鄧 紅 ，陳睿妍 ，張 蜀 ，張 彧

(1.廣東藥學(xué)院藥物研究所·廣東省藥物新劑型重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510006;2.深圳致君制藥有限公司，廣東 深圳 518110)

愈酚偽麻待因口服溶液由磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創(chuàng)木酚甘油醚組成，用于緩解無(wú)痰干咳或少痰的劇烈、頻繁咳嗽，并可減輕鼻塞等癥狀。筆者采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定該復(fù)方制劑中3種主要成分的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC10-AD型液相色譜儀，SPD-M10A二極管陣列檢測(cè)器，Class LC-10A色譜工作站(日本Shimadzu公司);P680型高效液相色譜儀，UVD170U檢測(cè)器，Chromeleon-HPLC management software(美國(guó)Dionex公司)。愈酚偽麻待因口服溶液(深圳致君制藥有限公司，批號(hào)分別為070501，070502，070503，規(guī)格為100 mL中含磷酸可待因0.2 g、鹽酸偽麻黃堿0.6 g、愈創(chuàng)木酚甘油醚2 g);磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創(chuàng)木酚甘油醚對(duì)照品及游離愈創(chuàng)木酚均由深圳致君制藥有限公司提供;甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:DiamonsidTM-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，迪馬公司);流動(dòng)相:0.01 mol/L磷酸二氫鉀(含0.002 mol/L的庚烷磺酸鈉，磷酸調(diào)pH至3.0)-乙腈(70∶30，V/V);檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm;流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。理論塔板數(shù)按磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創(chuàng)木酚甘油醚計(jì)算均應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取磷酸可待因?qū)φ掌?.04 g、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品0.12 g與愈創(chuàng)木酚甘油醚對(duì)照品0.4 g，置100 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液(實(shí)際配得的磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創(chuàng)木酚甘油醚的質(zhì)量濃度分別為0.428，1.224，4.036 g/L)。精密量取上述貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。精密吸取樣品1 mL(約相當(dāng)于磷酸可待因2 mg、鹽酸偽麻黃堿6 mg與愈創(chuàng)木酚甘油醚20 mg)，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取處方中除主藥外的其余成分，配制成不含磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創(chuàng)木酚甘油醚的陰性樣品，取1 mL，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液;另取已知雜質(zhì)游離愈創(chuàng)木酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水制成10 μg/mL的雜質(zhì)溶液。分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。各組分峰分離度均符合要求，空白輔料無(wú)干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備:分別吸取適量的混合對(duì)照品貯備液，加水稀釋成含磷酸可待因 8.56，17.12，25.68，34.24，42.80，51.36，59.92，68.48 μg/mL，鹽酸偽麻黃堿 24.48，48.96，73.44.97.92，122.40，146.88，171.36，195.84 μg/mL，愈創(chuàng)木酚甘油醚為 80.72，161.44，242.16，322.88，403.60，484.32，565.04，645.76 μg/mL 的系列混合對(duì)照品溶液。依次進(jìn)樣10 μL，以峰面積(A)對(duì)混合對(duì)照品溶液系列質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得磷酸可待因回歸方程 A=33689.18 C+27132.71，r=0.9999(n=8);鹽酸偽麻黃堿回歸方程 A=17339.06 C+16921.64，r=0.9999(n=8);愈創(chuàng)木酚甘油醚回歸方程 A=19082.88 C+157497.64，r=0.9999(n=8)。結(jié)果表明，磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創(chuàng)木酚甘油醚質(zhì)量濃度分別在 8.56 ～68.48 μg/mL，24.48 ～195.84 μg/mL，80.72 ～645.76 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創(chuàng)木酚甘油醚峰面積的 RSD分別為0.91%，0.79%，0.92%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于配制0，0.5，1.0，2.5，4.0，8.0 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創(chuàng)木酚甘油醚峰面積的 RSD分別為0.43%，0.61%，0.64%(n=6)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為070501)樣品6份，依法測(cè)定，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創(chuàng)木酚甘油醚含量的 RSD分別為0.49%，0.59%，0.55%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn):精密吸取混合對(duì)照品貯備液4，5，6 mL各3份，分別置50 mL量瓶中，加入陰性樣品1 mL，加水稀釋至刻度，依法測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品適量，依法測(cè)定，記錄峰面積，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

3 討論

本試驗(yàn)采用二極管陣列檢測(cè)器，通過(guò)對(duì)3組分進(jìn)行在線(xiàn)光譜檢測(cè)，結(jié)果磷酸可待因在213 nm和285 nm、鹽酸偽麻黃堿在206 nm和257 nm、愈創(chuàng)木酚甘油醚在222 nm和273 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。由于本品中磷酸可待因的含量?jī)H為愈創(chuàng)木酚甘油醚的1/10，為了能同時(shí)檢測(cè)3組分含量，決定以215 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在此波長(zhǎng)處，3組分都有較大吸收，且有相對(duì)均衡的響應(yīng)值。

本品是堿性藥物和中性藥物的混合物，同時(shí)須考慮游離愈創(chuàng)木酚等有關(guān)物質(zhì)和矯味劑、防腐劑等輔料的干擾。為此，筆者參考文獻(xiàn)[1-3]，首先通過(guò)選擇緩沖鹽的種類(lèi)、濃度及pH來(lái)優(yōu)化色譜條件。結(jié)果隨著pH增大，其堿性藥物磷酸可待因和鹽酸偽麻黃堿的保留時(shí)間延長(zhǎng)，但峰形變差，至pH偏酸性時(shí)，堿性藥物的保留很差，不能得到較好的分離。因此加入離子對(duì)試劑，使之與堿性藥物離子生成疏水性離子對(duì)，增加其保留時(shí)間及改變選擇性。在本試驗(yàn)的色譜條件下，各組分能達(dá)到較好的分離，且峰形對(duì)稱(chēng)，可用于本品中3個(gè)組分的同時(shí)測(cè)定。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

[1]魏雪芳，杜銀簽.反相離子對(duì)HPLC法測(cè)定博士止咳露中多個(gè)成分的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，15(3):164-166.

[2]李永慶，田子新，趙 文，等.高效液相色譜法測(cè)定雷登泰口服液中愈創(chuàng)木酚甘油醚、鹽酸偽麻黃堿和氫溴酸右美沙芬的含量[J].藥物分析雜志，2000，20(2):97-99.

[3]杜碧瑩.HPLC法同時(shí)測(cè)定美敏偽麻口服溶液中3組分的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24(3):249-250.