吳玉臣,郭 爽,楊國宇

(1.鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W校動物醫(yī)學系,河南鄭州450011;2.河南農業(yè)大學牧醫(yī)工程學院,河南鄭州450002)

隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高,越來越多的人關注食品衛(wèi)生與安全。這也要求畜牧業(yè)在發(fā)展的過程中必須少加或不加抗生素,以減少其殘留對人的危害。許多學者認為中草藥可以提高機體的抵抗力,抵抗多種細菌和病毒的攻擊。現已證實某些中草藥的療效與其抗氧化作用密切相關。已發(fā)現的植物藥抗氧化成分有黃酮類、皂苷類、多糖類、有機酸類、萜烯等,這些物質通過清除人體內自由基,還原氧化物質,從而達到保護機體的作用。

本試驗中藥選擇以清熱解毒、抗菌消炎、扶正祛邪、促進機體免疫功能為原則,分別選用炙黃芪、當歸 、何首烏 、淫羊藿 、扁豆 、黃柏 、穿心蓮 、附子 、炙甘草,水煎熬后飲水,研究其對艾維茵肉雞抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 中藥的制備 中藥配方：炙黃芪200 g、當歸160 g、何首烏120 g、淫羊藿120 g、扁豆100 g、黃柏20 g、穿心蓮 20 g、附子 160 g、炙甘草100 g。將上述配方按常規(guī)煎熬方法用水分兩次熬成1 000mL藥液,置于4℃冰箱中備用。

1.2 試驗動物與分組 選1日齡艾維茵肉雞400羽,由河南農業(yè)大學種雞場提供。將試驗雞隨機分為4組,每組 25羽,試驗組三組,對照組一組,每組設4個重復。

1.3 試驗動物的處理 試驗肉雞的飼養(yǎng)按正常標準進行飼喂,自由飲水。試驗組肉雞的飲水中分別加入3個不同劑量的復方中藥液,分別為高劑量組(1 500 mL/t),中劑量組(1 000 mL/t),低劑量組(500mL/t);對照組正常飲水。各組在1、10、20、30 d和40 d無菌采血,分離血漿,冷藏保存。

1.4 測定指標

1.4.1 總SOD活性檢測 總SOD活性檢測采用總SOD活性檢測試劑盒(NBT法)進行測定。試劑盒購自碧云天生物技術研究所。測定樣品來自于1.3所采的無菌血。樣品測定參考表1.使用96孔設置樣品孔和各種空白對照孔。按表1依次加入待測樣品和其他各種溶液。加入酶工作液后充分混勻。37℃孵育20 min～30 min,在 560 nm 測定其吸光度。樣品中總SOD活性的計算公式如下：

待測樣品中SOD活力(units)=抑制百分率/(1-抑制百分率)×稀釋倍數。(當抑制率為50%時SOD酶活力單位為1 units)。抑制百分率=[(A空白對照1-A空白對照2)-(A樣品 -A空白對照3)]/(A空白對照1-A空白對照2)×100%。如果計算出的抑制百分率大于70%或小于30%,則需要把該樣品重新測定。結果偏高,稀釋樣品,結果偏低,則需要重新準備濃度較高的待測樣品。

表1 樣品測定操作方法

1.4.2 總抗氧化能力檢測 總抗氧化能力檢測用試劑盒(FRAP法)進行檢測,試劑盒購自碧云天生物技術研究所。測定樣品來自于1.3所采的無菌血。樣品測定步驟如下：(1)96孔板的每個檢測孔中加200μL FRAP工作液。(2)空白對照孔中加入5μL蒸餾水;標準曲線孔加入5μL各種濃度的FeSO4標準溶液;樣品檢測孔內加入5μL各種樣品,輕輕混勻。(3)37℃孵育3～5 min后在 585～605 nm范圍內測定其OD值。(4)根據標準曲線計算出樣品的總抗氧化能力。如果測定出的OD值在標準曲線外,則需把樣品適當稀釋后再進行測定。(5)總抗氧化能力表示方式：對于FRAP法,總抗氧化能力用FeSO4標準溶液濃度來表示。例如某血漿樣品測定獲得的吸光度和1mmol/L FeSO4標準溶液的吸光度相同,則該血漿樣品的總抗氧化能力為1mmol/L。

2 結果

2.1 抗氧化能力測定

2.1.1 用總SOD活性檢測試劑盒(NBT法)檢測樣品中的SOD活性值,結果見表2。

由表2可以看出,試驗雞10 d時,對照組與試驗各組SOD活性值差異顯著(P＜0.05),各試驗組間差異不顯著(P＞0.05);20、30、40 d時對照組與試驗組間SOD活性值差異極顯著(P＜0.01),各試驗組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.1.2 用總抗氧化能力檢測試劑盒(FRAP法)測定的血液中總抗氧化能力值,結果見表3。

表2 復方中藥對血清中SOD活性值的影響 (units)

表中同列數據肩標字母相同者表示差異不顯著(P＞0.05),字母相鄰者表示差異顯著(P＜0.05),字母相同者表示差異極顯著(P＜0.01)。下表同

表3 復方中藥對血液總抗氧化能力的影響 (mmol/L)

由表3可以看出,10 d、20 d試驗肉雞,其血液中總抗氧化能力對照組顯著低于低劑量組(P＜0.05),極顯著低于中劑量和低劑量組(P＜0.01),中劑量組和高劑量組間差異不顯著(P＞0.05);30 d、40 d試驗肉雞其血液中總抗氧化能力極顯著低于各試驗組(P＜0.01),各試驗組間差異不顯著(P＞0.05)。

3 分析與討論

機體抗氧化能力的強弱表明了機體的健康狀態(tài),抗氧化能力越強,機體越健康。本研究表明,飲水中添加復方中藥后,可顯著或極顯著提高肉仔雞的SOD活性,顯著或極顯著提高肉仔雞血液中的總抗氧化能力,從而說明飲用復方中藥后可顯著或極顯著提高機體肉仔雞的抗氧化能力,提高機體的抗病能力。鄒永新等(2009)以蜂膠、黃芪、扶芳藤等按一定工藝研制成復合中藥佐劑制成疫苗接種鴿后檢測SOD活性,結果表明,復合中藥免疫佐劑試驗鴿的SOD活性均顯著高于不添加任何制劑的對照鴿[1]。吳青等(2006)研究表明,淫羊藿等15種中藥用DPPH法和FRAP法檢測,不同中草藥顯示出不同的抗氧化活性。其中淫羊藿具有較強的抗氧化活性[2]。陳會良等(2006)研究表明,在飼料日糧中添加1%杜仲葉、紫蘇葉、黃芪、淫羊藿復合物,試驗組血清SOD活性顯著高于對照組[3]。武晉孝等(2002)研究表明,淫羊藿、首烏等中藥可顯著提高血清中SOD活性[4]。以上研究所用組方中藥和本研究所用組方中藥都有重復,研究結果也和本研究結果相似,說明某些中藥確能提高機體抗氧化能力。

4 結語

自擬復方中藥可顯著提高機體的抗氧化能力,提高機體的抗病能力。中劑量(1 000mL/t)為最適合添加量。

[1] 鄒永新,肖智遠,李利娜,等.復合中藥佐劑的制備及其對鴿SOD活性影響[J].廣東農業(yè)科學,2009(2)：79-81.

[2] 吳青,黃娟,羅蘭欣.15種中草藥提取物抗氧化活性的研究[J].中國食品學報,2006,6(1)：284-289.

[3] 陳會良,蔡漢喬.草藥添加劑對肉雞抗氧化能力和紅細胞免疫功能的影響[J].中國飼料,2006(3)：17-18.

[4] 武晉孝,李淑琴,王俊東,等.不同中藥組方對肉雞抗氧化作用的影響[J].中國畜牧雜志,2002,38(5)：24-25.