唐勇軍,盧向陽,鄒 俊
(1.湖南工程學(xué)院,湖南 湘潭 411014;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),湖南 長沙 410128)
由于幾丁質(zhì)和殼聚糖特有的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)及生物學(xué)功能,人們對它們的研究越來越廣泛和深入,關(guān)于他們的報道也越來越多,涉及了醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生和環(huán)境等領(lǐng)域[1-4],相關(guān)產(chǎn)品也不斷出現(xiàn)。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中,它們發(fā)揮著重要的作用,產(chǎn)生了巨大的社會效益和環(huán)境效益,并有著廣闊的發(fā)展前景。
幾丁質(zhì)和殼聚糖是氨基多糖高分子聚合物,具有良好的成膜性和抑菌功能。用稀酸溶解幾丁質(zhì)或殼聚糖,將所得溶液噴施于果品、蔬菜后,可以形成無色透明薄膜。此膜具有防止果品、蔬菜失水,保持果品、蔬菜的原色原味,降低營養(yǎng)成分的流失等功能,也可以抑制微生物侵染,防止果品、蔬菜腐爛[5]。此外,幾丁質(zhì)、殼聚糖成膜后,能抑制果品、蔬菜的呼吸作用,并改變呼吸作用途徑,使其在貯藏過程中,糖酵解-三羧酸循環(huán)(EMP-TCA途徑)在總呼吸中所占比例下降,而磷酸戊糖途徑(HMP途徑)上升,呼吸底物自身的氧化性減少,提高了耐貯藏能力[6-7]。
超氧物岐化酶(SOD)是一種清除自由基的保護(hù)酶,它在過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)的共作用下,能清除細(xì)胞自由基,減少自由基對細(xì)胞膜的損傷,從而延緩細(xì)胞衰老。脂氧合酶(LOX)可以促進(jìn)膜脂過氧化,降低細(xì)胞膜的穩(wěn)定性,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)損傷。水茂興等研究表明,用殼聚糖對采后黃花梨處理后,果實SOD活性提高36.2%~133.3%(p<0.01),而脂氧合酶(LOX)活性顯著降低。用殼聚糖處理青椒后,其固形物、有機酸、可溶性蛋白質(zhì)和Vc等含量增加,丙二醛(MDA)減少,膜透性減小,其耐貯能力得到增強[8-9]。
幾丁質(zhì)和殼聚糖是帶正荷的陽離子聚合物,也是自然界唯一的堿性多糖,且無任何急性和慢性毒性。因此,在飼料添加劑和動物藥學(xué)上具有廣闊的應(yīng)用前景。幾丁質(zhì)和殼聚糖具有較高的陰離子交換能力,與膽汁酸有很好的結(jié)合能力,阻止膽汁酸的循環(huán),減少脂肪的吸收,降低動物產(chǎn)品中的膽固醇含量,提高產(chǎn)品質(zhì)量[10-11]。由于殼聚糖的抑菌活性,它可以抑制病原真菌繁殖,同時可促進(jìn)腸道有益菌的生長,改善小腸代謝功能,促進(jìn)動物生長。幾丁質(zhì)、殼聚糖可吸附H+、中和胃酸、保護(hù)胃粘膜,使體液呈堿性,提高機體免疫力,從而減少動物疾病的發(fā)生。馬小珍等在肉仔雞日糧中添加殼聚糖,發(fā)現(xiàn)腹脂(p<0.01)、皮下脂肪(p<0.05)、肌間脂肪(p<0.05)的沉積顯著降低,血清甘油三酯(p<0.05)、總膽紅素的含量(p<0.05)顯著減少,脂肪吸收也明顯減少[12]。柯葉艷等的實驗結(jié)果表明,口糧中添加3%殼聚糖,鵪鶉增重量和飼料利用率分別提高5%和6.7%,T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率提高42.15%(p<0.05),脂肪吸收降低,免疫機能增強,同時血液中甲狀腺激素水平發(fā)生顯著變化[13]。殼聚糖能激活巨噬細(xì)胞,誘發(fā)延發(fā)性超敏反應(yīng),產(chǎn)生循環(huán)抗體;能誘發(fā)T細(xì)胞,激活NK細(xì)胞;能誘發(fā)細(xì)胞因子,起到非特異性免疫機理作用。此外,與戌二醛交聯(lián)的殼聚糖對口蹄疫病毒有一定抗性,這種抗性可持續(xù)一周,在注射第3天達(dá)到最高峰。因此,殼降糖可作為一種免疫增強劑,用于口蹄疫苗或其它疫苗[14]。殼聚糖對動物創(chuàng)傷有治療作用,并已成功開發(fā)出制品。相關(guān)研究已證明了殼聚糖對感染性牛蹄皮炎和趾間腐爛的治療效果[15],在260例治療中,有250例內(nèi)芽組織形成良好,被治愈,而趾間腐爛和膿腫則全部治愈。
大量研究表明,由于幾丁質(zhì)和殼聚糖的抑菌活性,能對植物病原菌起到較好的抑制作用[16]。于漢壽等用殼聚糖處理小麥、水稻和油菜后發(fā)現(xiàn),殼聚糖對小麥紋枯病、水稻惡苗病和油菜菌核病都有不同程度的抑制作用,抑制率分別達(dá)到30%、80%和30%~50%,其中,小麥、水稻產(chǎn)量分別比對照增加了9.8%和15.47%[17-18]。殼聚糖對植物病害的抑制主要通過2種途徑來發(fā)揮作用。其一是誘導(dǎo)植物自身的防衛(wèi)反應(yīng),產(chǎn)生抗病特性。殼聚糖能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抵御病原物質(zhì)的病程相關(guān)蛋白(PRs),如植物抗毒素(phytoalexin)、幾丁質(zhì)酶(chitinase)、殼聚糖酶(chitosanase)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase)等[19-20]。植物抗毒素有明顯的抗菌活性,在幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶共同作用下,可以在體外抑制真菌生長。幾丁質(zhì)和殼聚糖也可誘導(dǎo)植物在病菌侵染部位木質(zhì)化形成一個物理屏障,阻止病原菌擴散,從而增強植物的抗病力。此外,還可誘使植物產(chǎn)生愈創(chuàng)葡聚糖,增強植物細(xì)胞壁。其二是直接抑制病原菌。殼聚糖能改變病原菌細(xì)胞膜的通透性和流動性,干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,阻斷病原菌的代謝,從而起到抑菌效果[21]。
幾丁質(zhì)抑制劑防治害蟲已引起重視,這種殺蟲劑微毒、高效、安全,能抑制昆蟲生長,幾丁質(zhì)合成導(dǎo)致昆蟲不能生成新的表皮,在脫皮變態(tài)時死亡。熊惠龍等用幾丁質(zhì)抑制劑防治松毛蟲,幾丁質(zhì)抑制劑對松毛蟲有較強的抑制作用和拒避作用,當(dāng)25%膠懸劑釋稀100倍時,殺蟲率高達(dá)100%,噴藥后3~5 h松毛蟲停止聚食,不危害針葉,死亡高峰期在施藥后第10~15天,直到25d還有蟲死亡[22]。另外,有報道證實,采用幾丁質(zhì)合成劑分別防治棉鈴蟲和儲糧甲蟲,都有比較好的效果[23]。
作為植物生長調(diào)節(jié)劑,殼聚糖的特異性比一般的植物激素強[24],它主要通過種子包衣,泡根和葉面噴施等方式來應(yīng)用。其中,種子包衣的應(yīng)用最為廣泛,效果也是最好的。師素云[25]等的實驗表明,用羧甲基殼聚糖處理玉米種子,可以明顯提高種子的發(fā)芽勢、發(fā)芽率和實生菌株。處理后,胚乳中α-淀粉活性酶、α-淀粉同工酶,以及葉片中葉綠素含量明顯提高,這表明羧甲基殼聚糖能加速種子萌發(fā)過程中胚乳淀粉的水解,為種子萌發(fā)提供充足的養(yǎng)分,有利于幼苗生長,對幼苗有明顯的生理調(diào)節(jié)功能。在玉米花期用羧甲基殼聚糖處理,玉米籽粒的谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸脫氫酶(GDH)以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的活性明顯增強,促使籽粒貯藏蛋白的含量增高,產(chǎn)量增加。Knoor等研究表明[26],殼聚糖與植物細(xì)胞壁成分——多聚半乳糖的醛酸結(jié)合后,細(xì)胞透性增加,低分子化合物泄露增多。他用殼聚糖包埋三色莧菜細(xì)胞后進(jìn)行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)從莧菜細(xì)胞中釋放的草酸鹽多于一般游離懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,這說明殼聚糖既可包埋細(xì)胞又能促進(jìn)細(xì)胞代謝物的排泄。
多聚糖是一類天然的土壤結(jié)構(gòu)改良劑,也是國外研究應(yīng)用較廣闊的一種改良劑。幾丁質(zhì)和殼聚糖屬于氨基多糖,含有豐富的C、N元素,能被微生物降解利用,作為植物生長的養(yǎng)分。幾丁質(zhì)和殼聚糖具有膠結(jié)土粒,促進(jìn)形成團聚體的能力。它們的分子上含有大量羥基,羥基與粘粒礦物晶體表面上的氫原子形成氫鍵,能將分散的土粒膠結(jié)在一起形成團聚體,疏水基覆蓋在粘粒表面,改變了粘粒的水合性,使形成的團聚體具有水穩(wěn)性。另外,幾丁質(zhì)和殼聚糖能改變土壤、根際和植物根組織微生物區(qū)系,促進(jìn)有益微生物的生長,抑制植物病原菌[27]。Hallmann用幾丁質(zhì)處理棉花根際后,發(fā)現(xiàn)棉花寄生線蟲基本被抑制[28]。幾丁質(zhì)和殼聚糖也能促進(jìn)一些真菌、細(xì)菌產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶和殼聚糖酶,抑制一些病原真菌的生長[29]。殼聚糖與可溶性蛋白合成的液體土壤改良劑,具有較好的穩(wěn)定性和可降解性,能改善土壤的團粒結(jié)構(gòu),降解后還能成為優(yōu)良的有機肥料。在復(fù)合肥料中,添加脫乙酰基殼聚糖溶液,可以成倍提高顆粒率,改善復(fù)合肥質(zhì)量。
綜上所述,由于其本身的生物學(xué)功能,及其無污染、可降解等性能,幾丁質(zhì)和殼聚糖在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域已顯示出巨大的應(yīng)用潛力。隨著研究的進(jìn)一步深入,它們將在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域發(fā)揮越來越重要的作用。
[1] Rinaudo M.Chitin and chitosan:Properties and applications[J].Prog.Polym.Sci.2006.31:603-632.
[2] Kurita K.Chitin and chitosan:functional biopolymers from marine crustaceans[J].Mar.Biotechnol.(NY)2006.8:203-226.
[3] Hakim L,Sabarudin A,Oshita K,et al.Synthesis of cross-linked chitosan functionalized with threonine moiety and its application to on-line collection/concentration and determination of Mo,V and Cu[J].Talanta.2008.74:977-985.
[4] Mostafa SA,Mahmoud M S,Mohamed Z K,Enan M R.Cloning and molecular characterization of chitinase from Bacillus licheniformis MS-3.J.Gen.Appl.Microbiol.2009.55:241-246.
[5] Hayes M,Carney B,Slater J,Bruck W.Mining marine shellfish wastes for bioactive molecules:chitin and chitosan——Part B:applications[J].Biotechnol J.2008.3:878-889.
[6] Dutta P K,Tripathi S,Mehrotra G K,et al.Perspectives for chitosan based antimicrobial films in food applications[J].Food Chem.2009.114:1173-1182.
[7] El Ghaouth A.Use of chitosan coating to reduce water loss and maintain quality of cucumber and bell peper fruits[J].Journal of Food Processing and Preservation,1991,15(5):359-368.
[8] Ishihara M,Obara K,Nakamura SF,et al.Chitosan hydrogel as a drug delivery carrier to control angiogenesis.J.Artif.Organs.2006.9:8-16.
[9] 水茂興,馬國瑞,陳美慈,等.殼聚糖對采后黃花梨果實膜脂過氧化和乙烯生成的影響[J].浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2001.27(5):541-545.
[10]Fvcntes M,Aguiar E.The effect of shark Cartilage and chitosan added to hen diets on egg yolk and plasma lipids[J].Pont Sci,1999(supp):79.
[11]Jung Kol LEE,Soo Un KIM,Jung Hoe KIM.Modification of chitosan to improve its Hypocholesterolemic Capacity[J].Bioscience,Biotechmlogy and biochemistry,1999,63(5):833-839.
[12]馬小珍,楊 燁,謝新東,等.殼聚糖對肉仔雞(公雞)生長性能和脂肪代謝的影響[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報,2001,16(4):30-34.
[13]柯葉艷,陳 杰,韓正康,等.殼聚糖對肉用鵪鶉生產(chǎn)性能、脂肪代謝、免疫及內(nèi)分泌機能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2001,13(4):49-51.
[14]李 冬,陳應(yīng)程,謝慶閣.改性殼聚糖免疫增強劑的安全穩(wěn)定性及其對口蹄疫病毒抵抗力試驗[J].中國獸醫(yī)科技,1999,29(5):26-27.
[15]Hearyk Struszczyk New.Applications of chitin and its derivatives in plant protection.In Henryk Straszczyk(eds).Application of chitin and chitosan[J].cancaster:Technomic Publishing Company,1997,129-139.
[16]Je J Y,Kim S K.Antioxidant activity of novel chitin derivative[J].Bioorg.Med.Chem.Lett.2006.16:1884-1887.
[17]于漢壽,吳漢章,張益明,等.殼聚糖拌種對小麥生長及紋枯病發(fā)生的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),1997,6:9-10.
[18]于漢壽,吳漢章,張益明,等.水溶性殼聚糖對水稻惡苗病和油菜菌核病的作用[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),1998,5:38-41.
[19]Itoh Y,Kawase T,Nikaidou N,et al.Functional analysis of the chitin-binding domain of family 19 chitinase from streptomyces griseus HUT6037:substrate-binding affinity and cis-dominant increase of antifungal function[J].Biosci.Biotechnol.Biochem.2002,66:1084-1092.
[20]M V Bhaskara Reddy,Panl Angers Fracois Castaigre,Joseph Anil.Chitosan Effects on Blackmold Rot and Pathogentic Factors Produced by Alternaria alternuta in Posharvest Tomatoes[J].Journal of the American society for horticaltural Science,2000,125(6):742-747.
[21]Day R B,Okada M,Ito Y,et al.Binding site for chitin oligosaccharides in the soybean plasma membrane[J].Plant Physiol.2001,126:1162-1173.
[22]熊惠龍,孫德瑩,董曉波.幾丁質(zhì)抑制殺蟲劑對林間松毛蟲的藥效試驗[J].林業(yè)科技通訊,1994,4:19-20.
[23]G D A Coppen.A Simple model to estimate the optimal separaiom and swath width of ULV-sprayed barriers of chitin synthesis inhibitors(CSI)to control locust hopper bands[J].Crop Protection,1999,18(2):151-158.
[24]Katsuri Ohta.Effects of Chitosan with or withous Nitrogen Treatments on Seedling Growth in Enstoma grandiflorum(Raf)Shinn[J].Cv.Kairyou Wakamurasaki journal of the Japanese society for horticaltural science,2000,69(1):64-65.
[25]師素云,薛啟漢,劉藹民,等.殼聚糖對玉米生長的調(diào)節(jié)作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1998,11(2):32-36.
[26]Knoor D.Teutonico R A.Chitosan immobilization and perineabilization of amaranthus tricolor[J].Agri Food chem.1986,34:96.
[27]Synowiecki J,Al-Khateeb NA.Production,properties,and some new applications of chitin and its derivatives[J].Crit.Rev.Food Sci.Nutr.2003,43:145-171.
[28]J Hallmann.Chitin-mediated changes in bacterial communities of the soil rhizosphere and with in roots of cotton in relation to nematode control[J].Soil Biology and Biochemistry,1999,31(4):551-560.
[29]W De boor.Response of the chitinolytic microbial community to chitin amendments of dune soils[J].Biology and Fertility of soils,1999,29(2):170-177.