李冀，于海，蔣蕾，柴劍波，趙偉國(guó)，畢珺輝

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

伴隨人類現(xiàn)代思維模式尋覓客體本質(zhì)屬性的渴求，單純的中醫(yī)癥候模型和西醫(yī)病因病理模型已經(jīng)難以滿足對(duì)中醫(yī)藥本質(zhì)科學(xué)研究的需求，遂使學(xué)界尤為關(guān)注病證結(jié)合動(dòng)物模型的探究與建立。

本研究依據(jù)“病證結(jié)合”理論，將消化性潰瘍病與中醫(yī)寒熱證相結(jié)合，創(chuàng)建消炎痛型及水浸應(yīng)激型胃潰瘍中醫(yī)寒熱證動(dòng)物模型，采用“以方測(cè)證”手段，探討了寒性方劑大黃黃連瀉心湯、熱性方劑理中丸對(duì)消炎痛型及水浸應(yīng)激胃潰瘍寒熱證模型大鼠胃組織PGE2含量的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料及藥物制備

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)Wistar大鼠，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心(GLP)，提供合格證號(hào)SCXK(京)2007－0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥

熱因素:辣椒水、乙醇混懸液。將辣椒粉過(guò)120目篩，溶入60%無(wú)水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混懸液。

寒因素:氫氧化鈉(NaOH)，稱取6g白色顆粒狀NaOH，溶入500mL 雙蒸水中(0.3mol·L－1)。

冰水:冷凍保存，使用時(shí)提前取出溶化。

大黃黃連瀉心湯、理中丸均按原方藥量及比例制備，其中，大黃黃連瀉心湯濃縮至每毫升含0.5g生藥量，理中丸濃縮至每毫升含1g生藥量的液體，冰箱存儲(chǔ)備用。

1.3 主要儀器設(shè)備

DY89－Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司);HH系列電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠);Sgnergy HT全自動(dòng)酶標(biāo)儀洗板機(jī)(Anthos Labtee instruments made in Austtria);PL202－S/00型電子天平(上海梅特勒－托利多集團(tuán))。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑

醫(yī)用酒精(黑龍江華潤(rùn)酒精有限公司);甲醛(分析純，天津市博大化工有限公司);乙醚(分析純，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);生理鹽水(哈藥集團(tuán)制藥六廠);鹽酸(上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);NaOH(天津市博大化工有限公司);冰乙酸(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);PGE2試劑盒(美國(guó)RD公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組

兩模型組各取用Wistar大鼠160只，體重180～220g，雌雄各半，給予標(biāo)準(zhǔn)的大鼠食物和水，實(shí)驗(yàn)前大鼠在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)習(xí)服7天。

消炎痛模型按體重隨機(jī)分為6組:即空白對(duì)照組10只、單消組(消炎痛模型)30只、熱消組(熱因素+消炎痛注射)30只、寒消組(寒因素+消炎痛注射)30只、單熱組(單純熱因素)30只、單寒組(單純寒因素)30只。

水浸應(yīng)激模型按體重隨機(jī)分為6組:即空白對(duì)照組10只、單水組(水浸應(yīng)激模型)30只、熱水組(熱因素+水浸應(yīng)激)30只、寒水組(寒因素+水浸應(yīng)激)30只、單熱組(單純熱因素)30只、單寒組(單純寒因素)30只。

2.2 造模

2.2.1 胃寒熱模型

胃熱模型:灌服8%干辣椒粉的60%乙醇混懸液，每日2 次，10mL·kg－1，造模 7d。

胃寒模型:灌服冰水和0.3mol·L－1NaOH，每日各 1 次，10mL·kg－1，造模7d。

2.2.2 消炎痛型胃潰瘍模型的復(fù)制方法

大鼠腹腔注射消炎痛10mg·kg－1(溶于5%NaHCO3溶液中)。

2.2.3 束縛水浸應(yīng)激胃潰瘍模型的復(fù)制方法

大鼠用乙醚麻醉后，將四肢扎綁并排固定于木板上。然后將其浸入23℃的恒溫水槽中，液面保持在大鼠胸骨劍突水平。

2.3 給藥

將各組動(dòng)物分別按上述胃寒、熱證造模方法，進(jìn)行寒熱因素灌胃，給予相應(yīng)造模劑;模型組及空白對(duì)照組則給予等體積生理鹽水，連續(xù)7d。

寒熱因素造模后，將第一步中受試大鼠(除空白對(duì)照組)，在各自組別內(nèi)再按體重隨機(jī)分成3組，每組10只，即:

單水(消)組分為:單水(消)組、單水(消)大組、單水(消)理組;

熱水(消)組分為:熱水(消)組、熱水(消)大組、熱水(消)理組;

寒水(消)組分為:寒水(消)組、寒水(消)大組、寒水(消)理組;

單熱組分為:單熱組、單熱大組、單熱理組;

單寒組分為:單寒組、單寒大組、單寒理組。

按組別，各給藥組分別給予相應(yīng)治療方劑，大黃黃連瀉心湯 1.8g·Kg－1，理中丸 3.6g·kg－1;每天 2 次;單水(消)組、熱水(消)組、寒水(消)組、單熱組、單寒組及空白對(duì)照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)4d;末次給藥后將受試大鼠禁食不禁水30h(注意勿使動(dòng)物食入糞便和墊料等雜物，以免影響造模結(jié)果)，并于消炎痛及水浸應(yīng)激造模開(kāi)始前30min，再給藥1次。

2.4 取材

分別于消炎痛腹腔注射7h后，水浸應(yīng)激7h后，處死動(dòng)物，準(zhǔn)確稱取大鼠胃組織0.3～0.4g，按重量體積比加9倍的生理鹽水制成10%的勻漿，2500r·min－1離心10min，取上清，－20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.5 測(cè)定

胃組織PGE2含量測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 17.0軟件包用單因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn)，用(±s)表示結(jié)果。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 寒熱方劑對(duì)水浸應(yīng)激型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 寒熱方劑對(duì)水浸應(yīng)激型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響(±s)

表1 寒熱方劑對(duì)水浸應(yīng)激型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響(±s)

注:與空白組比較，1)P<0.01;與模型組比較，2)P<0.01，3)P<0.05;與寒水組比較，4)P<0.05。

干預(yù)因素組別 n 理中丸 n大黃黃連瀉心湯n 未給予治療藥物寒水 9 16.87±2.012)7 8.34±2.99 8 9.94±2.811)－ 10 18.54±2.15熱水 8 14.48±2.73 8 15.8±1.663) 9 13.14±2.111)單寒 9 17.25±1.422)8 11.52±3.45 10 11.48±2.091)單熱 10 14.05±1.46 8 16.80±2.893)10 14.02±2.511)單水 － － 1012.63±2.391)4)空白 －

由表1可知:單水、寒水、熱水、單寒、單熱組大鼠胃組織PGE2含量均明顯低于空白組，比較具有顯著性差異(P<0.01)。寒水理與寒水、單寒理與單寒、熱水大與熱水、單熱大與單熱各組比較，PGE2含量均明顯升高，比較具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。寒水大與寒水、單寒大與單寒、熱水理與熱水、單熱理與單熱，熱水與單水，寒水與單寒，熱水與單熱各組比較，胃組織PGE2含量無(wú)顯著性差異(P>0.05)。寒水組PGE2含量明顯低于單水組，比較具有顯著性差異(P<0.05)。

3.2 寒熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響

由表2可知:單消、寒消、熱消、單寒、單熱組大鼠胃組織PGE2含量均明顯低于空白組，比較具有顯著性差異(P<0.01)。寒消理與寒消、單寒理與單寒、熱消大與熱消、單熱大與單熱各組比較，PGE2含量均明顯升高，比較具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)，寒消大與寒消、單寒大與單寒、單熱理與單熱、熱消理與熱消、寒消與單寒、寒消與單消各組比較，胃組織PGE2含量無(wú)顯著性差異(P>0.05)。熱消與單消、熱消與單熱各組比較，PGE2含量均明顯降低，比較具有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。

表2 寒熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響(±s)

表2 寒熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍大鼠胃組織PGE2含量的影響(±s)

注:與空白組比較，1)P<0.01;與模型組比較，2)P<0.01，3)P<0.05;與熱消組比較，4)P<0.01，5)P<0.05。

干預(yù)因素組別 n 理中丸 n大黃黃連瀉心湯n 未給予治療藥物寒消 8 13.78±2.072)8 9.05±1.37 9 9.68±1.401)－ 10 17.23±2.87熱消 8 9.66±1.42 8 12.39±1.412)9 8.55±1.191)單寒 9 13.42±2.022)9 10.83±1.52 10 9.41±1.821)單熱 9 10.34±1.63 9 13.13±1.503)9 11.03±1.611)4)單消 － － 9 10.37±1.681)5)空白 －

4 討論

1910年，Schwartz提出“無(wú)酸即無(wú)潰瘍”的設(shè)想，即潰瘍只發(fā)生于黏膜與胃酸接觸的部位［1］，提示胃酸分泌過(guò)多是消化性潰瘍發(fā)生的因素之一。前列腺素廣泛地存在于人體中，具有多樣的生理活性。胃腸黏膜中主要含有前列腺素E2、F2、α和J，其中前列腺素E系列具有抑制胃酸分泌，促進(jìn)消化道潰瘍愈合，保護(hù)胃和十二指腸黏膜的作用。前列腺素是首先被發(fā)現(xiàn)具有細(xì)胞保護(hù)作用的內(nèi)源性物質(zhì)，PGE2缺乏是引起消化性潰瘍的重要因素之一。另外還有研究報(bào)道［2］，前列腺素可能通過(guò)刺激胃黏液的合成和分泌，促進(jìn)HCO的分泌，增加表面磷脂的生成，加強(qiáng)胃黏膜屏障的疏水性;以及保護(hù)胃黏膜微循環(huán)結(jié)構(gòu)的完整，維持胃黏膜的血液供應(yīng)，保護(hù)增殖區(qū)細(xì)胞和黏膜上皮的更新及修復(fù)，抑制運(yùn)動(dòng)過(guò)強(qiáng)等機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。前列腺素在胃黏膜保護(hù)機(jī)制中居中心地位，起到加強(qiáng)其他因素的用［3］。本研究結(jié)果表明:

①無(wú)論是病因素(單純?cè)炷Ｒ蛩?、還是證因素(單純寒熱因素)，或者是病證結(jié)合因素(模型與寒熱因素結(jié)合)均可致胃組織中PGE2含量的降低，似可認(rèn)為諸因素是通過(guò)減少胃組織中PGE2的合成，進(jìn)而削弱其抑制胃酸分泌、保護(hù)胃和十二指腸黏膜的作用，從而促進(jìn)潰瘍的形成。

②“病證結(jié)合”的造模方法與單純“病”或“證”的造模方法相比，其中寒因素結(jié)合水應(yīng)激與單純寒因素，熱因素結(jié)合水應(yīng)激與單純熱因素、單純水應(yīng)激，以及寒因素結(jié)合消炎痛與單純寒因素、單純消炎痛，五組比較，胃組織中PGE2含量無(wú)明顯差別，提示在潰瘍形成過(guò)程中，“病”和“證”兩方面因素并未以協(xié)同作用的形式對(duì)胃組織中PGE2含量進(jìn)行干預(yù)，而熱因素結(jié)合消炎痛與單純熱因素及單純消炎痛，寒因素結(jié)合水應(yīng)激與單純水應(yīng)激，三組相比較，胃組織中PGE2含量明顯降低，提示寒因素與水應(yīng)激、熱因素與消炎痛在對(duì)胃組織中PGE2含量的影響方面具有協(xié)同作用，說(shuō)明在潰瘍的形成過(guò)程中，“病”和“證”共同加重了對(duì)胃組織中PGE2的合成和釋放的抑制，加速了潰瘍的形成。

③大黃黃連瀉心湯、理中丸在病證結(jié)合模型的治療上體現(xiàn)了有選擇性的不同證治效應(yīng)。熱性方劑理中丸對(duì)單純寒因素及消炎痛型與水浸應(yīng)激型胃潰瘍寒證模型大鼠胃組織PGE2含量的降低具有升高作用，寒性方劑大黃黃連瀉心湯對(duì)此類模型無(wú)作用。同時(shí)，寒性方劑大黃黃連瀉心湯對(duì)單純熱因素及消炎痛型與水浸應(yīng)激型胃潰瘍熱證模型大鼠胃組織PGE2含量的降低亦具有升高作用，熱性方劑理中丸對(duì)此類模型無(wú)作用。這從實(shí)驗(yàn)研究方面印證了“寒者熱之、熱者寒之”法則與“方證相應(yīng)”模式的客觀性。

綜上所述，通過(guò)寒熱不同性質(zhì)的方劑對(duì)施加寒熱因素的消炎痛型和水浸應(yīng)激型胃潰瘍模型大鼠胃組織中PGE2含量影響的比較，既說(shuō)明寒性方劑大黃黃連瀉心湯對(duì)熱性胃潰瘍的治療和熱性方劑理中丸對(duì)寒性胃潰瘍的治療，可通過(guò)提升大鼠胃組織中PGE2含量而實(shí)現(xiàn)，又證明了本實(shí)驗(yàn)所采用的“病證結(jié)合”的胃潰瘍?cè)炷７椒ù_切可行。

［1］ 孟憲鏞.消化性潰瘍的發(fā)病機(jī)理［J］.交通醫(yī)學(xué)，1991(5):17.

［2］ 吳靈飛，鄭萬(wàn)強(qiáng).前列腺素對(duì)阿司匹林誘發(fā)大鼠急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用［J］.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996(1):28－31.

［3］ 劉春英，王麗杰，孫梅.PGE2在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的幼鼠急性胃黏膜損傷中的變化及PAF受體拮抗劑對(duì)其影響［J］.世界華人消化雜志，2006，14(2):163 －166.