劉豐彬，趙 斌，閆萬(wàn)軍，馬炳存

負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽干預(yù)大鼠骨骼肌衰老過(guò)程的實(shí)驗(yàn)研究

劉豐彬1，趙 斌2，閆萬(wàn)軍2，馬炳存2

目的：探討負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽干預(yù)大鼠骨骼肌衰老過(guò)程的作用效果。方法：56只雄性SD大鼠隨機(jī)分為7組：成年組，模型組，D-半乳糖小負(fù)重組，D-半乳糖大負(fù)重組，D-半乳糖補(bǔ)肽組，D-半乳糖補(bǔ)肽小負(fù)重組，D-半乳糖補(bǔ)肽大負(fù)重組。6周后處死大鼠，制作冰凍切片，測(cè)試血清以及骨骼肌各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果：與成年組相比，模型組大鼠體重和每日攝食量分別呈現(xiàn)升高和下降的趨勢(shì)，負(fù)重和補(bǔ)肽可以在一定程度上緩解兩種趨勢(shì)，但都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組大鼠骨骼肌細(xì)胞出現(xiàn)萎縮和退行性改變等衰老的跡象，負(fù)重和補(bǔ)肽可以在一定程度上減輕這種現(xiàn)象；模型組大鼠血清SOD、SOD/MDA比值和骨骼肌總蛋白含量顯著低于成年組，血清MDA顯著高于成年組，運(yùn)動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)干預(yù)各組顯著逆轉(zhuǎn)這種趨勢(shì)，并有明顯的交互作用；與成年組相比，模型組大鼠骨骼肌脂褐素含量顯著升高，負(fù)重或補(bǔ)肽可以一定程度上緩解或逆轉(zhuǎn)這種趨勢(shì)，兩種具有明顯的交互作用。結(jié)論：負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽均可以有效的預(yù)防大鼠骨骼肌衰老過(guò)早的出現(xiàn)，兩種方式聯(lián)合運(yùn)用效果更為明顯。

負(fù)重訓(xùn)練；大豆多肽；骨骼??；D-半乳糖；衰老

隨著全世界老齡化國(guó)家增多，老齡人口比率加大，人口的老齡化已經(jīng)成為許多國(guó)家都要面對(duì)的新的突出的社會(huì)問(wèn)題。對(duì)衰老和抗衰老的研究歷來(lái)都是國(guó)際性的醫(yī)學(xué)課題，尋找有效的抗衰老藥物和方法，以求得預(yù)防衰老過(guò)早出現(xiàn)已成為當(dāng)前老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。而與人體運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)的骨骼肌衰老的研究也逐漸受到體育科研人員的重視[1-4]。

本研究運(yùn)用衰老研究中常用的D-半乳糖皮下注射的方法，建立大鼠亞急性骨骼肌衰老模型，并選取負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽兩種方式在大鼠骨骼肌衰老形成過(guò)程中進(jìn)行運(yùn)動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)干預(yù)，通過(guò)觀察各組相關(guān)指標(biāo)的變化，分析負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)肽預(yù)防骨骼肌衰老過(guò)早出現(xiàn)的作用效果，為下一步初步探討其可能的機(jī)制和進(jìn)行相關(guān)后續(xù)研究積累一定的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

SD純系雄性健康大鼠56只，3月齡，平均體重300 g左右，清潔級(jí)，由河北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠3～4只，每天自然光照，自由飲水?dāng)z食。動(dòng)物飼料選用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物混合飼料，由河北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

大鼠購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，稱重，編號(hào)，隨機(jī)分7組，各組間動(dòng)物體重?zé)o顯著性差異。分組情況見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠生活與運(yùn)動(dòng)方式

1.2 動(dòng)物模型建立及各組動(dòng)物具體處理

參考吳國(guó)明等[5]的方法進(jìn)行D-半乳糖亞急性骨骼肌衰老模型的復(fù)制，D-半乳糖用生理鹽水配成5%的溶液，按200 mg/kg每天頸背部皮下注射，每天一次，周日不間斷，連續(xù)6周。

大鼠進(jìn)行跑臺(tái)無(wú)負(fù)重適應(yīng)性訓(xùn)練一周，然后負(fù)重適應(yīng)性訓(xùn)練一周。正式跑臺(tái)負(fù)重訓(xùn)練方案參考Bedford等[6]和閆萬(wàn)軍等[7]的方法，跑速15 m/min，坡度0°，跑2 min，休息2 min為一組，每天連續(xù)訓(xùn)練6組，每天一次，周日休息，共6周。負(fù)重重量采用大鼠最大負(fù)重的百分比來(lái)計(jì)算（預(yù)實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)將SD大鼠的最大負(fù)重能力進(jìn)行了測(cè)試，約相當(dāng)于其體重的60%），小負(fù)重相當(dāng)于其最大負(fù)重30%，大負(fù)重相當(dāng)于其最大負(fù)重70%。

需要灌胃各組大鼠經(jīng)平衡膳食3天后開(kāi)始適應(yīng)性訓(xùn)練，大豆多肽主要含五肽、六肽和八肽，分子量在200～600道爾頓之間。經(jīng)質(zhì)譜法測(cè)定多肽的氨基酸序列為：（1）Leu Ala Pro Glu（2）Met Ser Leu Pro Thr Asn（3）Arg Leu Met Leu His Leu Ala Pro。正式訓(xùn)練開(kāi)始后補(bǔ)充大豆多肽組開(kāi)始灌胃，每次運(yùn)動(dòng)后30 min內(nèi)進(jìn)行，每日一次，周日不間斷，連續(xù)6周，灌胃劑量按照0.15 g/100 g體重，大豆多肽溶液濃度為15%，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組灌胃等量生理鹽水[8]。

1.3 動(dòng)物取材及樣本處理

實(shí)驗(yàn)6周末，最后一次運(yùn)動(dòng)后所有組大鼠禁食12 h進(jìn)行取材。所有取材器械均經(jīng)過(guò)高壓滅菌消毒并高溫（200℃）烘烤6 h。

腹腔注射1%戊巴比妥鈉溶液（50 mg/kg體重）麻醉，心尖取血，-30℃保存。待測(cè)血清生化指標(biāo)。

取右側(cè)部分股四頭肌股直肌，先經(jīng)異戊烷處理，再用液氮凍干，-70℃冰箱保存，待做骨骼肌冰凍切片。

取少許左側(cè)腓腸肌組織，按照1：9（W/V）的比例加入4℃生理鹽水，然后在冰浴中電動(dòng)勻漿，超聲粉碎，4℃離心取上清，-30℃保存待骨骼肌組織生化指標(biāo)。

1.4 測(cè)試指標(biāo)及方法

1.4.1 一般指標(biāo) 體重：每周日和處死取材前稱量大鼠體重。攝食量：每天記錄大鼠攝食量。攝食量＝投食量－剩余量。

1.4.2 組織病理學(xué)指標(biāo) 骨骼肌組織經(jīng)異戊烷處理液氮凍干制作冰凍切片，7 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，每個(gè)骨骼肌標(biāo)本連續(xù)切片5張，隨機(jī)抽取1張?jiān)诠鈱W(xué)顯微鏡下觀察骨骼肌組織病理學(xué)改變。組織學(xué)的觀察和評(píng)定由河北醫(yī)科大學(xué)附屬以嶺醫(yī)院病理科教授進(jìn)行，采取單盲法，觀察者不了解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。

采用OLYMPUS CX21光學(xué)顯微鏡在放大200倍的情況下進(jìn)行觀察，采用Leica IM50 image manager V1.20對(duì)每張切片進(jìn)行分析，并記錄每一組切片中出現(xiàn)組織異常像的頻數(shù)。骨骼肌組織出現(xiàn)以下情況之一即可確定為組織病理學(xué)異常：肌纖維圓形化、細(xì)胞核中心化、小角化纖維、小群肌纖維萎縮等[9]。

1.4.3 血清指標(biāo) 血清超氧化物歧化酶（SOD）采用黃嘌呤氧化酶法，血清丙二醛（MDA）采用硫代巴比妥酸法，分別在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上按照試劑盒說(shuō)明要求測(cè)試。

1.4.4 骨骼肌組織勻漿指標(biāo) 骨骼肌組織總蛋白含量測(cè)定，采用考馬斯亮藍(lán)法，在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上按照試劑盒說(shuō)明要求測(cè)試。骨骼肌組織脂褐素含量測(cè)定，采用熒光比色法，在熒光分光光度計(jì)上按照試劑盒說(shuō)明要求測(cè)試。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）表示，用SPSS for Windows 11.5統(tǒng)計(jì)軟件作進(jìn)一步的分析。針對(duì)單一因素對(duì)指標(biāo)的影響，多組間數(shù)據(jù)如果方差齊，進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），如果有顯著性差異，則用S-N-K法進(jìn)行多重比較；如果方差不齊，則進(jìn)行自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換或者進(jìn)行秩和檢驗(yàn)。各研究因素對(duì)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的主效應(yīng)以及各因素間交互作用對(duì)指標(biāo)的影響，采用雙因素方差分析。顯著性水平為P<0.05，非常顯著性水平為P<0.01。

2結(jié) 果

2.1 體重和攝食量變化

如表2、圖1所示，各組大鼠原始體重?zé)o顯著性差異（P＞0.05）；6周訓(xùn)練后各組大鼠體重都呈現(xiàn)自然增長(zhǎng)的趨勢(shì)，B組大鼠體重低于M組和C組，差異顯著（P<0.05）。通過(guò)雙因素方差分析，負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽可以使D-半乳糖衰老大鼠體重增長(zhǎng)幅度趨緩，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽對(duì)D-半乳糖衰老大鼠體重增長(zhǎng)無(wú)顯著的交互作用（P＞0.05）。

表2 體重和每日攝食量變化（n=8）Table 2 Changes of bodyweight and quotidie ingestion

圖1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中體重變化Figure 1 Changes of per groups of rats body weight in experiment time

如表2、圖2所示，各組大鼠每日攝食量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），但都呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，與C組相比其余各組每日攝食量下降的趨勢(shì)更為明顯。提示：隨著造模時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，各組大鼠衰老的程度不斷加深，導(dǎo)致每日攝食量的不斷下降。

通過(guò)雙因素方差分析，負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽可以使D-半乳糖衰老大鼠每日攝食量下降幅度趨緩，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽對(duì)D-半乳糖衰老大鼠每日攝食量的變化無(wú)顯著的交互作用（P＞0.05）。

圖2 各組大鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日攝食量變化Figure 2 Changes of per groups of rats quotidie ingestion in experiment time

2.2 骨骼肌組織病理學(xué)觀察

光鏡下觀察C組大鼠為正常骨骼肌組織學(xué)特征（見(jiàn)圖3）。除C組外其余各組大鼠股四頭肌肌細(xì)胞形態(tài)有著不同程度的改變，主要表現(xiàn)為肌細(xì)胞不同程度的萎縮或退行性改變，并且以M組變化最為明顯，PB組和PS組萎縮或退行性改變的程度相對(duì)較輕。如圖4-圖9所示：肌纖維萎縮的組織學(xué)表現(xiàn)——肌纖維圓形化、細(xì)胞直徑的差別增大，細(xì)胞核中心化等[9]。

本研究采取臨床病理學(xué)中通用的方法對(duì)組織像異常的例數(shù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，而不是對(duì)每組出現(xiàn)異常肌纖維的個(gè)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。（見(jiàn)表3）。

表3 各組大鼠肌細(xì)胞異常組織像出現(xiàn)頻數(shù)（n=8）Table 3 The number of abnormality tissue in per groups of rats muscle cell

結(jié)果提示：6周D-半乳糖皮下注射復(fù)制亞急性骨骼肌衰老模型，可以造成大鼠骨骼肌細(xì)胞出現(xiàn)萎縮和退行性改變等衰老的跡象，負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽可以從一定程度上減輕萎縮和退行性改變的程度。

圖3 C組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）正常骨骼肌組織結(jié)構(gòu)Figure 3 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group C，H&E staining，×200，normal skeletal muscle histology.

圖4 M組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）肌纖維圓形化（粗箭頭）細(xì)胞核中心化（細(xì)箭頭）

Figure 4 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group M，H&E staining，×200，Round of muscle fiber（thick arrow），Center of cell nucleus（thin arrow）.

圖5 S組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）肌纖維圓形化（粗箭頭）細(xì)胞核中心化（細(xì)箭頭）Figure 5 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group S，H&E staining，×200，Round of muscle fiber（thick arrow），Center of cell nucleus（thin arrow）.

圖6 B組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）肌纖維圓形化（粗箭頭）細(xì)胞核中心化（細(xì)箭頭）Figure 6 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group B，H&E staining，×200，Round of muscle fiber（thick arrow），Center of cell nucleus（thin arrow）.

圖7 P組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）肌纖維圓形化（粗箭頭）細(xì)胞核中心化（細(xì)箭頭）Figure 7 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group P，H&E staining，×200，Round of muscle fiber（thick arrow），Center of cell nucleus（thin arrow）.

圖8 PS組大鼠股直肌組織切片（HE染色，×200）肌纖維圓形化（粗箭頭）Figure 8 Light microscopy for musculus rectus femoris tissue from a rat in group PS，H&E staining，×200，Round of muscle fiber（thick arrow）.

2.3 血清SOD活力和MDA含量比較

如表4所示：與C組相比，M組大鼠血清中SOD活力顯著下降（P<0.05），MDA含量顯著上升（P<0.01），從而導(dǎo)致SOD/ MDA顯著降低（P<0.01）。通過(guò)雙因素方差分析，負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽均能使D-半乳糖衰老大鼠血清中SOD活性顯著升高（P<0.05），以S組表現(xiàn)更為明顯，MDA含量顯著降低（P< 0.05），以P組表現(xiàn)更為明顯，從而使SOD/MDA顯著升高（P< 0.05）；負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽可使D-半乳糖衰老大鼠血清中SOD活性進(jìn)一步升高（P<0.05），以PS組表現(xiàn)更為明顯，MDA含量進(jìn)一步降低（P<0.05），以PB組表現(xiàn)更為明顯，從而使SOD/MDA顯著升高（P<0.05），兩者具有顯著的交互作用。

2.4 骨骼肌組織脂褐素含量比較

如表5所示：與C組相比，M組大鼠骨骼肌組織中脂褐素含量顯著升高（P<0.01）。通過(guò)雙因素方差分析，負(fù)重訓(xùn)練能使D-半乳糖衰老大鼠骨骼肌中脂褐素含量有下降的趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異（P>0.05），補(bǔ)充大豆多肽則能使脂褐素含量顯著下降（P<0.05），以P組表現(xiàn)更為明顯；負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽可使D-半乳糖衰老大鼠骨骼肌組織中脂褐素含量進(jìn)一步降低（P<0.05），以PS組表現(xiàn)更為明顯，兩者具有顯著的交互作用。

表5 骨骼肌組織脂褐素含量比較（n=8）Table 5 Changes of skeletal muscle Lipofuscin

2.5 骨骼肌組織總蛋白含量比較

如表6所示：與C組相比，M組大鼠骨骼肌組織中總蛋白含量顯著下降（P<0.05）。通過(guò)雙因素方差分析，負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽均能使D-半乳糖衰老大鼠骨骼肌中總蛋白含量顯著升高（P<0.05），以S組表現(xiàn)更為明顯，負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽可使D-半乳糖衰老大鼠骨骼肌組織中總蛋白含量進(jìn)一步升高（P<0.05），以PS組表現(xiàn)更為明顯，兩者具有顯著的交互作用。

表6 骨骼肌組織總蛋白含量比較（n=8）Table 6 Changes ofskeletalmuscle totalprotein

3 討論與分析

衰老是一個(gè)多因素、復(fù)雜的綜合生理變化過(guò)程，是個(gè)體成長(zhǎng)過(guò)程中必然出現(xiàn)的階段。目前對(duì)于干預(yù)衰老主要集中在藥物研究上，盡管藥物干預(yù)有一定的臨床效果，但是同時(shí)又存在著作用局限、有毒副作用等不足。而運(yùn)動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)作為兩種更為經(jīng)濟(jì)和安全的方式，會(huì)使機(jī)體各器管、各系統(tǒng)的功能產(chǎn)生良好的效應(yīng)，從而對(duì)衰老產(chǎn)生積極的影響[10-12]。

針對(duì)運(yùn)動(dòng)干預(yù)衰老的研究，國(guó)內(nèi)外已有相關(guān)的報(bào)道，但多數(shù)研究是對(duì)人體整體機(jī)能的調(diào)節(jié)和影響，指標(biāo)也較為單一，缺少針對(duì)某一器官和組織，尤其是缺少運(yùn)動(dòng)抗骨骼肌衰老的機(jī)理及綜合指標(biāo)的研究，選擇形式也以有氧運(yùn)動(dòng)或短期力量訓(xùn)練為主，針對(duì)骨骼肌衰老過(guò)程中進(jìn)行相關(guān)的抗阻力量訓(xùn)練或負(fù)重訓(xùn)練的干預(yù)，還沒(méi)有見(jiàn)到相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道[13-15]。國(guó)內(nèi)外針對(duì)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)衰老的研究也較多，相關(guān)的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑產(chǎn)品也層出不窮，但從多個(gè)層面入手，觀察長(zhǎng)期補(bǔ)充大豆天然提取物大豆多肽對(duì)骨骼肌衰老的影響效果，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有見(jiàn)到相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道[16-19]。

本研究參考吳國(guó)明等的方法，運(yùn)用臨床醫(yī)學(xué)關(guān)于衰老研究中常用的D-半乳糖皮下注射的方法，建立大鼠亞急性骨骼肌衰老模型。借鑒我們以往的研究成果[6，20]，采用在大鼠背部捆綁重物的方式模擬人體的抗阻訓(xùn)練，參考預(yù)實(shí)驗(yàn)和人體力量訓(xùn)練的原則，確定了大鼠負(fù)重訓(xùn)練的重量、周期和頻率，最終確定了我們本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物訓(xùn)練方案。而補(bǔ)充大豆多肽的方式和方法則是在充分參考前人研究成果的基礎(chǔ)上，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)干預(yù)實(shí)驗(yàn)中的原則，最終確定了本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)干預(yù)方案[21-22]。

研究表明：隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體通常會(huì)出現(xiàn)脂類代謝紊亂，而這種紊亂可導(dǎo)致體重增加[23]。本研究的結(jié)果顯示：各組大鼠體重都呈現(xiàn)自然增長(zhǎng)的趨勢(shì)，與成年對(duì)照組相比，M組大鼠體重呈現(xiàn)先降后升的趨勢(shì)，負(fù)重訓(xùn)練組和補(bǔ)充大豆多肽組大鼠與M組大鼠的體重雖然沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但卻使其大鼠體重增長(zhǎng)幅度趨緩，并且以負(fù)重訓(xùn)練組的作用更為明顯。提示：可能是由于隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，衰老程度加深，導(dǎo)致脂肪代謝紊亂，負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽的干預(yù)的都可以從一定程度上緩解這種紊亂的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，雖然M組大鼠體重仍然維持在較高水平，但與對(duì)照組大鼠體重比較也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其原因可能與體脂增加而瘦體組織減少有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，與C組相比，造模各組每日攝食量雖然無(wú)顯著性差異，但都呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，并且以M組的趨勢(shì)更為明顯。提示：隨著造模時(shí)間的深入，機(jī)體代謝紊亂不斷加重，各組大鼠衰老的程度不斷加深，導(dǎo)致每日攝食量的不斷下降。負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽兩種干預(yù)手段可以使衰老大鼠每日攝食量下降幅度趨緩，但無(wú)顯著性差異，并且與單純負(fù)重訓(xùn)練組相比，補(bǔ)充大豆多肽組每日攝食量始終處于較低水平。提示：運(yùn)動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)干預(yù)可以在一定程度上糾正機(jī)體代謝紊亂的情況，減輕大鼠衰老的程度，增加能量消耗，從而提高每日攝食量，并且由于體外營(yíng)養(yǎng)的額外補(bǔ)充，使補(bǔ)充大豆多肽組每日攝食量減少的更為明顯。

組織病理學(xué)認(rèn)為，細(xì)胞是生物有機(jī)體功能與結(jié)構(gòu)的最小單位，有機(jī)體的衰老最終是由于細(xì)胞衰老導(dǎo)致的[8]。肌細(xì)胞是有機(jī)體內(nèi)最大的細(xì)胞，衰老在骨骼肌組織病理學(xué)水平也應(yīng)有所變化和表現(xiàn)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，與C組相比，M組組織學(xué)變化明顯，所有大鼠都不同程度出現(xiàn)了肌纖維圓形化、細(xì)胞直徑的差別增大、細(xì)胞核中心化等肌細(xì)胞初步萎縮或退行性改變的表現(xiàn)，負(fù)重組和補(bǔ)肽組較M組變化程度減輕，并以PB組和PS組萎縮或退行性改變的程度最輕，各組大鼠肌細(xì)胞異常組織像出現(xiàn)頻數(shù)的分析也證明了此趨勢(shì)?？梢耘袛?，6周D-半乳糖皮下注射復(fù)制亞急性骨骼肌衰老模型，可以造成大鼠骨骼肌細(xì)胞出現(xiàn)萎縮和退行性改變等衰老的跡象，同時(shí)進(jìn)行的負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽的干預(yù)，可以從一定程度上預(yù)防這種骨骼肌萎縮和退行性改變的程度過(guò)早出現(xiàn)。

許多研究將有機(jī)體內(nèi)最重要的抗氧化酶SOD活力和脂質(zhì)過(guò)氧化的降解產(chǎn)物MDA的含量作為反映機(jī)體衰老程度的指標(biāo)[23-24]。而組織中沉積的脂褐素被認(rèn)為是最能反映組織本身衰老的標(biāo)志物，被稱為判斷組織衰老的黃金指標(biāo)[25]。本研究的結(jié)果來(lái)看，6周D-半乳糖皮下注射，可以使M組大鼠血清中SOD活力顯著下降，MDA含量顯著上升，SOD/MDA顯著降低，骨骼肌脂褐素含量顯著升高。提示：此時(shí)大鼠機(jī)體已經(jīng)出現(xiàn)自由基代謝紊亂的情況，正在處于衰老的狀態(tài)，這與國(guó)內(nèi)外的報(bào)道一致[24，26]。兩種干預(yù)方式均能使這種情況得到逆轉(zhuǎn)，提高血清中SOD活力，降低MDA含量，從而提高SOD/MDA比值，降低骨骼肌脂褐素的含量。負(fù)重訓(xùn)練聯(lián)合補(bǔ)充大豆多肽對(duì)自由基清除有明顯的交互作用，并且比單一干預(yù)因素的作用效果更為明顯。提示：兩種干預(yù)方式可以有效提高機(jī)體的抗氧化能力，減少自由基的生成，修復(fù)自由基增多造成的機(jī)體損傷，減輕大鼠機(jī)體衰老的程度，一定程度上可以達(dá)到預(yù)防衰老過(guò)早出現(xiàn)的作用。

骨骼肌總蛋白含量從總體上反映了骨骼肌蛋白質(zhì)代謝的狀況，對(duì)于評(píng)價(jià)骨骼肌的功能具有十分重要的作用。隨著年齡增加，骨骼肌蛋白更新率下降，骨骼肌中蛋白質(zhì)合成減少而分解增加，最終導(dǎo)致衰老機(jī)體骨骼肌蛋白含量的減少。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示：6周D-半乳糖皮下注射，可以使M組大鼠骨骼肌組織總蛋白含量顯著降低，這與以往的研究成果相一致。提示：隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠衰老的程度加深，骨骼肌內(nèi)自由基積累增多，肌蛋白分解增加，導(dǎo)致骨骼肌組織總蛋白含量的降低。運(yùn)動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)兩種干預(yù)方式均可以有效提高大鼠骨骼肌組織總蛋白的含量，兩者的交互作用明顯，比單一干預(yù)因素作用效果更為明顯。提示：負(fù)重訓(xùn)練和補(bǔ)充大豆多肽兩種干預(yù)方式可以有效提高骨骼肌本身的抗氧化能力，減少骨骼肌自由基的生成，糾正骨骼肌組織蛋白質(zhì)合成代謝與分解代謝的不平衡，減輕大鼠骨骼肌的衰老程度。

4結(jié) 語(yǔ)

在本實(shí)驗(yàn)條件下，6周D-半乳糖皮下注射，可以成功復(fù)制大鼠亞急性骨骼肌衰老模型。造模的同時(shí)進(jìn)行負(fù)重訓(xùn)練或補(bǔ)充大豆多肽的干預(yù)，均可以有效的預(yù)防6周D-半乳糖造模過(guò)程中大鼠骨骼肌衰老過(guò)早的出現(xiàn)，而且兩種方式聯(lián)合運(yùn)用效果更為明顯。其作用機(jī)制可能與減少機(jī)體中自由基生成，減輕骨骼肌脂質(zhì)過(guò)氧化程度，減少骨骼肌組織脂褐素的沉積等有關(guān)。

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The Experimental Study of the Intervention in Skeletal Muscle Aging Process by Weight Training and Soy Polypeptide Supplement

LIU Fengbin1,ZHAO Bin2,YAN Wanjun2,MA Bingcun2
(1.School of PE,Dalian University,Dalian 116622,China;2.School of PE,Hebei Normal University,Shijiazhuang 050016,China)

Objective:To study the effect of the intervention on skeletal muscle aging process by weight training and soy polypeptide supplement.Method:56 male SD rats were randomly divided into seven groups:adult group,model group,D-galactose small load exercise group,D-galactose big load exercise group,D-galactose peptide group,D-galactose peptide and small load exercise group,D-galactose peptide and big load exercise group.The rats were killed after 6 weeks,made the frozen sections,and tested serum,as well as indicators of skeletal muscle.Results:Compared with the adult group,body weight and quotidie ingestion of rats had upward and downward trends respectively,weight training and soy polypeptide supplement could mitigate two trends in some extent,but they had no statistical significance;There were some aging evidences of atrophy and retrogression change in skeletal muscle cell of model group, weight training and soy polypeptide supplement could mitigate this trend in some extent;Serum SOD,SOD/MDA ratio and skeletal muscle total protein content of model group were significantly lower than the adult group,serum levels of MDA was significantly higher than the adult group,the exercise and nutrition groups could reverse this trend and had evident interaction;Compared with the adult group,model group significantly increased lipofuscin content in skeletal muscle,the weight training or peptide groups could mitigate or reverse this trend,and they had evident interaction.Conclusion:Weight training or soy polypeptide supplement can prevent the premature appearance in skeletal muscle aging effectively,and the two interference ways united can have more obvious effect.

weight training;soy polypeptide;skeletal muscle;D-galactose;aging

G 804.7

A

1005-0000（2010）01-0033-05

2009-11-02；

2009-12-25；錄用日期：2009-12-31

河北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：C2008000177）；大連大學(xué)博士科研基金聯(lián)合資助項(xiàng)目

劉豐彬（1981-），男，遼寧大連人，博士，大連大學(xué)講師。

1.大連大學(xué)體育學(xué)院，大連116622；2.河北師范大學(xué)體育學(xué)院，石家莊050016。