王 勇

湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄樊市中醫(yī)院，湖北 襄樊 441000

二妙散，由蒼術(shù)、黃柏各等份組成，蒼術(shù)苦溫燥濕，黃柏苦寒、清熱燥濕，兩味合用，清熱燥濕之力較強(qiáng)，是臨床上治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基礎(chǔ)方。本文以與人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid ar thritis，RA）臨床特征最為接近的膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎（col lagen II-induced arthritis，CIA）大鼠模型，從整體角度研究二妙散對(duì)CIA大鼠的抗炎免疫作用，并對(duì)其療效機(jī)制進(jìn)行初步的探討。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物及分組 健康雄性Wistar大鼠，清潔級(jí)，體重（170±10）g。將大鼠隨機(jī)分為3組，模型組、正常組、治療組，每組12只。

1.1.2 藥品及試劑 藥品：二妙散水提液。試劑：牛Ⅱ型膠原；完全弗氏佐劑；IL-1β、TNF-α、IL-6放射免疫分析法測(cè)定試劑盒；兔抗鼠IgM抗體和IgG抗體。

1.1.3 儀器 放射免疫γ計(jì)數(shù)器；酶標(biāo)儀。

1.1.4 造模及給藥 除正常組外，其余2組按文獻(xiàn)方法[1]制備CIA模型，造模后第7天開始灌胃給藥，給藥劑量為1g/kg/d，按1ml/100g體重給藥，每天1次，連續(xù)4w，空白對(duì)照組和模型組灌服等容積蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 光鏡下觀察組織病理學(xué)（HE染色）計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：具體方法參考文獻(xiàn)[2]。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清抗CII抗體IgG、IgM含量，具體操作見(jiàn)說(shuō)明書。

1.2.3 細(xì)胞因子含量測(cè)定

采用放射免疫分析法：檢測(cè)血清和關(guān)節(jié)組織勻漿中IL-6、IL-1β和TNF-a的含量，具體操作按試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法 軟件用SPSS15.0，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 二妙散對(duì)CIA大鼠血清抗CII抗體IgG、IgM含量的影響見(jiàn)表1。

2.2 二妙散對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)炎病理計(jì)分的影響 見(jiàn)表2。

2.3 二妙散對(duì)CIA大鼠血清和組織勻漿中細(xì)胞因子的影響見(jiàn)表3。

表1

表2

表3

3 討論

RA 是一種以關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的非感染性炎癥為主的全身性自身免疫性疾病?，F(xiàn)代研究表明：二妙散水提取物進(jìn)行提取分離，以Pc·DTH為指標(biāo)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明二妙散中黃柏堿和HB-1為免疫抑制作用的主要成分，且二妙散的醇不溶部位雖不含生物堿也有明顯的免疫抑制活性[3]。

CIA模型是目前國(guó)際慣用的較理想的RA動(dòng)物模型，其臨床表現(xiàn)、病理學(xué)、免疫學(xué)改變和病理機(jī)制與人類RA相似。在本次實(shí)驗(yàn)所建立的CIA大鼠模型，觀察發(fā)現(xiàn)大鼠普遍出現(xiàn)與RA相似的發(fā)病機(jī)理。免疫33天血清抗CII抗體IgG、IgM水平顯著升高，炎癥關(guān)節(jié)觀察到滑膜組織、軟骨及骨破壞嚴(yán)重。

IL-1β、TNF-α和IL-6是重要的促炎細(xì)胞因子，其在RA中所起的作用已越來(lái)越被了解。研究表明，IL-1β和TNF-α在RA炎癥中起核心作用，介導(dǎo)了骨關(guān)節(jié)一系列的炎癥反應(yīng)。還參與調(diào)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞的增殖，與其它促炎細(xì)胞因子一起聯(lián)合介導(dǎo)了RA炎癥組織損傷。在本研究中，我們觀察二妙散水提取物能明顯抑制CIA大鼠血清的IL-1β、IL-6和TNF-α水平，對(duì)CIA大鼠血清升高的IL-6水平也有較好的抑制作用，推測(cè)這可能是二妙散水提取物抗RA的作用機(jī)理之一。

[1]Xiong Cai，Hua Zhou，Yuen Fan Wong，etal.Suppression of the onset and progression of col lagen-induced ar thritis in rats by QzFGJS，a preparation f rom an anti-arthritic Chinese herbal formula[J]．Journal of Ethno—pharmacology 2007（110）：39－48．

[2]Vander Hei jde DMFM. Radiographic imaging：‘the gold standard’for assessment of disease progression in rheumatoid ar thris[J].Rheumatology，2000，39（suppl.1）：9－16.

[3]陳婷，李昌勤，徐強(qiáng)．二妙散免疫抑制活性成分的研究[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，1995，1（1）：7．