李曉云，高玉紅,2，路義鑫*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.黑龍江畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 雙城 150111）

動(dòng)物線蟲病是危害動(dòng)物健康的主要寄生蟲病之一，給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。多拉菌素（Doramectin，DOR）是目前治療和預(yù)防動(dòng)物線蟲效果最優(yōu)秀的抗寄生蟲藥物之一。驅(qū)蟲機(jī)制主要是引起蟲體谷氨酸控制氯離子通道開放，使神經(jīng)休止電位超級(jí)化，導(dǎo)致蟲體神經(jīng)傳導(dǎo)受阻發(fā)生麻痹而驅(qū)蟲[1]。目前，在獸醫(yī)臨床使用的多拉菌素制劑多為注射劑，由于注射給藥需要一定的專業(yè)技能，且對局部有較強(qiáng)的刺激性，相對比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力。基于此，本教研室自行配制了多拉菌素的透皮給藥制劑—澆潑劑，此劑型具有操作簡單，使用方便，對機(jī)體刺激性小等優(yōu)點(diǎn)，且可避免口服給藥可能發(fā)生的肝首過效應(yīng)及胃腸滅活，降低個(gè)體差異，維持恒定的血藥濃度，延長藥物作用時(shí)間和增強(qiáng)療效[2]。本試驗(yàn)通過多拉菌素澆潑劑對小鼠消化道線蟲的藥效學(xué)研究，闡明多拉菌素澆潑劑對小鼠線蟲的驅(qū)殺效果及用藥劑量，為多拉菌素澆潑劑的臨床推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

0.5%多拉菌素澆潑劑，本教研室自行配制。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

140只健康普通級(jí)成年昆明小鼠，體重28±2 g，雌雄各半，購自哈爾濱市某實(shí)驗(yàn)鼠類養(yǎng)殖場。

1.2 方法

將140只小鼠隨機(jī)分為4組，每組35只，分別為低、中、高劑量組（L、M、H組）及空白對照組（C組），用藥劑量分別為2、5、15 mg·kg-1BW，空白對照組不給藥，用藥方式為一次性經(jīng)皮給藥。每組于用藥后1、7、14、21、28、35和45 d分別剖殺5只，觀察計(jì)數(shù)其腸道內(nèi)蟲體的數(shù)量。根據(jù)用藥組與對照組蟲體數(shù)量的差異，得出多拉菌素澆潑劑的驅(qū)蟲效果。

小鼠腸道蠕蟲檢查方法按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[3]。首先將小鼠處死，然后打開胸腹腔，分別將胃、小腸、盲腸、結(jié)腸、直腸放入生理鹽水中剪開，于36℃溫箱中靜置30 min，刮取腸壁黏膜，用反復(fù)洗滌沉淀法收集各種蟲體并計(jì)數(shù)，對收集到的蠕蟲按常規(guī)方法固定或透明，置于顯微鏡下進(jìn)行蟲體鑒定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

借助Excel和SAS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所得數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示，組間 t檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 剖檢線蟲的形態(tài)學(xué)觀察

蠕蟲學(xué)剖檢發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)小鼠不同程度地感染有兩種線蟲，分別為隱匿管狀線蟲（Syphacia obvelata）和四翼無刺線蟲（Aspiculuris tetraptera）。隱匿管狀線蟲頸翼膜窄小而平緩，口孔簡單，蟲體從口孔至體中央處體徑逐漸增加，其食道球?yàn)閳A形。雌蟲長3.45～5.95 mm，陰門位置比較靠前，尾部長而細(xì)尖，卵為半橢圓形。雄蟲長1.25～1.65 mm，尾部向腹面彎曲，有一細(xì)長的交合刺，有引器，雄蟲體型極小，眼觀如同短鼠毛。一般肉眼可以憑借體型區(qū)別雌蟲與雄蟲，做出初判（見圖1）。四翼無刺線蟲口孔兩旁有明顯的半橢圓形頭泡，頸翼膜發(fā)達(dá)呈箭狀，食道球?yàn)闄E圓形，雌蟲長2.85～3.75 mm，陰門位于蟲體前約1/3處，尾部呈平緩圓錐狀，蟲卵為橢圓形。雄蟲長1.95～3.55 mm，無交合刺和引器，尾向腹面彎曲，有寬尾翼（見圖2）。

圖1 隱匿管狀線蟲形態(tài)學(xué)觀察Fig.1 Morphological observation of Syphacia obvelata

隱匿管狀線蟲檢出部位主要為盲腸，四翼無刺線蟲檢出部位主要為大腸。對照組35只小鼠均檢出隱匿管狀線蟲，感染率100%，感染強(qiáng)度12～328條·只-1，其中僅有5只檢出四翼無刺線蟲，感染率為14.3%，感染強(qiáng)度1～8條·只-1，可見隱匿管狀線蟲感染率和感染強(qiáng)度均比四翼無刺線蟲高，隱匿管狀線蟲為昆明系小鼠線蟲的優(yōu)勢種。

隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲均為鼠類易感的腸道寄生線蟲，兩種線蟲在生活史中均無需中間宿主，主要通過蟲卵經(jīng)口感染。隱匿管狀線蟲有在肛周產(chǎn)卵的習(xí)性，蟲卵產(chǎn)出6 h后即有感染力；四翼無刺線蟲卵隨糞便排至外界，27℃下6 d后發(fā)育到感染期。可見，隱匿管狀線蟲引起感染的機(jī)會(huì)更多一些，可能是通過動(dòng)物間相互舔舐，或食入被蟲卵污染的食物和水等使該蟲在種群內(nèi)快速傳播。

2.2 驅(qū)蟲效果觀察

用藥后各組小鼠檢獲的線蟲數(shù)量見表1及圖3。

圖2 四翼無刺線蟲形態(tài)學(xué)觀察Fig.2 Morphological observation of Aspiculuris tetraptera

表1 應(yīng)用多拉菌素澆潑劑后各組小鼠檢出線蟲蟲體數(shù)（±S,n=5）Table 1 Number of nematodes detected in mice of each group after drug application(±S,n=5)

表1 應(yīng)用多拉菌素澆潑劑后各組小鼠檢出線蟲蟲體數(shù)（±S,n=5）Table 1 Number of nematodes detected in mice of each group after drug application(±S,n=5)

注：L-低劑量組；M-中劑量組；H-高劑量組；C-空白組。小寫字母不同為差異顯著（P＜0.05）；大寫字母不同為差異極顯著（P＜0.01）；相同為無顯著性差異（P＞0.05）。Note∶L-Low-dose group;M-Middle-dose group;H-High-dose group;C-Control group.Different lowercase letters represent significant difference(P＜0.05);different capital letters represent extremely significant difference(P＜0.01);the same represent no significant difference(P＞0.05).

組別G r o u p s L C 7 d 0 1 6 4.9 5±5.3 7 1 d 0 8 9.4 8±4.2 3 1 4 d 0 8 7.4 6±6.3 5 2 1 d 0 6 3.0 4±6.9 2 4 5 d 6 1.6 4±8.4 3 B b d 1 1 3.4 3±1 3.9 7 A a 3 5 d 4 6.3 5±9.8 2 B b d 1 2 2.4 6±1 2.9 6 A a 2 8 d 1 3.5 9±2.3 2 9 7.3 5±6.5 8 M 0 0 0 0 4 2.4 4±5.2 3 B b c 1 8.2 9±6.1 3 B b c 0 H 0 0 0 0 0 2 6.4 3±8.5 4 B b c 3 7.2 7±5.6 2 B b c

圖3 多拉菌素澆潑劑對小鼠消化道線蟲驅(qū)蟲效果Fig.3 Insecticidal effect of doramectin pour-on on gastrointestinal nematodes in mice

多拉菌素澆潑劑一次給藥驅(qū)蟲，對隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲驅(qū)除效果明顯，用藥后1 d，低、中、高各劑量組蟲體即被100%驅(qū)除，可見驅(qū)蟲效果是明顯快速的。同時(shí)可知，多拉菌素澆潑劑對這兩種線蟲的未成熟蟲體（童蟲）也有驅(qū)除作用，在此期間，剖檢的腸道中未見童蟲階段的蟲體?？梢姸嗬貪矟妱┠苡行?qū)除小鼠體內(nèi)線蟲。

依據(jù)小鼠再感染寄生蟲的時(shí)間，可確定在小鼠體內(nèi)的殘效期。低、中、高劑量組蟲體被完全驅(qū)除的藥效持續(xù)時(shí)間分別超過21、28和28 d，這期間各劑量用藥組小鼠體內(nèi)檢測不到線蟲。低劑量組小鼠于給藥后第28天后出現(xiàn)蟲體，中、高劑量組小鼠第35天后出現(xiàn)蟲體，可見多拉菌素澆潑劑預(yù)防寄生蟲再感染的有效時(shí)間較長。對第35天和第45天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢出的線蟲數(shù)量進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)，低、中、高劑量組檢出的線蟲數(shù)量均極顯著低于對照組（P＜0.01），中、高劑量組顯著低于低劑量組（P＜0.05），但中、高劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。由試驗(yàn)結(jié)果可推測適宜劑量的多拉菌素澆潑劑在治療小鼠線蟲時(shí)，在其體內(nèi)維持有效的藥物濃度時(shí)間至少為28 d。因中、高劑量組檢測到的線蟲數(shù)量差異無顯著性（P＞0.05），提示多拉菌素澆潑劑驅(qū)殺小鼠線蟲時(shí)的最佳用藥劑量是5 mg·kg-1·BW-1。

藥效持續(xù)期后小鼠重新感染線蟲，隱匿管狀線蟲出現(xiàn)較早，數(shù)量較多，四翼無刺線蟲出現(xiàn)較晚，數(shù)量相對較少，與對照組剖檢蟲體數(shù)量一致，說明昆明小鼠自然感染線蟲以隱匿管狀線蟲占優(yōu)勢；同一只鼠體內(nèi)既有成蟲又有童蟲，童蟲大小不一，表明是不同批次反復(fù)感染的?？梢娎ッ餍∈髮煞N線蟲不但是易感的而且對再感染可能缺乏有效的抵抗力，提示多拉菌素澆潑劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)一定要及時(shí)進(jìn)行二次或多次給藥，防止反復(fù)感染以徹底驅(qū)蟲。

3 討論與結(jié)論

國內(nèi)上市的多拉菌素劑型只有注射劑，商品名為“通滅”，因劑型單一價(jià)格較高目前只有在大型的種用畜禽場應(yīng)用。隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，對動(dòng)物醫(yī)學(xué)用藥的簡便、高效、安全以及減少應(yīng)激等提出了較高的要求。澆潑劑是藥物通過皮膚吸收的一種給藥新劑型，藥物應(yīng)用于皮膚上后，穿過角質(zhì)層，使藥物以恒定或接近恒定的速度透過皮膚，進(jìn)入血液循環(huán)而發(fā)揮全身治療作用的劑型，作用時(shí)間長，用藥順應(yīng)性好，其研究一直備受關(guān)注。傳統(tǒng)的獸醫(yī)口服和注射給藥對家禽，特別是幼畜，造成的應(yīng)激較大，透皮給藥恰恰可以克服這方面的不足，現(xiàn)已有商品化的伊維菌素澆潑劑供應(yīng)。目前有關(guān)多拉菌素澆潑劑的報(bào)道不多，國外的研究表明，多拉菌素澆潑劑應(yīng)用于動(dòng)物體內(nèi)外寄生蟲病的預(yù)防和治療效果顯著[4-5]，和伊維菌素澆潑劑相比，多拉菌素澆潑劑血藥濃度高，持續(xù)時(shí)間長[6]。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染寄生蟲，不僅影響動(dòng)物自身健康，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，還可引起人獸共患疾病，威脅人類健康。動(dòng)物體內(nèi)外寄生蟲感染情況與飼養(yǎng)環(huán)境因素及個(gè)體反應(yīng)性差異有關(guān)[7]。在發(fā)達(dá)國家，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育和管理水平較高，寄生蟲已接近消滅水平，我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物事業(yè)起步較晚，直到2002年才取消普通級(jí)大小鼠。普通級(jí)小鼠飼養(yǎng)于開放環(huán)境，腸道蠕蟲感染率很高，隱匿管狀線蟲、四翼無刺線蟲和短膜殼絳蟲為主要蟲種，其中線蟲的感染更為普遍和嚴(yán)重[8-10]。本試驗(yàn)中，對照組小鼠100%感染線蟲，感染強(qiáng)度12～328條·只-1，表明昆明小鼠感染線蟲情況較為嚴(yán)重，這可能與所選取動(dòng)物均為普通級(jí)，飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)中有關(guān)。經(jīng)蠕蟲學(xué)剖檢共發(fā)現(xiàn)2種線蟲，分別為隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲，其中隱匿管狀線蟲感染率和感染強(qiáng)度均比四翼無刺線蟲高，與文獻(xiàn)報(bào)道的情況一致[10]，可見實(shí)驗(yàn)小鼠感染的線蟲主要為隱匿管狀線蟲，該寄生蟲生活史屬直接型（即不需要中間宿主），鼠主要通過食入混在食物和墊料中的蟲卵而感染，一旦被感染很難徹底驅(qū)除，需重建鼠群。有些清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)小鼠中也檢出了隱匿管狀線蟲[11]，可能與飼料、墊料滅菌不徹底，導(dǎo)致蟲卵進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)有關(guān)。

多拉菌素澆潑劑用于小鼠給藥劑量的確定。首先根據(jù)動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)體重及不同種屬動(dòng)物的體形系數(shù)，得出多拉菌素注射劑用于小鼠的劑量，然后根據(jù)多拉菌素澆潑劑和多拉菌素注射劑的給藥劑量關(guān)系[9]，可知多拉菌素澆潑劑用于小鼠的劑量為5 mg·kg-1BW。在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)設(shè)低、中、高劑量組，用藥劑量分別為2、5、15 mg·kg-1BW，劑量間梯度系數(shù)為2.5～3，通過驅(qū)蟲試驗(yàn)，摸索出最適劑量。多拉菌素澆潑劑驅(qū)殺小鼠體內(nèi)線蟲時(shí)，低劑量組小鼠于給藥后第28天可檢出線蟲，中劑量和高劑量組在第35天檢出線蟲?？梢姸嗬貪矟妱?qū)殺小鼠體內(nèi)線蟲，殘效期較長，效果明顯，其中中、高劑量組藥物效果最為顯著，藥物殘效期均達(dá)28 d以上?？辜纳x藥物的療效取決于藥物在寄生蟲寄生部位的藥物濃度和維持有效濃度的時(shí)間，而這些因素與藥物在動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)特征密切相關(guān)[6]。根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果推測適合劑量的多拉菌素在小鼠體內(nèi)維持有效的藥物濃度時(shí)間大約是35 d。

對第35天和第45天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢出線蟲數(shù)量進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)，低、中、高劑量組檢出的線蟲數(shù)均極顯著低于空白對照組（P＜0.01），中、高劑量組均顯著低于低劑量組（P＜0.05），而中、高劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）?？梢姸嗬貪矟妱┲?、高劑量組藥物效果最為顯著，驅(qū)殺小鼠體內(nèi)線蟲的藥物殘效期均超過28 d，據(jù)此，推薦劑量為中劑量組即5 mg·kg-1BW。從各試驗(yàn)組藥效維持時(shí)間來看，要徹底驅(qū)蟲凈化種群，必須按藥物的周期連續(xù)用藥。多拉菌素澆潑劑效果確實(shí)，但卻不像注射劑要求專業(yè)人員操作，該劑型操作簡單，使用方便，更適合在廣大農(nóng)村基層推廣使用。

消化道線蟲對畜牧養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重，畜禽感染線蟲后，往往生長發(fā)育受阻，增重緩慢，飼料報(bào)酬率降低，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。消化道線蟲感染率和感染強(qiáng)度均較高，原因之一是驅(qū)蟲不徹底，驅(qū)蟲間隔時(shí)間過長[10]。因而選擇高效低毒、使用方便的藥劑來防治，成了普遍關(guān)心的問題。多拉菌素用于驅(qū)殺畜禽體內(nèi)外寄生蟲，目前國內(nèi)報(bào)道的劑型只有注射劑，從本試驗(yàn)多拉菌素澆潑劑一次用藥即徹底驅(qū)除凈化小鼠消化道線蟲的角度來講是可取的，因此多拉菌素澆潑劑的研制及在臨床的推廣使用有著廣闊的前景和重大的實(shí)際意義。

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