平菇厲眼蕈蚊的球孢白僵菌為材料,研究其對平菇厲眼蕈蚊的防治效果,以達到用生物農(nóng)藥代替化學農(nóng)藥防治平菇厲眼蕈蚊的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

球孢白僵菌MZ041016菌株保存在紅河學院農(nóng)學系實驗室,經(jīng)復壯和擴繁之后供試驗用。

1.1.2 供試昆蟲

從平菇栽培基地采集成蟲,在實驗室菌袋上飼養(yǎng)得到供試蟲態(tài)。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種的擴繁、分生孢子液的制備

采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)在溫度25℃下進行培養(yǎng),培養(yǎng)10d收集分生孢子。

1.2.2 分生孢子液的制備

用50mL無菌水+0.05%吐溫20作為潤濕劑振蕩脫溶固體培養(yǎng)基上的孢子,并以雙層絲襪過濾,除去菌絲和雜質。用血球計數(shù)板在顯微鏡下檢查計算孢子數(shù),測出濃度,再用無菌水分別稀釋成所需的梯度濃度。

1.2.3 菌株對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力測定

將球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子稀釋為孢子含量3.0×104～3.0×108個/mL5個處理濃度,每個處理設3個重復,并用0.05%吐溫20+無菌水作對照,每個濃度30頭幼蟲,浸入20～30mL孢子懸液中30s后迅速取出,用干濾紙吸去留在蟲體上的懸浮液,置于盛有黃豆粉的培養(yǎng)皿中,用紗布封口,置于25℃,相對濕度80%的人工氣候培養(yǎng)箱中,每天觀察記錄化蛹和死亡數(shù)量,并將蟲尸取出,連續(xù)觀察7d。

1.2.4 菌株對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力測定

球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子液稀釋為3.0×104～3.0×108個/mL5個處理濃度,每個處理設3個重復,并用0.05%吐溫20+無菌水作對照,采用噴霧法接種。在每個容量為300mL瓶壁有孔的礦泉水瓶內放入30頭成蟲。接種時先將成蟲置于瓶內,用M301414型喉頭噴霧器均勻噴施4mL分生孢子液,用紗布封口,置于25℃、相對濕度為80%的人工氣候培養(yǎng)箱中。每天觀察記錄其死亡蟲數(shù),并將蟲尸取出。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS10處理,根據(jù)校正死亡率進行概率值轉換后,對劑量作線性回歸分析,建立直線回歸模型,從而分別估計劑量效應 LC50、LT50和相關系數(shù)(R)等參數(shù)。

2 結果與分析

2.1 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力

毒力測定結果(表 1～3)表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液濃度為3.6×108個/mL時對平菇厲眼蕈蚊成蟲毒力最強,第7天校正死亡率86.72%,其次是3.6×107個/mL濃度下,其校正死亡率為74.79%,毒力最差為3.6×104個/mL濃度下,校正死亡率為25.02%。在3.6×108個/mL濃度下第2天成蟲出現(xiàn)死亡,隨著時間推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢。對平菇厲眼蕈蚊成蟲毒力測定中第4～7天的致死中濃度(LC50)依次為2.988×108、3.55×107、3.78×106個/mL和2.319×105個/mL。可看出隨著孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊成蟲的 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個/mL濃度下的LT50依次為8.57、6.14、5.18d和4.28d。

表1 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊成蟲的毒力

表2 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中濃度

表3 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊成蟲的致死中時

2.2 球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度孢子液對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力

表1、表2和表3統(tǒng)計結果表明,球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子懸浮液3.6×108個/mL濃度下對平菇厲眼蕈蚊幼蟲毒力最強,第7天校正死亡率為87.69%,其次是3.6×107個/mL濃度下,校正死亡率為80.46%,毒力最差為3.6×104個/mL濃度下的31.11%。在不同濃度下第2天幼蟲開始出現(xiàn)死亡,隨著時間的推移和濃度增加,校正死亡率呈逐漸增加趨勢。對平菇厲眼蕈蚊幼蟲毒力測定中第 4～7天的致死中濃度(LC50)分別為3.467×108、2.853×107、2.841 ×106個/mL 和3.082×105個/mL,隨時間推移,致死中濃度逐漸減小。隨著分生孢子濃度的增加,平菇厲眼蕈蚊幼蟲致死中時間 LT50逐漸減小,3.6×105～3.6×108個/mL濃度下的LT50依次為8.09、6.03、4.96d和4.53d。

表4 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子不同濃度對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的毒力

表5 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的致死中濃度

表6 球孢白僵菌MZ041016菌株分生孢子對平菇厲眼蕈蚊幼蟲的致死中時

3 討論

利用昆蟲病原真菌防治平菇厲眼蕈蚊的報道很少,試驗應用球孢白僵菌MZ041016菌株不同濃度分生孢子液對平菇厲眼蕈蚊成蟲和幼蟲進行毒力測定,結果表明,兩個蟲態(tài)均能感病,其中幼蟲較成蟲敏感,這可能與低齡幼蟲的各種防御功能發(fā)育不完善,因而抵抗力較差有關。使用不同孢子濃度處理平菇厲眼蕈蚊成蟲和幼蟲的結果表明,3.6×108個/mL是較為理想的濃度。環(huán)境條件對該菌的毒力影響很大,其中溫度和濕度是兩個非常重要的因素,適當?shù)臏囟群蜐穸仁窃摼乐纹焦絽栄坜ξ玫年P鍵因素,在菇房中應用還待進一步深入研究。

[1]李濤,劉映紅,張永軍.球孢白僵菌對煙蚜繭蜂寄生行為的影響[J].植物保護學報,2007,34(4)：401-404.

[2]李榮森,羅紹彬.微生物防治害蟲[M].北京：科學出版社,1983.

[3]何嘉,張?zhí)?李正躍.平菇眼蕈蚊的生物學特性及其防治[J].中國食用菌,2004,24(4)：52-54.

[4]沈登榮,張宏瑞,張?zhí)?我國食用菌眼蕈蚊的研究現(xiàn)狀[J].中國食用菌,2008,27(1)：48-50.