張 勇,石 銘,綦盛麟

(大連市第六人民醫(yī)院,遼寧大連 116031)

乙肝病毒攜帶者病毒基因分型與C基因啟動子及前C區(qū)變異的相關性分析

張 勇,石 銘,綦盛麟

(大連市第六人民醫(yī)院,遼寧大連 116031)

為探討乙型肝炎病毒基因分型與C基因啟動子(CP)及前C區(qū)變異(PC)的相關性,我們對89例乙型肝炎病毒攜帶者進行病毒基因分型,觀察其間的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 我院門診及住院乙肝病毒攜帶者89例,用ABI7500基因熒光定量對其進行病毒含量、基因分型、C基因啟動子(CP)及前C區(qū)變異(PC)檢測,取其外周血用《KL型免疫圖像分析儀》測其T淋巴細胞Ag-NORs活性,肝組織穿刺標本進行常規(guī)病理切片。

1.2 研究方法

1.2.1 乙肝病毒基因分型及C基因啟動子及前C區(qū)變異檢測 100 μ l待檢血清樣本模板提取嚴格按照提取試劑盒操作說明書操作;HBV DNA提取模板加入PCR擴增反應體系,反應條件:反應管先在50℃保溫5 min,然后94℃保溫5 min,再按 93℃30 s→60℃90 s循環(huán)40次;置ABI 7500全自動定量PCR儀上進行病毒基因分型及C基因啟動子及前C區(qū)變異檢測分析。

表1 引物設計:C基因啟動子前C區(qū)

1.2.2 肝組織病理檢測 穿刺標本至少在鏡下包括3個以上匯管區(qū),標本連續(xù)切片,蘇木精伊紅(HE)染色,鏡下觀察肝內(nèi)炎癥、組織結構改變及纖維化程度。

表2 炎癥活動度(G)與纖維化程度(S)分級標準[1]

1.2.3 T淋巴細胞核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)活性檢測 采用《KL型免疫圖像分析儀》測其T淋巴細胞Ag-NORs活性,結果以IS%表示。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理 結果經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理。

2 結果

2.1 不同病毒基因分型患者外周血中生物化學指標變化 見表3,B型與C型乙肝患者病毒含量、e抗原陰性率、PC%變異率有明顯差異:B型乙肝患者病毒平均含量明顯低于C型患者(P＜0.001);而e抗原陰性及PC%變異率明顯高于C型乙肝患者(P＜0.01)。兩者間CP%變異率無顯著性差異(P＞0.05)。

表3 病毒基因分型患者外周血中生物化學指標變化

2.2 C型基因患者CP與PC變化對肝組織及T淋巴細胞AgNORs活性影響 C型基因患者中,兩者的肝組織損傷程度有明顯的差異,CP變異組肝組織炎癥及纖維化程度明顯高于PC變異組(G1-G2/G0;S1-S2/S0-S1),PC變異組T淋巴細胞AgNORs活性明顯高于CP變異組。見表4

表4 CP與PC變化對肝組織及T淋巴細胞 AgNORs活性影響

3 討論

乙型肝炎病毒按照基因序列的不同可以分為A-H八個基因型,在我國主要是B、C型,不同的基因型有不同的臨床表現(xiàn)、病毒含量的改變及免疫功能的變化[2]。

HBV本身有極高的復制率,在病毒復制過程中由于其逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校對活性,而導致乙型肝炎病毒發(fā)生基因突變,基因突變廣泛存在于基因組的不同部位,基因組不同區(qū)段的變異性有顯著不同,HBV基因組S、C、P、X 區(qū) 、前 C 區(qū) 、前 S2、前S1 區(qū)變異性依次增高[3,4]。其中C基因啟動子(CP)及前C區(qū)(PC)變異是導致e抗原分泌減少。因此,臨床上對CP與PC變異率的檢測至關重要。

《2006西安病毒性肝炎會議乙肝病毒防治指南》中對乙肝病毒攜帶者治療的意見是對這部分患者進行肝組織病理穿刺檢查,觀察肝組織損傷程度,來進一步確診和相應治療,而現(xiàn)實中這些患者由于對肝穿的恐懼及不理解,很難接受肝穿檢測。國內(nèi)對乙肝病毒攜帶者的研究大多局限于病毒基因分型與病毒含量及療效關系,對乙肝病毒攜帶者進行病毒基因分型同時觀察PC與CP變異率,T淋巴細胞AgNORs含量與肝組織病變程度相關性,國內(nèi)未見相關報道。

我們在對患者進行肝組織穿刺的同時,利用實時熒光定量PCR技術對乙型肝炎病毒進行基因分型及CP與PC變異檢測發(fā)現(xiàn):乙型肝炎病毒攜帶者中,乙型肝炎病毒基因型B比C型更容易通過前C區(qū)變異誘導e抗原轉(zhuǎn)化,C型乙型肝炎病毒攜帶者病毒含量及e抗原陽性率高于B型乙肝病毒攜帶者。B型乙肝病毒攜帶者容易發(fā)生PC變異,而C型乙肝病毒攜帶者容易發(fā)生CP變異,C型乙肝病毒攜帶者中,PC與CP組比較,T淋巴細胞AgNORs含量明顯升高,肝組織炎癥及纖維化程度有明顯改善。C型乙肝病毒攜帶者中,PC與CP變化可間接反映肝組織的損傷程度,且PC比CP組T淋巴細胞Ag-NORs活性明顯升高。

[1]中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲會、肝病學分會.病毒性肝炎防治方案[S].中華肝臟雜志,2000,8(6):324.

[2]Buster EH,Janssen HL.Antiviral treatment for chronic hepatitis B virus infection-immune modulation or viral suppression[J].Med,2006,64:175.

[3]Tsubota A,Arase Y,Ren F,et al.Genotype may correlate with liver carcinogenesis and tumor characteristics in cirrhotic patients infected with hepatitis B virus subtype adw[J].J Med Virol,2001,65(2):257.

[4]Sugauchi F,Chutaputti A,Orito E et al.Hepatitis B virus genotypes and clinical manifestation among hepatitis B carriers in Thailand[J].J Gastroenterol Hepatol,2002,17(6):671.

1007-4287(2010)06-0929-02

2009-06-03)