文萍萍，陳代平，李金海，鄧永強(qiáng)

（四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 在較潔凈的豬場(chǎng)，選擇約180頭35～37日齡健康的斷奶仔豬，組間豬的大小基本一致。人工投料，豬自由采食，自由飲水。

1.2 試驗(yàn)疫苗 豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ），批號(hào)0703002；豬瘟活疫苗（脾淋苗），批號(hào)0709085；高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗，批號(hào)0710091。按疫苗說(shuō)明書(shū)的條件進(jìn)行保存、運(yùn)輸，使用時(shí)均在有效期內(nèi)。

1.3 診斷試劑 口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)2007122401；豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，IDEXX公司產(chǎn)品，批號(hào)433220-P361；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑盒，INGENASA公司產(chǎn)品，批號(hào)2331106。

1.4 試驗(yàn)方案 將試驗(yàn)豬分為9個(gè)試驗(yàn)組，免疫注射時(shí)給所有豬佩戴牲畜耳標(biāo)。具體方案詳見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)分組方案

1.5 免疫反應(yīng)的臨床觀察 在接種疫苗后2h測(cè)量體溫一次，4h測(cè)量第二次體溫，同時(shí)觀察注射局部的反應(yīng)和全身反應(yīng)。

1.6 采血方案 于接種后0、4、14、21 d和28 d前腔靜脈采血，1～1.5mL/頭，血清析出后-20℃凍存，統(tǒng)一檢測(cè)。

1.7 檢測(cè)方法及結(jié)果判定 豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理為阻斷ELISA；O型口蹄疫檢測(cè)試劑盒為液相阻斷ELISA抗體；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑盒的檢測(cè)原理為間接ELISA。檢測(cè)時(shí)按試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.8 數(shù)據(jù)分析 用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1免疫反應(yīng)的觀察 單獨(dú)免疫豬瘟疫苗后，豬體溫、食欲正常，未見(jiàn)免疫副反應(yīng)產(chǎn)生。單獨(dú)免疫豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）或高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗后，體溫升高0.5～1℃，精神狀態(tài)稍差，但很快恢復(fù)，無(wú)不食和精神不振的情況，注射部位無(wú)紅腫變化，總體免疫副反應(yīng)較小。豬瘟與口蹄疫或高致病性豬藍(lán)耳病疫苗同時(shí)分部位免疫，豬的免疫副反應(yīng)與單獨(dú)注射口蹄疫或高致病性豬藍(lán)耳病疫苗的情況基本一致?？谔阋吆透咧虏⌒载i藍(lán)耳病疫苗同時(shí)分部位免疫后，豬體溫升高1～2℃，精神狀態(tài)稍差，1d左右恢復(fù)，無(wú)不食和精神不振的情況，注射局部無(wú)紅腫變化，總體上免疫副反應(yīng)較單獨(dú)免疫注射時(shí)明顯。

2.2 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 豬口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果與分析 用液相阻斷ELISA 檢測(cè) 1、4、6、7、8 組豬在接種后 0、4、14、21 d 和28 d的口蹄疫抗體效價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表2、表3。從表2可見(jiàn)，1組免疫后28 d，平均抗體效價(jià)可達(dá)71.77，4組與1組相比差異不大，而6組平均抗體效價(jià)大大低于1組。從表3可見(jiàn)，28 d時(shí)I組的免疫合格率可達(dá)66.67%，4組免疫合格率為50%，6組免疫合格率為0。7、8組母源抗體比1組高，相比1、4組產(chǎn)生的抗體效價(jià)要低一些。從1、4組看，豬瘟和口蹄疫同時(shí)分部位注射對(duì)口蹄疫的免疫效果有一定的影響，但差異不顯著（P＞0.05），總體來(lái)說(shuō)是可以接受的；豬藍(lán)耳病和口蹄疫同時(shí)分部位免疫對(duì)口蹄疫的免疫效果影響很大（P＜0.01）。比較 7、8組和 1、4組可見(jiàn)，母源抗體對(duì)口蹄疫的免疫效果影響較大。

表2 口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA的檢測(cè)結(jié)果（幾何平均值） %

表3 口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)的免疫合格數(shù)

表4 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果（幾何平均值） %

表5 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果（陽(yáng)性數(shù)）

2.2.2 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果與分析 用ELISA檢測(cè)2、4、5、7、9 組的豬瘟抗體水平，結(jié)果見(jiàn)表 4、5。從 2、4 組看，豬瘟和口蹄疫同時(shí)分部位免疫對(duì)豬瘟的免疫效果影響不大（P＞0.05）。從2、5組看，豬藍(lán)耳病和豬瘟同時(shí)分部位免疫對(duì)豬瘟的免疫有一定的影響。從2、7、9組看，在豬瘟母源抗體較高時(shí)免疫，對(duì)豬瘟抗體的影響較大。

2.2.3 豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果與分析 用間接ELISA檢測(cè)豬藍(lán)耳病的抗體，0d的檢測(cè)結(jié)果表明該豬場(chǎng)部分仔豬的抗體效價(jià)達(dá)到1 000以上，說(shuō)明該豬場(chǎng)已經(jīng)感染了豬藍(lán)耳病，所以無(wú)法比較各組的差異。此外豬藍(lán)耳病的抗體與保護(hù)率之間無(wú)相關(guān)性，本試劑盒不能區(qū)分高致病性藍(lán)耳病疫苗的特異性抗體，凡是豬藍(lán)耳病的抗體均能檢出。故本報(bào)告未列出相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果。

3 小結(jié)與討論

3.1 本次試驗(yàn)表明，豬瘟脾淋弱毒疫苗和豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）同時(shí)分部位注射時(shí)，免疫副反應(yīng)與單獨(dú)注射口蹄疫疫苗的情況一致，對(duì)口蹄疫和豬瘟免疫抗體的產(chǎn)生無(wú)影響，相互間干擾很小（P＞0.05），在生產(chǎn)實(shí)際中是可行的，這與張娟敏等人的報(bào)道是一致的，也是被我省這幾年的防疫工作所證實(shí)的。

3.2 本次試驗(yàn)表明，高致病性豬藍(lán)耳病疫苗和豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）不能同時(shí)免疫，這可能與檢測(cè)方法、母源抗體水平高低等因素有關(guān)。豬瘟脾淋弱毒疫苗和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗同時(shí)分部位免疫對(duì)豬瘟的免疫效果有一定的影響，王劍峰等也報(bào)道豬藍(lán)耳病疫苗對(duì)豬瘟的免疫效果有顯著影響。

3.3 該豬場(chǎng)所有母豬均免疫過(guò)兩次豬藍(lán)耳病疫苗，0 d時(shí)部分仔豬的抗體水平很高，可能存在隱性豬藍(lán)耳病。

3.4 此次試驗(yàn)表明：仔豬只免疫1次口蹄疫疫苗（1 mL），免疫抗體合格率只能達(dá)到50%～66.67%，因此，生豬口蹄疫只免疫1次一般達(dá)不到保護(hù)效果，應(yīng)加強(qiáng)免疫1次，這與農(nóng)業(yè)部口蹄疫免疫方案規(guī)定的60日齡左右強(qiáng)化免疫1次是一致的。

3.5 通常認(rèn)為豬瘟弱毒脾淋苗的免疫效果最好，本次試驗(yàn)用豬瘟脾淋苗1頭份，抗體陽(yáng)性率只能達(dá)到60%左右，因此實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)在60日齡左右加強(qiáng)免疫1次，并且要根據(jù)當(dāng)?shù)貙?shí)際情況制定合理的免疫程序。

本次試驗(yàn)均采用ELISA方法對(duì)免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，通常ELISA比IHA方法更客觀，更敏感，特異性更高，但該ELISA試劑盒沒(méi)有給出達(dá)到免疫保護(hù)的臨界值。

[1]張娟敏，張少東，蔣 皓，等.規(guī)模豬場(chǎng)主要疫病的免疫技術(shù)研究[J].浙江畜牧畜醫(yī)，2006，（2）：1-3.

[2]王劍峰，楊宗照，谷 藝.同時(shí)注射豬瘟和藍(lán)耳病疫苗對(duì)豬瘟抗體效價(jià)的影響試驗(yàn)[J].浙江畜牧畜醫(yī)，2007，（1）：33.

[3]金大春，王躍川，季旭仁，等.豬口蹄疫免疫程序和抗體水平研究[J].畜禽業(yè)，2003，（8）：30-31.

[4]沈意興，王全溪，李國(guó)平，等.不同豬瘟疫苗對(duì)仔豬免疫效果對(duì)比試驗(yàn)[J].福建畜牧獸醫(yī)，2007，（3）：8-10.

[5]黃立業(yè)，李瓊瑾.不同免疫時(shí)間豬瘟免疫抗體分析試驗(yàn)[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2007，（3）：10-11.