王術(shù)玲 曾元兒 張 迪 謝佳穎 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院（510006）

《中藥制劑分析》氣相色譜法含量測定的實(shí)驗(yàn)教學(xué)改進(jìn)※

王術(shù)玲 曾元兒 張 迪 謝佳穎 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院（510006）

目的 建立適合教學(xué)用的氣相色譜法測定中藥制劑中有效組分含量的學(xué)生實(shí)驗(yàn)。方法 采用SE-30彈性交聯(lián)石英毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測器，以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，測定十滴水中樟腦的含量。結(jié)果 氣化室溫度為230℃；柱溫為120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；檢測室溫度為250℃。結(jié)論 本文建立的方法經(jīng)濟(jì)、簡便、準(zhǔn)確，可作為實(shí)驗(yàn)教學(xué)用。

中藥制劑分析；氣相色譜；實(shí)驗(yàn)教學(xué)；十滴水；樟腦

有部分中藥以揮發(fā)性物質(zhì)為主要藥效成分，如冰片、薄荷等，對(duì)于含有揮發(fā)油及其他揮發(fā)性有效組分的中藥制劑，往往需采用氣相色譜法測定其含量。因此中藥制劑分析的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中一般都會(huì)開設(shè)氣相色譜法測定某制劑中某成分的含量，但由于氣相色譜法穩(wěn)定性和重復(fù)性較差，學(xué)生實(shí)驗(yàn)用的氣相色譜儀器精確度不高，加之所用色譜柱一般是低極性的（如SE-30），對(duì)成分的選擇性差，分離度不好，因此選擇合適的中藥制劑才能保證好的教學(xué)效果。本教學(xué)小組多年來一直致力于此方面的教學(xué)改革[1]，先后嘗試過牛黃解毒片中冰片的測定、六味地黃丸中丹皮酚的測定，效果均不理想。經(jīng)過多次預(yù)試驗(yàn)，本文認(rèn)為開設(shè)十滴水中樟腦的含量測定較為適宜。因?yàn)?010版《中國藥典》收載十滴水中樟腦的含量測定使用PEG-20M毛細(xì)管柱[2]，而我院現(xiàn)有學(xué)生實(shí)驗(yàn)用毛細(xì)管柱為SE-30，使用藥典條件不能很好地實(shí)現(xiàn)成分分離，因此需要通過實(shí)驗(yàn)重新建立新的色譜條件。

1 儀器與材料

氣相色譜儀GC9800（上海科創(chuàng)），N2000色譜工作站（浙大智達(dá)），F(xiàn)ID檢測器。樟腦對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：747-200005）；桉油精對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0788-9202）；十滴水樣品（廣西廣明制藥，批號(hào)100101、100302、100501）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：SE-30石英毛細(xì)管柱（30m×0.53mm，0.5μm）；氣化室溫度：230℃；FID檢測器溫度：250℃；載氣：N2（流量為0.05MPa）；進(jìn)樣量：1μl；定量方法：內(nèi)標(biāo)法。實(shí)驗(yàn)中考察了兩種內(nèi)標(biāo)物：內(nèi)標(biāo)物為水楊酸甲酯時(shí)，柱溫為120℃保持5min，以10℃/min升至160℃，保持2min；內(nèi)標(biāo)物為環(huán)己酮時(shí)，柱溫為80℃保持3min，以5℃/min升至90℃，再以20℃/min升至150℃，保持5min[4]。

在上述兩種色譜條件下，十滴水樣品中樟腦、桉油精及內(nèi)標(biāo)物的色譜峰與樣品中其他成分色譜峰均達(dá)到基線分離，見圖1、圖2。由圖可知，水楊酸甲酯的保留時(shí)間在樟腦和桉油精之后，與樟腦保留時(shí)間相近；環(huán)己酮的保留時(shí)間在樟腦和桉油精之前，與樟腦相離較遠(yuǎn)。因此，本文選擇水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物。

圖1 水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)的氣相色譜圖

圖2 環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)的氣相色譜圖

2.2 溶液配制

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含40mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 取樟腦對(duì)照品約250mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液 取十滴水10支混勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性范圍 精密移取對(duì)照品溶液0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml置10ml量瓶中，各瓶精密加入1ml內(nèi)標(biāo)溶液，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取1μl，注入氣相色譜儀。以樟腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比為縱坐標(biāo)Y，樟腦濃度為橫坐標(biāo)X，得Y = 0.5212X + 0.0245，r＞0.999，線性范圍0.5019 mg/ml～7.5285mg/ml。

2.4 校正因子測定 精密吸取2.3項(xiàng)下的第三份對(duì)照品溶液（含樟腦2.5095mg/ml、水楊酸甲酯4.0916mg/ml）1μl，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定，連續(xù)測定5次，計(jì)算樟腦的校正因子f，結(jié)果為：f = 0.5987， RSD=1.8%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品（廣西廣明制藥，批號(hào)100101）5份，按2.2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液，進(jìn)樣1μl，測得樟腦含量為27.74mg/ml，RSD=1.8%（n=5）。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的同一份供試品溶液，于制備后的0，2，4，6，8h分別進(jìn)樣1μl，計(jì)算樟腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，RSD=1.2%。表明待測成分在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取5份己知含量的同一批樣品（廣西廣明制藥，批號(hào)100101）0.5ml，分別置10ml量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液0.5ml，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，按樣品測定方法測定。結(jié)果回收率為96.7%，RSD=2.0%。

2.8 樣品測定 取3批樣品，按2.2.3項(xiàng)方法制備供試品溶液分別吸取1μl，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定樟腦的含量，結(jié)果見表1。

表1 十滴水中樟腦的含量 （n=2，mg/ml）

3 討論

我院《中藥制劑分析》開設(shè)了6個(gè)實(shí)驗(yàn)，4個(gè)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，1個(gè)綜合性實(shí)驗(yàn)，1個(gè)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)[4]。設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生掌握含量測定的方法學(xué)考察，實(shí)驗(yàn)成本較高，尤其是加樣回收率試驗(yàn)需要大量對(duì)照品。本著不影響教學(xué)效果同時(shí)降低學(xué)生實(shí)驗(yàn)成本的原則，我們選擇氣相色譜法測定十滴水中樟腦的含量做為設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)[5]。十滴水一盒1.5元，共10支，可供20組學(xué)生用，并且其中的樟腦含量大，易于檢測，樟腦對(duì)照品比較便宜。我們用文中所述方法檢測市面買來的分析純的樟腦化學(xué)合成品（250g，30元），以面積歸一化法計(jì)算，純度達(dá)到98%以上，且在本文所建線性范圍內(nèi)進(jìn)樣，未見到雜峰，因此可考慮做為實(shí)驗(yàn)教學(xué)用對(duì)照品，特別是用做回收率試驗(yàn)可解決實(shí)驗(yàn)成本問題。

文中所述色譜條件采用了程序升溫，可以同時(shí)檢測到桉油精和樟腦兩個(gè)成分的色譜峰。我們也做過試驗(yàn)，在正文所述儀器條件下設(shè)置柱溫為130℃或140℃，樟腦和水楊酸甲酯均達(dá)到基線分離，保留時(shí)間均在10min左右，相差約1min，完全滿足含量測定要求。因此在教學(xué)過程中可根據(jù)實(shí)際需要，靈活設(shè)置柱溫，可采用恒溫（130℃或140℃），也可采用正文所述的程序升溫。

[1] 王術(shù)玲,曾元兒.中藥制劑分析教學(xué)中開展討論課初探[J].藥學(xué)教育,2007, 23(5):45-47.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典·2010年版.一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:421-422.

[3] 盧華,張國宏,蔣受軍,等.氣相色譜法測定十滴水中樟腦和桉油精含量的研究[J].中成藥,2008,30(7):997-999.

[4] 崔永霞,謝彩俠,白雁.“中藥制劑分析"實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式的改革[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2009,28(10):106-107,135.

[5] 王翰華,夏苗芬,姚彤煒,等.高職基于工作過程導(dǎo)向的中藥制劑分析課程設(shè)計(jì)[J].中國高等醫(yī)學(xué)教育,2010,(3):118-119.

Reform of Experimental Teaching on Gas Chromatography Determination in the Course of Analysis of Chinese Medicinal Preparations

Wang Shuling，Zhang Di, Xie Jiaying （School of Pharmaceutical Sciences，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

Object To establish a method to determine effective components in chinese medicinal preparations by gas chromatography for experimental teaching. Methods SE-30 capillary collumn and flame ionization detector were used to determine camphor in shidi water with methyl salicylate as the internal standard substance. Results The temperature of injector and detector was 230℃ and 250℃ respectively. The initial temperature of the column was set at 120℃, held for 5 min, then raised to 160℃ at 10℃/min, and held at 160℃for 2 min. Conclusion This method is economical, convinient and precise and can be used for experimental teaching.

Analysis of Chinese Medicinal Preparations；Gas chromatography；Experimental Teaching；Shidi Water；Camphor

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.23.034

1672-2779（2010）-23-0043-02

廣州中醫(yī)藥大學(xué)成人教育基金 [No：JJYJ0915]

2010-09-10）