白音，楊磊，郭濤，夏東亞，趙東祥，李強(qiáng)，項(xiàng)勇（1.內(nèi)蒙古赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院，赤峰市0000；.沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽(yáng)市 110016；3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院，沈陽(yáng)市 110016；.解放軍第313醫(yī)院赤峰臨床部，赤峰市 0000）

酒石酸唑吡坦是一種新型鎮(zhèn)靜催眠藥，是γ-氨基丁酸A型（GABAA）-苯二氮類受體激動(dòng)藥，選擇性作用于大腦的ω1苯二氮受體亞型而達(dá)到鎮(zhèn)靜催眠作用。臨床用于治療失眠，以及用作手術(shù)前用藥。酒石酸唑吡坦在健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)在國(guó)內(nèi)、外已有文獻(xiàn)報(bào)道，但是未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道酒石酸唑吡坦在蒙古族人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)的研究文獻(xiàn)。我國(guó)是一個(gè)多民族的國(guó)家，各民族間遺傳背景、生活環(huán)境、飲食習(xí)慣等存在的差異，可能影響藥物的體內(nèi)過(guò)程，可能出現(xiàn)藥物效應(yīng)的民族差異。本文首次通過(guò)研究蒙古族、漢族兩民族單劑量口服酒石酸唑吡坦后的藥動(dòng)學(xué)，比較兩者之間的差異，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括600型四元泵、717自動(dòng)進(jìn)樣器、2475熒光檢測(cè)器、Empower色譜工作站（美國(guó)Waters公司）。

1.2 試藥

酒石酸唑吡坦片（法國(guó)賽諾菲安萬(wàn)特公司，規(guī)格：每片10 mg，批號(hào)：7T028）；酒石酸唑吡坦對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100367-200501）；內(nèi)標(biāo)：鹽酸阿夫唑嗪對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100728-200501）；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.02 mol·L－1磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調(diào)pH值至3.5）（25∶75）；流速：1.0 mL·min－1；激發(fā)波長(zhǎng)：254 nm；發(fā)射波長(zhǎng)：390 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 受試者的選擇

漢族健康志愿者10名，男、女各5名，年齡（22.0±0.9）歲，體質(zhì)量（55.0±4.9）kg，身高（164±5）cm，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（20.4±1.2）kg·m－2。蒙古族健康志愿者10名，男、女各5名，年齡（20.8±1.3）歲，體質(zhì)量（57.8±5.0）kg，身高（168±6）cm，BMI（20.4±1.3）kg·m－2。所有受試者試驗(yàn)前進(jìn)行體檢、心電圖、血常規(guī)和肝腎功能檢查均正常后才可入選參加試驗(yàn)，且試驗(yàn)前15 d未服用其它藥物。其父母、祖父母、外祖父母3代均為同一民族婚配。該試驗(yàn)方案經(jīng)過(guò)沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)。受試者均為自愿參加且在試驗(yàn)前簽署知情同意書(shū)。

2.3 給藥方案與血樣采集

健康志愿者用藥前禁食1夜，于次日早晨空腹單劑量服用酒石酸唑吡坦片1片（相當(dāng)于唑吡坦10 mg）后，2 h后方可飲水，4、9 h統(tǒng)一進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)餐。受試者于服藥前0 h及服藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、9、12 h時(shí)采前臂靜脈血4 mL。離心分離血漿，于－25℃冷凍保存至測(cè)定。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)不良反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)和記錄。

2.4 血漿樣品處理

取血漿0.5 mL，分別加入甲醇100 μL、內(nèi)標(biāo)溶液（50 μg·L－1鹽酸阿夫唑嗪甲醇溶液）50 μL、4.0 mol·L－1氫氧化鈉溶液50 μL，渦旋混合1 min。加無(wú)水乙醚5 mL，渦旋混合3 min，3 000 r·min－1離心10 min，分取上層有機(jī)相于另一試管中，于37℃氮?dú)饬飨麓蹈桑瑲埩粑锛尤肓鲃?dòng)相100 μL溶解，取20 μL進(jìn)樣分析。

2.5 數(shù)據(jù)處理

用孫瑞元編制的DAS Ver 2.0藥動(dòng)學(xué)軟件，根據(jù)擬合度值選擇房室模型和權(quán)重，并計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。蒙、漢兩民族受試者藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。

3 結(jié)果

3.1 方法學(xué)驗(yàn)證

3.1.1 專屬性考察：空白血漿、空白血漿+酒石酸唑吡坦對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)，蒙、漢兩民族受試者服藥后的血漿樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

由圖1可知，酒石酸唑吡坦與內(nèi)標(biāo)分離良好，酒石酸唑吡坦與內(nèi)標(biāo)的峰形好，保留時(shí)間分別為9.3、5.3 min，血漿中的內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取空白血漿0.5 mL，依次加入系列酒石酸唑吡坦對(duì)照品溶液100 μL，使酒石酸唑吡坦血藥濃度為2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、250.0 μg·L－1，按“2.4”項(xiàng)下方法操作并進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。以血漿樣品中待測(cè)物濃度（X）為橫坐標(biāo)，待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)，用加權(quán)（W＝1/X2）最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得直線回歸方程Y＝－0.022+0.041X（r＝0.999 4）。結(jié)果表明，酒石酸唑吡坦血藥濃度在2.0～250.0 μg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)限為2 μg·L－1。

3.1.3 回收率與精密度試驗(yàn)：取健康受試者空白血漿0.5 mL，制備成酒石酸唑吡坦血藥濃度為5.0、50.0、200.0 μg·L－1的低、中、高3種濃度的質(zhì)量控制樣品，進(jìn)行方法回收率及精密度試驗(yàn)，結(jié)果日內(nèi)、日間精密度均小于8.8%；另以待測(cè)物的峰面積與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)液直接進(jìn)樣的峰面積的比值計(jì)算提取回收率，結(jié)果提取回收率均大于58%，滿足測(cè)試要求。精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝22）Tab 1Results of precision and recovery tes（t±s ，n＝22）

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝22）Tab 1Results of precision and recovery tes（t±s ，n＝22）

加入量/μg·L－1 5.0 50.0 200.0日內(nèi)RSD/%1.2 1.8 4.2測(cè)得量/μg·L－1 4.8 50.7 206.7方法回收率/%96.00 101.40 103.35日間RSD/%8.8 3.5 1.7提取回收率/%57.2±2.9 66.0±2.8 67.2±4.2

3.1.4 穩(wěn)定性考察：分別將血漿樣品于室溫放置4 h和8 h，于－25℃放置并凍融3次，－25℃放置1個(gè)月，以考察其穩(wěn)定性。結(jié)果，除高濃度質(zhì)控樣品凍融第3次RSD為10%以外，其他各條件下各濃度樣品的RSD均＜10%，表明在上述條件下血漿樣品基本穩(wěn)定。

3.1.5 質(zhì)控樣品：配制酒石酸唑吡坦血漿濃度為5.0、50.0、200.0 μg·L－1的低、中、高3種濃度的質(zhì)量控制樣品，同時(shí)保存，與受試者血漿樣品隨行測(cè)定，質(zhì)量控制樣品的測(cè)定結(jié)果符合要求（在±15%之內(nèi)）。

3.2 藥-時(shí)曲線

蒙古族、漢族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后，在不同時(shí)間點(diǎn)的平均藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2。

圖2 蒙、漢兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后的平均藥-時(shí)曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of zolpidem tartrate in Han and Mongolian healthy volunteers after a single oral dose of 10 mg zolpidem tartrate

3.3 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及其蒙、漢兩民族的比較

用DAS Ver 2.0藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行房室模型的擬合，蒙、漢兩民族均符合一室開(kāi)放模型。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。兩民族間的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)t檢驗(yàn)，結(jié)果無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。表明酒石酸唑吡坦在兩民族人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程無(wú)顯著性差異。

3.4 安全性評(píng)價(jià)

表2 蒙、漢兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦10 mg后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tab 2 Pharmacokinetic parameters of zolpidem tartrate in Han and Mongolian healthy volunteers after a single dose of 10 mg zolpidem tartrate

在本試驗(yàn)中，兩民族受試者單劑量口服酒石酸唑吡坦片10 mg以后，均有不同程度不良反應(yīng)發(fā)生，其中，蒙古族1名受試者發(fā)生嘔吐，漢族有3名受試者主訴有惡心等胃腸道不良反應(yīng)，與藥品說(shuō)明書(shū)上提示的不良反應(yīng)一致，這可能與首次空腹服用酒石酸唑吡坦片有關(guān)，進(jìn)食后上述癥狀減輕或消失。

4 討論

研究結(jié)果表明，酒石酸唑吡坦在蒙、漢兩民族健康受試者體內(nèi)過(guò)程均符合一室開(kāi)放模型，其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，蒙古族組Cmax較漢族組Cmax稍高；AUC0～12較漢族組稍大，t1/2較漢族組稍長(zhǎng)，但是各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

雖然，蒙、漢兩民族在口服單劑量酒石酸唑吡坦后，其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異，但是無(wú)論是漢族還是蒙古族，其各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在一定個(gè)體差異，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[1～3]。由于酒石酸唑吡坦的代謝受細(xì)胞色素P450（CYP）異構(gòu)酶與CYPA4共同作用，CYPA4具有多態(tài)性，在蒙、漢兩民族健康志愿者中，也體現(xiàn)了這種個(gè)體差異性。本試驗(yàn)方法可用于人體內(nèi)灑石酸唑吡坦的藥動(dòng)學(xué)研究，其結(jié)果為酒石酸唑吡坦的個(gè)體化用藥提供了理論依據(jù)。

[1] 宋洪杰，李 珍，石 晶，等，高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定人血漿中酒石酸唑吡坦的濃度[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2001，36（5）：333.

[2] 劉治軍，殷 琦，李可欣，等，國(guó)產(chǎn)酒石酸唑吡坦的生物利用度和生物等效性研究[J].中國(guó)新藥雜志，2005，14（8）：1 036.

[3] 熊玉卿，姜 敏，戴 群.酒石酸唑吡坦在中國(guó)健康受試者體內(nèi)的生物等效性研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2001，36（11）：748.