寇 自 農(nóng)，朱 靖 博

（1.大連工業(yè)大學(xué) 現(xiàn)代教育技術(shù)部，遼寧 大連 116034；2.大連工業(yè)大學(xué) 生物與食品工程學(xué)院，遼寧 大連 116034）

0 引言

中藥丹參為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，是我國(guó)應(yīng)用最廣泛的中草藥之一，對(duì)心腦血管疾病具有良好的療效［1］。關(guān)于丹參的化學(xué)成分、藥理作用、藥物代謝以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等許多方面進(jìn)行了較為全面深入的研究［2］，已經(jīng)分離出了脂溶性和水溶性兩類(lèi)成分近幾十種化合物。近年來(lái)，在中藥丹參真?zhèn)舞b別及質(zhì)量評(píng)價(jià)方面，已經(jīng)有包括高效液相色譜［3］、毛細(xì)管電泳［4］、紅外光譜［5］、高速逆流色譜［6］及HPLC/DAD/ESI-MS［7］聯(lián)用技術(shù)等不同的分析技術(shù)應(yīng)用在丹參質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究中，而采用熒光光譜法對(duì)丹參及其提取物進(jìn)行鑒別與質(zhì)量評(píng)價(jià)，僅有對(duì)于丹參酚酸B 和丹參酮純品熒光特性研究的報(bào)道［8-9］。本文針對(duì)丹參水浸提液的熒光光譜特性進(jìn)行研究，旨在為中藥丹參的真?zhèn)舞b別、定量分析和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

LS 55型熒光光譜儀，PHS-3C 型數(shù)字酸度計(jì)，Britton-Robinson pH 緩沖溶液（所用試劑均為分析純），二次蒸餾水。

丹參，2009年8 月采自陜西商洛，藥材用水清洗，晾干，65 ℃干燥后粉碎，過(guò)40目篩備用。

丹參素、丹參酚酸B、丹參酚酸A、原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均在95%以上，由大連博邁科技發(fā)展有限公司提供。

1.2 方 法

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品0.1g，置于100 mL 三角瓶中，加入20 mL 去離子水，水浴加熱，微沸10min，冷卻過(guò)濾，濾液移至100 mL 容量瓶中，稀釋至刻度，即質(zhì)量濃度為1 mg/mL 丹參水浸液。用三維熒光光譜和二維熒光光譜分析樣品時(shí)適當(dāng)稀釋。在一系列25mL容量瓶中，分別加入1mg/mL丹參水浸液2mL 和一定pH 值的緩沖溶液，用水稀釋至刻度，搖勻，掃描熒光光譜，分析酸度對(duì)溶液熒光特性的影響。

2 結(jié)果與討論

2.1 丹參水浸提液三維熒光光譜

三維熒光光譜是用來(lái)描述熒光強(qiáng)度隨激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)變化關(guān)系的圖譜。圖1為丹參水浸液的三維等高線熒光光譜圖。從圖1可以看出有2個(gè)明顯的熒光峰，激發(fā)波長(zhǎng)分別為243和337nm，發(fā)射波長(zhǎng)均為437nm。丹參水提液熒光光譜是其中所有能夠產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分熒光的疊加，丹參水浸提液激發(fā)波長(zhǎng)不同發(fā)射波長(zhǎng)相同，說(shuō)明這種熒光特性是由同類(lèi)型化合物產(chǎn)生，三維熒光譜圖中熒光強(qiáng)度、激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)及其變化客觀地反映了其化學(xué)組成和含量信息，可以對(duì)丹參藥材真?zhèn)魏推焚|(zhì)進(jìn)行鑒別。

圖1 丹參水浸液三維熒光光譜Fig.1 Three-dimensional fluorescence spectrum of S.miltiorrhizaaqueous extract

2.2 丹參水浸液的二維熒光光譜

圖2（1）為丹參水浸液二維熒光激發(fā)光譜與發(fā)射光譜。由圖可見(jiàn)激發(fā)波長(zhǎng)分別為217、243、337nm，發(fā)射波長(zhǎng)為437nm。（2）為水溶劑相同條件下的掃描圖譜，顯示激發(fā)光譜217nm 為溶劑水的特征峰。所以243、337nm 的峰才是丹參水浸液激發(fā)光譜，與三維圖譜得到的結(jié)果一致。

圖2 丹參水浸液和水溶劑的熒光光譜Fig.2 Two-dimensional fluorescence spectrum of S.miltiorrhizaaqueous extract and water

丹參水溶性成分主要為酚酸類(lèi)化合物，以丹參酚酸B、丹參素、丹參酚酸A、原兒茶醛為主。

物質(zhì)產(chǎn)生熒光的特征是分子中應(yīng)具有大的共軛π鍵結(jié)構(gòu)，共軛體系越大，離域π電子越容易激發(fā)，熒光越容易產(chǎn)生。而這4個(gè)化合物都具有芳環(huán)，芳環(huán)越多，熒光峰越移向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向，且熒光強(qiáng)度也逐漸增強(qiáng)［10］。圖3給出了相同質(zhì)量濃度下各種丹參中水溶性化合物的熒光光譜?？梢钥闯?，丹參酚酸B最大發(fā)射波長(zhǎng)為437nm，丹參酚酸A最大發(fā)射波長(zhǎng)為418nm，丹參素最大發(fā)射波長(zhǎng)為380nm，原兒茶醛最大發(fā)射波長(zhǎng)為400nm，強(qiáng)度依次為87.47、24.78、43.15、23.26，符合同類(lèi)型化合物熒光的特征。分析圖2和圖3 可以得出，在本實(shí)驗(yàn)條件下，丹參酚酸B 熒光強(qiáng)度最大，其最大發(fā)射波長(zhǎng)是437nm，與丹參水提液樣品最大發(fā)射波長(zhǎng)相同，丹參酚酸A、原兒茶醛、丹參素最大發(fā)射波長(zhǎng)分別為418、400、380nm，丹參水浸提液熒光光譜是各種丹參酚酸化合物熒光光譜的疊加，其中丹參酚酸B 對(duì)丹參水浸提液熒光強(qiáng)度貢獻(xiàn)最大，且熒光發(fā)射波長(zhǎng)相同。目前，已發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)明確的丹參酚酸化合物有40余種［12］，各自產(chǎn)生熒光峰，混合在一起形成一個(gè)寬范圍譜峰。

圖3 丹參4種標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光激發(fā)與發(fā)射光譜Fig.3 Two-dimensional fluorescence spectrum of salivianolic acid B，salivianolic acid A，danshensu and protocatechu aldehyde aqueous solution

2.3 酸堿條件下的丹參水浸提液熒光光譜

丹參水溶性成分主要為酚酸類(lèi)化合物，分子中存在酯鍵，在不同的酸堿溶液中穩(wěn)定性明顯不同，從而影響到化合物的熒光光譜和強(qiáng)度。從圖4（a）可知在酸性條件下，隨著酸度的增加，其譜圖變化并不明顯，這種光譜特征表明，丹參水提液在酸性條件下其化學(xué)組成表現(xiàn)出較強(qiáng)的穩(wěn)定性。圖4（b）顯示在堿性下，隨著pH 的增加，其峰形、熒光強(qiáng)度均發(fā)生了明顯的變化，437nm 處熒光強(qiáng)度逐漸減弱甚至消失，最大發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)生了紅移，并在380nm 處的熒光峰明顯增強(qiáng)，出現(xiàn)了丹參素的特征熒光譜。這表明丹參水浸液中的酚酸類(lèi)化合物在堿性介質(zhì)中發(fā)生水解，并生成了丹參素。以丹參中丹參酚酸類(lèi)化合物為有效成分的丹參藥物生產(chǎn)中，提取溶液的酸堿度應(yīng)該是影響其質(zhì)量的主要因素。

圖4 丹參浸提液在不同pH 下的熒光光譜Fig.4 Two-dimensional fluorescence spectrum of S.miltiorrhizaaqueous extract solution at acid and alkaline environment

2.4 丹參水浸提液熒光穩(wěn)定性

將丹參水浸提液放在自然光下，每隔一段時(shí)間測(cè)定其熒光強(qiáng)度的結(jié)果見(jiàn)圖5。結(jié)果表明，熒光強(qiáng)度、最大發(fā)射波長(zhǎng)在所放置的時(shí)間內(nèi)沒(méi)有明顯變化。因此該樣品穩(wěn)定時(shí)間滿足實(shí)際分析要求。

2.5 丹參水浸提液熒光強(qiáng)度與質(zhì)量濃度的關(guān)系

丹參水浸提液熒光強(qiáng)度與質(zhì)量濃度的關(guān)系見(jiàn)圖6。結(jié)果表明，隨著濃度的增加，熒光強(qiáng)度逐漸增加，發(fā)射波長(zhǎng)不變，峰形不變，在0.005～0.008 mg/mL時(shí)，工作曲線方程為F=1 202C+4.563 8，相關(guān)系數(shù)R=0.997 8。顯示出良好的線性關(guān)系，可以作為定量分析丹參中總酚酸的依據(jù)。

圖5 丹參浸提液熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線Fig.5 The fluorescence intensity change of S.miltiorrhizaaqueous extract solution with time

圖6 丹參水浸提液在不同質(zhì)量濃度下的熒光光譜圖Fig.6 The fluorescence spectrum of S.miltiorrhiza aqueous extract solution at different concentration

3 結(jié)論

（1）中藥材丹參水浸提液具有良好的熒光光譜性，在三維熒光等高線中出現(xiàn)了2個(gè)明顯的熒光峰，激發(fā)波長(zhǎng)分別為243和337nm，發(fā)射波長(zhǎng)均為437nm，三維熒光光譜具有指紋圖譜特征，可以用于丹參的定性鑒別。

（2）在二維熒光光譜中發(fā)現(xiàn)丹參水浸提液中水溶性主要成分丹參酚酸B 對(duì)丹參水浸提液熒光強(qiáng)度貢獻(xiàn)最大，且熒光發(fā)射波長(zhǎng)相同。

（3）在pH 7.0～12.7，隨著pH 的增加其峰形、熒光強(qiáng)度均發(fā)生了明顯的變化，437nm 處熒光強(qiáng)度逐漸減弱甚至消失，而380nm 處的熒光峰明顯增強(qiáng)，丹參水浸液中的酚酸類(lèi)化合物在堿性介質(zhì)中發(fā)生水解生成了丹參素是其主要原因。在近中性條件下，丹參水浸提液熒光強(qiáng)度與濃度之間呈良好的線性關(guān)系，可以作為定量分析丹參中總酚酸的依據(jù)。