任貽軍，周菁麗，李紀元，李華榮，高逢喜，周 海

(1.湖北省荊州市中心醫(yī)院，湖北 荊州 434020; 2.鄖陽醫(yī)學院藥學系，湖北 十堰 442000)

排石康顆粒劑是由車前草、雞內金、金錢草、海金砂、石葦、冬葵子、木通、瞿麥、牛膝、甘草等組成的純中藥制劑，具有清濕熱、利尿、排石的功效，臨床上主要用于泌尿系結石、腎盂腎炎和膽囊炎的治療以及體外碎石后的輔助治療，效果顯著。方中車前草、木通和牛膝均含齊墩果酸，為控制制劑質量，保證臨床用藥安全有效，筆者結合本院實際并參考有關文獻[1－7]，用高效液相色譜法測定排石康顆粒劑中齊墩果酸的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);CPA－1245型精密電子分析天平(德國賽多利斯公司);UV－2201型紫外分光光度儀(日本島津);KQ－100E型超聲波清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)。齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110709－200505);排石康顆粒劑(荊州市中心醫(yī)院，批號分別為080520，081023，090311);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Eclipse XDB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈－0.4%磷酸溶液(85∶15);流速:1 mL/min;檢測波長:208 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。在此色譜條件下，齊墩果酸的保留時間約為13.8 min。

2.2 溶液制備

稱取齊墩果酸對照品約9.6 mg，精密稱定，置10 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品貯備液;精密量取對照品貯備液1 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取排石康顆粒劑5 g，研碎，稱取約2 g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理30 min，過濾，加鹽酸 2 mL，水浴水解 3 h，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用 0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方工藝制成缺齊墩果酸的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾性試驗:分別取2.2項下3種溶液，進樣10 μL，記錄色譜圖。結果供試品溶液及對照品溶液色譜在相同保留時間處有吸收峰，陰性對照品則無，樣品中齊墩果酸峰與其他峰完全分離，分離度較好，表明陰性對照品溶液對齊墩果酸的含量測定無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取齊墩果酸對照品貯備液，置10 mL棕色量瓶中，用流動相稀釋成 2.4，4.8，9.6，19.2，28.8，38.4 μg/mL的系列溶液，分別精密吸取10 μL，依法測定。以峰面積(Y)為縱坐標、齊墩果酸質量濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=5.5886 X －0.2729，r=0.9998(n=6)。結果表明，齊墩果酸質量濃度在2.4～38.4 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，平行測定6次。結果峰面積的 RSD=0.56%(n=6)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，在 0，2，4，6，8，12 h 時分別進樣 10 μL。結果峰面積的 RSD=1.57%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批樣品6份，分別按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定。結果峰面積的 RSD=1.54%(n=6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為081023)6份，分別精密加入一定量的齊墩果酸對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 齊墩果酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL進樣，每批樣品平行測定3次，按外標法計算齊墩果酸含量。結果批號為080520，081023，090311的3批樣品中，齊敦果酸含量分別為 0.3122，0.2787，0.3286 mg/g(n=3)。

3 討論

排石康顆粒劑成分復雜，測定干擾較大，經(jīng)反復篩選，再考慮甲醇的截止波長為205 nm，乙腈的截止波長為190 nm[8]，最后選定的流動相為乙腈－0.4%磷酸溶液(85∶15)。采用此流動相，基線平衡時間快，樣品中齊墩果酸峰形好，與雜質峰的分離度也較好，保留時間合適。通過對超聲提取時間(20，30，40，50 min)的考察，發(fā)現(xiàn)30 min足以將樣品中的齊墩果酸提取完全;對于水解時間，考察了1，2，3，4，5 h，結果以 3 h 最適合。

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[8]傅若農.色譜分析概論[M].第2版.北京:化學工業(yè)出版社，2005:202.