張璐，趙峰，李春生，林子清

（中國刑事警察學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，沈陽 110035）

鴨子股骨組織形態(tài)學(xué)特征的研究

張璐，趙峰，李春生，林子清

（中國刑事警察學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，沈陽 110035）

目的研究鑒別鴨子股骨組織學(xué)的形態(tài)特征。方法取50只2年生以上成年北京鴨的左股骨中段做成骨骼組織學(xué)切片，經(jīng)過固定、脫鈣、冰凍骨骼組織切片及硫堇苦味酸染色，在顯微鏡下觀察，將顯微鏡下的圖像錄入電腦，利用專業(yè)軟件進(jìn)行分析、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。結(jié)果鴨子股骨骨單位形態(tài)大多為圓形和橢圓形，骨單位排列多無規(guī)律。內(nèi)、外環(huán)骨板分層不明顯，主要以呈層狀排列的梭形骨細(xì)胞的形式存在。內(nèi)環(huán)骨板多為較厚的板層狀骨，界限較明顯，外環(huán)骨板相對內(nèi)環(huán)骨板較薄，界限尚明顯。骨陷窩數(shù)量較多，在片子中未見到骨小梁，間骨板幾乎沒有。非哈氏管數(shù)量較少，平均每個(gè)視野一個(gè)左右。結(jié)論鴨子股骨組織學(xué)形態(tài)特征明顯，本研究數(shù)據(jù)為骨骼組織學(xué)的研究積累了資料，有助于種屬鑒別的開展，也為研究生物進(jìn)化提供了新的觀察指標(biāo)。

鴨子；股骨；骨組織；骨切片；種屬鑒別

鴨子是日常生活中常見的動物，但目前對鴨子骨骼的研究比較少。國內(nèi)外的學(xué)者也只是對其部分骨組織形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行了簡單的描述。本文對鴨子股骨組織學(xué)特征進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，不僅為生物的種屬鑒別提供了依據(jù)，還為生物進(jìn)化的研究提供了參考性資料。

1 材料與方法

1.1 材料

在集市上購買2年生以上成年北京鴨50只，雌雄不限，處死后取其左股骨的中段，備檢。處死的方法符合動物實(shí)驗(yàn)的倫理要求。

1.2 方法

1.2.1 固定：取上述檢材，將每段股骨中段鋸成厚3～5 mm的橫段，放入10%福爾馬林溶液中固定3～5 d。

1.2.2 脫鈣：分別按照murayama法和Alexander法配制甲酸脫鈣液和硝酸脫鈣液［1］。

1.2.3 包埋切片：將脫鈣后的骨組織流水沖洗24 h后，用冷凍組織包埋劑（OCT）包埋，放在英國BROTHER公司的冷凍切片機(jī)冷凍室內(nèi)3～5 min，使其完全凍結(jié)后，切成20 μm厚的薄片，放入無水乙醇中備用。

1.2.4 染色封片：按常規(guī)配制硫瑾/苦味酸染色液，室溫下，采用游離方法染色，用中性合成樹膠封片［2］。

1.3 切片觀察指標(biāo)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Nikon ECLIPSE 80i病理圖像處理系統(tǒng)× 200鏡下觀察哈氏系統(tǒng)的數(shù)量、形態(tài)、直徑、面積及排列，間骨板的數(shù)量、形態(tài)、排列、面積百分比、環(huán)層骨板形態(tài)，內(nèi)、外環(huán)骨板的厚度及相對厚度，非哈氏管的數(shù)量?！?00鏡下觀察哈氏系統(tǒng)環(huán)層骨板數(shù)，哈氏管直徑及面積，間骨板環(huán)層骨板數(shù)，骨陷窩數(shù)量、排列和面積。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 骨單位

鴨子股骨的骨單位大部分為圓形和橢圓形，且愈靠近內(nèi)環(huán)骨板骨單位愈多，面積愈大，邊界愈清晰，而外環(huán)骨板附近骨單位較少，面積較小，與周圍骨基質(zhì)分界不明顯。單位視野下骨單位數(shù)量較少，平均每個(gè)視野13.54±1.32個(gè)，每個(gè)視野最少的只有5個(gè)，最多可達(dá)24個(gè)，多數(shù)為10～17個(gè)之間。骨單位直徑平均為（112.88±7.02）μm，平均面積（9097.42± 2705.62）μm2，其中骨單位面積相差懸殊，小的只有幾千μm2，而大的可超過3萬μm2。以骨陷窩層數(shù)計(jì)數(shù)環(huán)層骨板數(shù)，有的只有1層，而有的可達(dá)7層，平均每個(gè)骨單位3.50±0.47層。哈氏管多為圓形和橢圓形，除少數(shù)退化骨單位的哈氏管特別大外，相對于骨單位，哈氏管比較小，平均直徑為（19.89±2.27）μm，平均面積為（232.70±88.98）μm2（見圖1）。

圖1哈氏系統(tǒng)×2 0 0F i g.1 H a s t e l l o y s y s t e ms×2 0 0

2.2 間骨板

鴨子股骨沒有發(fā)現(xiàn)明顯的間骨板。

2.3 內(nèi)、外環(huán)骨板

總體上內(nèi)環(huán)骨板較厚，平均（76.89±14.73）μm，平均相對厚度0.055 μm，邊界比較明顯。外環(huán)骨板比內(nèi)環(huán)骨板稍厚，平均厚（89.11±16.18）μm，平均相對厚度0.056 μm，邊界尚清楚。內(nèi)、外骨板厚薄都不均勻，厚的與薄的之間可以相差數(shù)倍，骨板內(nèi)有的可看到少量哈氏管及骨板層數(shù)和邊界都不清的不典型骨單位。

2.4 非哈氏管的數(shù)量

本實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)的非哈氏管主要為穿通管，只有幾張切片可看到，數(shù)量特別少。

2.5 骨陷窩

骨陷窩大而多，平均大小為（38.24±1.47）μm2，數(shù)量比較穩(wěn)定，每個(gè)視野下大部分為60～70個(gè)左右，平均每個(gè)視野（65.88±2.35）個(gè)，多數(shù)為橢圓形，排列不規(guī)則。

2.6 骨小梁

鴨子股骨幾乎沒有骨小梁，50張切片中，未見明顯的骨小梁。

3 討論

3.1 骨切片制作及染色條件的分析

骨組織在制作切片時(shí)，必須脫去鈣鹽成分。強(qiáng)酸脫鈣法脫鈣速度較快，但由于酸性過強(qiáng)，其酸化作用致組織結(jié)構(gòu)破壞，時(shí)間過長將影響染色效果，因此應(yīng)隨時(shí)觀察，檢測不出鈣質(zhì)成分時(shí)則應(yīng)立即終止脫鈣。弱酸脫鈣法脫鈣時(shí)間較長，脫鈣不完全切片時(shí)會感到阻力大，切片易碎、易裂、易產(chǎn)生皺折。

硫堇染色時(shí)間不確定，一般把切片染為棕黃色。染色時(shí)間還和染液使用的次數(shù)有關(guān)，隨著使用次數(shù)增加，染色時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長，所以應(yīng)隨時(shí)觀察染色程度［3］?？辔端崛旧珪r(shí)間經(jīng)比較以45 s染色效果較好，經(jīng)乙醇脫水，二甲苯透明等步驟后，骨陷窩、骨小管呈棕黑色，骨基質(zhì)為淡黃至棕黃色，結(jié)構(gòu)比較清晰。

3.2 骨組織特征分析

人的外環(huán)骨板走行不規(guī)則，波狀彎曲，環(huán)層骨板間有體積較小的菱形的骨單位。內(nèi)環(huán)骨板與骨密質(zhì)部的骨單位相連，有明顯的分界。內(nèi)環(huán)骨板較厚，波狀走行、連續(xù)。近內(nèi)環(huán)骨板處可見密集的直徑較小的骨單位。人類骨組織間骨板較多，面積百分比大，大多呈新月形結(jié)構(gòu)。有典型的骨小梁結(jié)構(gòu)。而鴨子股骨間骨板極少，幾乎沒有骨小梁結(jié)構(gòu)，骨單位和骨陷窩的排列不規(guī)則，據(jù)此特征可與人骨進(jìn)行鑒別［3～5］。

骨骼化是生物結(jié)構(gòu)復(fù)雜化的基礎(chǔ)，骨骼系統(tǒng)又是生物形態(tài)進(jìn)化的限制因素。本實(shí)驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果還提示我們處在生物進(jìn)化過程中不同階段的動物其骨骼的微細(xì)結(jié)構(gòu)也顯示出不同的進(jìn)化程度，因此本研究結(jié)果不僅能夠幫助我們鑒別種屬，而且還顯示出鴨子在生物進(jìn)化過程中屬于相對低等的動物，對考古學(xué)也有很重要的參考價(jià)值。

［1］Bruce A.Kimball，Elizabeth A.Mishalanie.Gas chromatographic determination of sodium monofluoroacetate as the free acid in an aqueous solvent［J］.J Chromatogr，1993，634（2）：289－296.

［2］龔志錦，詹榕洲.病理組織制片與染色技術(shù)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1994：280.

［3］張繼宗，王國吉，張懷東.人與動物骨組織特征的比較研究［J］.刑事技術(shù)，2007，（5）：16－18.

［4］張繼宗.骨骼種屬鑒定的組織學(xué)研究［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2001，17（3）：139－141.

［5］張繼宗.人類骨組織特征研究［J］.人類學(xué)學(xué)報(bào)，2008，27（4）：325－330.

（編輯 孫憲民，英文編輯 趙傳勝）

The Research of Histomorphological Characteristics of Duck Femora

ZHANG Lu，ZHAO Feng，LI Chun-sheng，LIN Zi-qing
（Department of forensic medicine，China Criminal Police University，Shenyang 110035，China）

ObjectiveTo study the histomorphological characteristics of duck femora.MethodsTake the middle fragment of 50 left duck femora to process histological slices.Observe slices under the microscope and input the image data into computer to conclude statistics.ResultsThe stratification of the inner and outer circumferential lamellae are not distinct，existing in the form of fusiform bonny cells；Most osteons are circle or oval and array irregularly；There are many bone lacunae and there is no bone trabecula.ConclusionThe histomorphological features of duck femora are obviously.These data will help us in species identification and research of biological evolution.

duck；femur；bone tissue；bone slice；species identification

DF795.6

：A

：0258－4646（2010）08－0616－02

國家“十一五”科技支撐項(xiàng)目（2007BAK26B04）

張璐（1976－），女，副教授，博士研究生.

林子清，E－mail：lziqing2003@sohu.com

2010－04－01