吳 帥，劉二偉，張 祎，韓立峰，劉 虹

川續(xù)斷屬（Dipsacus L.）植物全世界共有30種，中國有18種，2變種，其中有2種為栽培種，全國各地都有分布。分布最廣的物種是日本續(xù)斷（Djaponicus.Miq），其次為川續(xù)斷（D.asperoides），后者為最重要的基源植物。川續(xù)斷的根川續(xù)斷為常用中藥，具有補肝腎、強筋骨、通血脈、利關(guān)節(jié)、破癖、止痛解毒的功效[1]。川續(xù)斷中的化學(xué)成分主要包括三萜及其苷類化合物、環(huán)烯醚萜苷類化合物、生物堿類化合物和揮發(fā)油類化合物等，現(xiàn)代研究表明主要有抗骨質(zhì)疏松、促進(jìn)骨損傷愈合、降低妊娠時子宮收縮活性、提高免疫作用和抗維生素E缺乏癥等藥理作用[2]。筆者對川續(xù)斷乙醇提取物進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)研究，分離并鑒定了4個三萜皂苷，2個環(huán)烯醚萜，進(jìn)一步對川續(xù)斷乙醇提取物的中極性部位進(jìn)行了化學(xué)研究，并獲得了4個化合物，其中化合物乙二醇為首次從川續(xù)斷屬中分離得到。

1 材料 儀器和試劑

1.1 材料 川續(xù)斷采于河南省信陽市，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)教研室李天祥老師鑒定為川續(xù)斷（Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et Z.T.Yin）。樣本存于天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院標(biāo)本實驗室。

1.2 儀器 Varian 400 MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀；BüCHI B-545顯微熔點測定儀 (未經(jīng)校正)；EYELA N-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.3 試劑 石油醚（60－90），乙酸乙酯，丙酮，二氯甲烷，甲醇（天津市化學(xué)試劑三廠）試劑均為分析純，柱層析用硅膠（青島海洋化工廠），TLC薄層硅膠（青島海洋化工廠），高效TLC薄層板（天津思利達(dá)科技有限公司），反相ODS，Chromatorex ODS MB 100－40/75 （Fuji Silisia Chemical，Ltd.，Japan，40－75 μmol/L）。

2 提取與分離

川續(xù)斷干燥粗粉7 kg，用10倍體積70%乙醇提取2 h，提取3次，合并提取液，過濾，濾液經(jīng)減壓回收得干浸膏913.3g，用水分散后用乙酸乙酯萃取，余下的水溶液過D101大孔樹脂分離，分別用20%，50%和80%的乙醇洗脫。80%乙醇洗脫部位得浸膏90g經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷：甲醇（20∶1～0∶100） 梯度洗脫，3 000 mL 為一個餾分，共收集63個餾分。川續(xù)斷乙醇提取液過濾得到的固體用水重結(jié)晶處理得到化合物2（230 mg）。餾分6-16經(jīng)硅膠色譜，用石油醚和丙酮梯度洗脫得到化合物4（7 mg）。餾分17－20經(jīng)硅膠色譜，用石油醚和丙酮梯度洗脫得到化合物 1（10mg）和 5（100 mg）。餾分24－30用丙酮處理得到化合物3（20 mg）。餾分42～44，45～46和58經(jīng)ODS反相硅膠色譜，用甲醇和水梯度洗脫和重結(jié)晶處理得到化合物6（172 mg），8（154 mg）和 7（204 mg）。20%乙醇洗脫部位浸膏80g經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷：甲醇（20∶1－0∶100）梯度洗脫，100 mL為一餾分，共收集40餾分。餾分21－22 得到化合物 9（45 mg），餾分 33－36 繼續(xù)用硅膠和反相硅膠層析得化合物10（80 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶（甲醇），mp135～136℃，在氯仿中易溶，丙酮中微溶，水中不溶。Molish反應(yīng)陰性，與β－谷甾醇對照品共薄層色譜，3種溶劑系統(tǒng)展開，硫酸和磷鉬酸顯色，顯色行為和Rf值均相同，混合熔點不降，綜合以上實驗結(jié)果鑒定化合物1為 β－谷甾醇（β－sitosterol）。

化合物2：白色針狀晶體（甲醇），易溶于水或熱醇中，具甜味。與蔗糖對照品共薄層色譜，3種溶劑系統(tǒng)展開，硫酸顯色，顯色行為和Rf值均相同。綜合以上實驗，確定化合物2為蔗糖（Sucrose）[3]。

化合物 3：白色粉末（丙酮），mp 176－178℃，與胡蘿卜苷對照品共薄層色譜，3種溶劑系統(tǒng)展開，硫酸和磷鉬酸顯色，顯色行為和Rf值均相同，混合熔點不降，因此鑒定化合物3為胡蘿卜苷（Daucosterol）。

化合物4：無色油狀物（甲醇），易溶于丙酮和甲醇，1H－NMR （pyridine－d5）δ：3.60 （2H，s，CH2）；13C－NMR（pyridine－d5）δ：63.1（CH2）。與文獻(xiàn)中乙二醇1H－NMR和13C－NMR數(shù)據(jù)一致[4-5]，因此鑒定化合物4為乙二醇（Ethylene glycol）。

化合物 5：白色粉末（丙酮），mp 239－241℃，易溶于丙酮和甲醇，1H－NMR （pyridine－d5）δ：5.47（1H，brs，H－12），4.99 （1H，d，J＝8 Hz，H－1′），1.22、1.02、0.99、0.93、0.92、0.91 （3H，s，6 ×CH3）；13C－NMR δ：38.8（C－1），26.1（C－2），82.0（C－3），43.5（C－4），47.6（C－5），18.2（C－6），32.9（C－7），39.8（C－8），48.2（C－9），37.0（C－10），23.7（C－11），122.6（C－12），144.9（C－13），42.2（C－14），28.3（C－15），23.9（C－16），46.7（C－17），42.0（C－18），46.5（C－19），30.9（C－20），34.2（C－21），33.2（C－22），64.5（C－23），13.6（C－24），16.1（C－25），17.5（C－26），26.2（C－27），180.3（C－28），33.2（C－29），23.6（C－30），106.6（C－1′），73.1（C－2′），74.7（C－3′），69.6（C－4′），66.9（C－5′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的1H－NMR和13C－NMR數(shù)據(jù)基本一致[6]，因此鑒定化合物5為3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元(Cauloside A)。結(jié)構(gòu)如圖1。

化合物6：白色針狀晶體（甲醇），mp227－230℃，易溶于甲醇，不溶于氯仿和丙酮，1H－NMR（pyridine－d5）δ：6.30 （1H，d，J＝8.5 Hz，H－1′），5.41（1H，brs，H－12），5.03 （1H，d，J＝7.5 Hz，H－1′′），4.56 （1H，d，J＝7 Hz，H －1′′′），1.26、1.24、1.10、0.95、0.88、0.88，0.87 （3H，s，7×CH3）；13C－NMR δ：39.7（C－1），26.8（C－2），88.7（C－3），39.7（C－4），60.0（C－5），18.8（C－6），33.3（C－7），40.1（C－8），48.3（C－9），37.2（C－10），23.9（C－11），122.5（C－12），144.0（C－13），42.2（C－14），28.4（C－15），23.9（C－16），47.2（C－17），41.9（C－18），28.4（C－15），23.9（C－16），47.2（C－17），41.9（C－18），46.6（C－19），30.9（C－20），34.2（C－21），32.7（C－22），28.2（C－23），17.1（C－24），15.9（C－25），17.7（C－26），26.3 （C－27），176.4 （C－28），33.3 （C－29），23.9（C－30），107.5（C－1′），73.0（C－2′），74.7（C－3′），69.6（C－4′），66.9（C－5′），95.7（C－1′′），73.9（C－2′′），78.7（C－3′′），70.9（C－4′′），78.0（C－5′′），69.6（C－6′′），105.2（C－1′′′），75.2（C－2′′′），78.4（C－3′′′），71.6（C－4′′′），78.4（C－5′′′），62.7（C－6′′′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的 1H－NMR 和 13C－NMR數(shù)據(jù)基本一致[3]，因此鑒定化合物6為3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖－（1→6）－β－D－吡喃葡萄糖苷。結(jié)構(gòu)如圖 1。

化合物 7：白色晶體（甲醇），mp 210～213℃，易溶于甲醇，不溶于氯仿和丙酮，1H－NMR（pyridined5）δ：6.21 （1H，d，J＝7.5 Hz，H－1′），5.35（1H，brs，H－12），4.98 （1H，d，J＝8 Hz，H－1′′），4.92（1H，d，J＝7 Hz，H －1′′′），1.11、1.07、0.91、0.87、0.80、0.79 （3H，s，6×CH3）；13C－NMR （pyridined5）δ：39.1（C－1），26.5（C－2），82.2（C－3），43.8（C－4），48.5（C－5），18.5（C－6），33.1（C－7），40.3（C－8），47.9 （C－9），37.3 （C－10），24.2 （C－11），123.2（C－12），144.5（C－13），42.4（C－14），28.6（C－15），23.7（C－16），47.3（C－17），42.0（C－18），46.5（C－19），31.1（C－20），34.3（C－21），32.9（C－22），64.8（C－23），14.0（C－24），16.6（C－25），17.9（C－26），26.4 （C－27），176.9 （C－28），33.4 （C－29），24.0（C－30），107.0（C－1′），73.4（C－2′），75.0（C－3′），70.0（C－4′），67.3（C－5′），96.0（C－1′′），74.2（C－2′′），79.0（C－3′′），71.2（C－4′′），78.3（C－5′′），69.7（C－6′′），105.6（C－1′′′），75.5（C－2′′′），78.7（C－3′′），71.8（C－4′′），78.8（C－5′′），62.9（C－6′′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的1H－NMR和13C－NMR數(shù)據(jù)基本一致[3]，因此鑒定化合物 7為 3－O－α－L－吡喃阿拉伯糖－常春藤皂苷元－28－O－β－D－吡喃葡萄糖－（1→6）－β－D－吡喃葡萄糖苷（Akebiasaponin D）。結(jié)構(gòu)如圖1。

化合物8：白色針狀晶體（甲醇），mp 213－215℃，易溶于甲醇，不溶于氯仿和丙酮，1H－NMR（pyridine－d5）δ：6.30 （1H，d，J＝8.5 Hz，H－1′），5.41（1H，brs，H－12），4.95（1H，d，J＝7.0Hz，H－1′），1.16、1.10、0.94、0.90、0.87、0.85 （3H，s，6 ×CH3）；13C－NMR（pyridine－d5）δ：39.1（C－1），26.4（C－2），82.0（C－3），43.8（C－4），47.9（C－5），18.5（C－6），33.4（C－7），40.3（C－8），48.5（C－9），37.2（C－10），24.2（C－11），123.2（C－12），144.4（C－13），42.4（C－14），28.6（C－15），23.7（C－16），47.3（C－17），42.0（C－18），46.5（C－19），31.1（C－20），34.3（C－21），32.8（C－22），64.8（C－23），13.9（C－24），16.5（C－25），17.9（C－26），26.4（C－27），176.8（C－28），33.1 （C－29），24.0 （C－30），107.0 （C－1′），73.4（C－2′），75.0（C－3′），70.0（C－4′），67.3（C－5′），96.0 （C－1′′），74.4 （C－2′′），79.6 （C－3′′），71.4（C－4′′），79.2（C－5′′），62.5（C－6′′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的1H－NMR和13C－NMR數(shù)據(jù)基本一致[6]，因此鑒定化合物8為3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元－28－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（HN saponin F）。結(jié)構(gòu)如圖1。

圖1 化合物5-8的結(jié)構(gòu)式

化合物9：淡黃色粉末，溶于甲醇。1H－NMR（CD3OD）δ：5.22 （1H，d，J＝4.0 Hz，H－1），7.33（1H，d，J＝1.0 Hz，H－3），1.04 （3H，d，J＝7.0 Hz，H－10），3.63 （3H，s，OCH3）；4.59 （1H，d，J＝8.0 Hz，H－1′）；13C－NMR （CD3OD）δ：97.8 （C－1），150.9（C－3），112.8（C－4），31.0（C－5），41.5（C－6），73.9（C－7），41.0（C－8），45.3（C－9），12.3（C－10），168.3（C－11），50.5（C－12），98.8（C－1′），73.5（C－2′），77.2（C－3′），70.4（C－4′），76.8（C－5′），61.6（C－6′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的 1H－NMR 和 13CNMR數(shù)據(jù)基本一致[7]，因此鑒定化合物（9）為馬錢子苷（Loganin）。結(jié)構(gòu)如圖2。

化合物10：白色粉末，溶于甲醇。1H－NMR（CD3OD）δ：unit A 5.47 （1H，d，J＝5.5 Hz，H－1），7.39（1H，s，H－3），2.86（1H，brq，J＝7.0 Hz，H－5），1.66－1.73（1H，m，H－6）；1.98－2.05（1H，m，H－6），4.46（1H，dd，J＝4.5 Hz，H－7）5.65－5.71（1H，m，H－8），2.61－2.65（1H，m，H－9），4.46（1H，d，J＝7.0，H－1′），3.30 （6H，s，2×OCH3）；unit B 5.25（1H，d，J＝4.5 Hz，H－1），7.37（1H，s，H－3），3.10（1H，dd，J＝4.0，8.4 Hz，H－5），1.59－1.67（1H，m，H－6）；2.00－2.07（1H，m，H－6），4.46（1H，dd，J＝4.4，H－7），4.46 （1H，d，J＝6.8，H －1′） 3.63 （3H，s，OCH3）；13C－NMR（CD3OD）δ：unit A 97.9（C－1），153.3（C－3），113.3（C－4），29.5（C－5），33.3（C－6），104.3（C－7），135.9（C－8），45.4（C－9），119.9（C －10），169.4 （C －11），53.7 （OCH3），52.8（OCH3），100.1（C－1′），74.7（C－2′），78.0（C－3′），71.6（C－4′），78.4（C－5′），62.8（C－6′）；unit B 97.5（C－1），152.6 （C－3），112.0 （C－4），32.6 （C－5），40.3（C－6），78.4（C－7），41.0（C－8），47.1（C－9），13.9（C－10），168.3（C－11），51.8（OCH3），100.0（C－1′），74.6（C－2′），78.0（C－3′），71.5（C－4′），78.4（C－5′），62.7（C－6′）。波譜學(xué)與文獻(xiàn)中的 1HNMR和13C－NMR數(shù)據(jù)基本一致[8]，因此鑒定化合物（10）為（Triplostoside A）。結(jié)構(gòu)如圖2。

圖2 化合物9和10的結(jié)構(gòu)式

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：231-231.

[2]王 巖,周莉玲,李 銳,川續(xù)斷的研究進(jìn)展[J].時珍國醫(yī)國藥2002,13(4):233-234.

[3]張永文,薛 智,川續(xù)斷的化學(xué)成分研究[J].藥學(xué)學(xué)報1991,26(9):676-681.

[4]Maarten Verbrugghe,Ellen Cocquyt,Pieter Saveyna et al.Quantification of hydrophilic ethoxylates in polysorbate surfactants using diffusion 1H-NMR spectroscopy[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2010,51(3):583-589.

[5]By Ryutaro Ohashi,Jeremy W.Bartels,et al.Solid-State NMR Investigations of the Unusual Effects Resulting from the Nanoconfinement of Water within Amphiphilic Crosslinked Polymer Networks[J].Adv.Funct.Mater，2009,19(21):3404-3410.

[6]Keun Young Jung,Kun Ho Son,Jae Chul Do Triterperioids from the Roots of Dipsacus asper[J].Arch.Pharm.Res，1993,16(1):32-35.

[7]Tan DX,Manchester LC,Reiter RJ，et al.Melatonin protects hippocampal neurons in vivo against neurons in vivo against kainic acid-induced damage in mice[J].NeurosciRes,1998,54(3):382-389.

[8]王德祖,楊崇仁,馬偉光,等,大花雙參的環(huán)烯醚萜甙化學(xué)研究[J].云南植物研究,1992,14(1):92-96.