徐玲玲,湯 瀅,周春夢,肖 盈,張佩芬,許益鐫

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲生態(tài)研究室,廣州 510640)

桔小實蠅 Bactrocera dorsalis(Hendel)屬雙翅目 Diptera,實蠅科 Tephritidae,果實蠅屬 Bactrocera Macquart(崔俊霞等,2006),是一種重要的檢疫性害蟲。該蟲寄主范圍廣,可為害芒果、柑桔、番石榴等250多種植物(CABI and EPPO,1996)。在成蟲產(chǎn)卵期,常將卵產(chǎn)在果皮下 1～8 mm處,多成塊狀排列,產(chǎn)卵孔針戳狀,在多數(shù)水果上,產(chǎn)卵孔肉眼不易觀察。

自中國加入 WTO以來,國內(nèi)外貿(mào)易不斷加強,境內(nèi)外農(nóng)產(chǎn)品的流通更為頻繁,桔小實蠅隨商品流通而傳播的風(fēng)險加大(梁光紅等,2003)。而且,進(jìn)境旅客攜帶水果量小,批次多,隱蔽分散,難以控制,傳播桔小實蠅機率很高(詹開瑞和趙士熙,2006)。目前,分子生物學(xué)手段已被用于桔小實蠅的快速鑒定(崔俊霞等,2006)。然而,桔小實蠅的檢疫很大程度上依賴于水果受害后所形成的表面特征,一些剛受害不久的果實,由于其中桔小實蠅的卵尚未孵化或孵化不久未能在水果表面產(chǎn)生明顯的為害特征而使得在檢疫過程中容易被疏忽。另外,桔小實蠅的種群動態(tài)調(diào)查主要采用性誘劑對雄成蟲進(jìn)行監(jiān)測其發(fā)生情況,但造成水果受害的卻是雌蟲,而對雌蟲的監(jiān)測缺乏有效的方法。雌蟲在水果表面留下的產(chǎn)卵孔可被利用以了解雌蟲的發(fā)生情況,以此彌補性誘劑監(jiān)測的缺陷。桔小實蠅產(chǎn)卵孔較小,直徑通常只有 0.2 mm(朱耀沂和葉萬音,1987),多數(shù)水果表面的桔小實蠅產(chǎn)卵孔難以肉眼辯認(rèn)。鑒于以上問題,如果能借助染色劑對桔小實蠅產(chǎn)卵孔進(jìn)行染色處理,使其清晰易見,將具有重要有實際應(yīng)用價值。

為此,本文以芒果、番石榴、夏橙為寄主水果,使用 6種染色劑對寄主水果上產(chǎn)卵孔進(jìn)行染色,測定相應(yīng)濃度和不同冷藏時間下的染色效果,以期為桔小實蠅的口岸檢疫和種群監(jiān)測提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

供試蟲源采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)被桔小實蠅為害的蒲桃落果,帶回實驗室飼養(yǎng)。挑取老熟幼蟲,置于細(xì)沙中化蛹,保持細(xì)沙一定濕度,用細(xì)紗網(wǎng)封口。8～10 d后,蛹羽化,將其置于 30 cm×30 cm×30 cm的木制籠子中,補充人工飼料(酵母粉：蔗糖 =1：3)和水分,保證桔小實蠅生長發(fā)育所需光照,待 8～10 d后,挑取健康成蟲進(jìn)行試驗。

1.2 供試水果和染色劑

供試的 3種水果番石榴 Psidium guajava L.、芒果 Mangifera indica L.和夏橙 Citrus sinensis(L.)Osbeck均購于市面;

甲基藍(lán)、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅和剛果紅等 6種染色劑由天津大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.3 不同染色劑對產(chǎn)卵孔的染色效果試驗

取新鮮完好番石榴、芒果、夏橙各 6個,分別置于 3個飼養(yǎng)有桔小實蠅的木制籠子中,桔小實蠅迅速布滿水果表皮,搜尋試探,并將針狀產(chǎn)卵器插入果皮下產(chǎn)卵。

經(jīng)產(chǎn)卵 1～2 h后,取出水果用 70%的酒精沖洗,待風(fēng)干后,分別放入濃度為 1%的甲基藍(lán)、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅、剛果紅等 6種染色劑中,染色3 min,取出用清水沖洗干凈。觀察并記錄水果表皮被染顏色、染色斑點大小、染色深淺等情況,挑取染色孔如發(fā)現(xiàn)有卵就確定為產(chǎn)卵孔,每 30個被染色的斑點為一個處理,每處理重復(fù) 5次。染色率的計算方法如下：

1.4 染色劑濃度對產(chǎn)卵孔染色效果的影響試驗

根據(jù) 1.3試驗結(jié)果篩選出 3種寄主水果最適染色劑,分別在濃度為 0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和 3%的條件下進(jìn)行染色。試驗中每 30個被染色斑點為一個處理,每處理重復(fù) 5次。

1.5 冷藏時間對產(chǎn)卵孔染色效果的影響試驗

將水果分別置于 3個養(yǎng)蟲箱中,產(chǎn)卵 1～2 h取出被產(chǎn)卵水果置于 5℃的冰箱中冷藏保存。冷藏保存期間,每天觀察果皮顏色、果皮皺縮及腐爛變化情況,并做好記錄。在在冷藏保存 0 d,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d取出水果進(jìn)行染色,檢查產(chǎn)卵孔,計算染色率。試驗中每 30個被染色斑點為一個處理,每處理重復(fù) 5次。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種寄主水果產(chǎn)卵孔的染色效果

在室溫條件下,濃度為 1%的 6種染色劑分別對芒果、番石榴、夏橙 3種寄主水果染色結(jié)果見表1。結(jié)果表明,不同染色劑對芒果上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色效果存在顯著差異(F=4.454,P=0.005)。甲基藍(lán)和藏紅對芒果產(chǎn)卵孔染色效果較好,染色率分別為 90.67%和 86.00%;而龍膽紫的染色效果最差,染色率僅為 60.67%。甲基藍(lán)將芒果產(chǎn)卵孔染成藍(lán)色斑點,與芒果黃色果皮產(chǎn)生明顯對比,使得肉眼清晰易辨,而芒果健康果皮不被染上顏色,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,可確定芒果最適染色劑為甲基藍(lán)。由表 1可知,不同染色劑對番石榴上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色效果存在差異(F=4.381,P=0.006)。藏紅對番石榴產(chǎn)卵孔的染色率最高,為 88.67%;藏紅將番石榴產(chǎn)卵孔染色后,產(chǎn)卵孔清晰可見,呈紫紅色,明顯區(qū)別于番石榴青綠色果皮,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,確定藏紅為番石榴最適染色劑。染色劑的種類對夏橙上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色率卻無顯著影響(F=1.889,P=0.134),但剛果紅對夏橙產(chǎn)卵孔染色效果較好,染色率達(dá) 98.00%,高于甲基藍(lán)和曙紅的染色率;剛果紅將夏橙產(chǎn)卵孔染成深紅色,與夏橙深綠色果皮明顯不同,結(jié)合染色率和染色現(xiàn)象,確定剛果紅為夏橙的最適染色劑。

表 1 不同染色劑在 3種寄主水果上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 1 Dyeing rate of 3dye for oviposition apertures of B.dorsalis

2.2 不同濃度條件下染色劑對桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色效果

根據(jù) 2.1的結(jié)果,分別選擇甲基藍(lán)、藏紅和剛果紅作為芒果、番石榴和夏橙的染色劑。結(jié)果表明,在供試的 6種濃度條件下各寄主水果上桔小實蠅產(chǎn)卵孔染色率均存在差異(P＜0.05)。但在染色劑濃度為 0.5%時染色效果較佳,同時節(jié)約染色劑,故可選擇 0.5%的染色劑濃度(表 2)。

表 2 不同濃度條件下 3種寄主水果上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 2 Dyeing rate of different concentrations for oviposition apertures of B.dorsalis

2.3 不同冷藏時間條件下染色劑對桔小實蠅產(chǎn)卵孔

寄主水果被桔小實蠅產(chǎn)卵后,在 5℃條件下,冷藏保存 0～5 d,水果表皮仍完好,芒果、番石榴略顯皺縮,無腐爛現(xiàn)象,染色后,產(chǎn)卵孔清晰可見,染色率大多在 90%以上。結(jié)果表明,被桔小實蠅產(chǎn)卵后的芒果和番石榴經(jīng)過不同時間的冷藏產(chǎn)卵孔染色率無顯著差異(P＞0.05)。但夏橙在冷藏后,不同的冷藏時間產(chǎn)卵孔的染色率產(chǎn)生明顯差異(F=3.988,P=0.009),除了第 3天染色率為 76.83%,其余均大于 80%(表 3)。由此可見,該方法亦適用于持續(xù)冷藏保存的水果產(chǎn)卵孔檢測。

表 3 不同冷藏時間條件下 3種寄主水果上桔小實蠅產(chǎn)卵孔的染色率Table 3 Dyeing rate of dye for oviposition apertures of B.dorsalis on fresh fruit after cold conservation

3 結(jié)論與討論

桔小實蠅在新鮮水果上留下針戳狀的產(chǎn)卵孔,以肉眼很難找出其位置。但供試的 3種水果上的產(chǎn)卵孔經(jīng)過染色后,形成了直徑 0.2～0.5 mm的色斑,可容易被找出。不同的水果適用的染色劑種類不同,如甲基藍(lán)對芒果上產(chǎn)卵孔的染色效果較好,而龍膽紫染色后顏色較淡而較易受干擾。番石榴上產(chǎn)卵孔經(jīng)藏紅染色后較易辨別,而剛果紅則更適合于夏橙。

桔小實蠅的為害程度調(diào)查一般以果實受害率為指標(biāo)。但鮮果上受害狀則因季節(jié)、受害果種類不同而存在差異,通常自產(chǎn)卵 5～10 d后其中的幼蟲至中齡或老齡才能顯示出表面的受害特征(朱耀沂和葉萬音,1987)。然而此時的調(diào)查結(jié)果受到卵的孵化率和幼蟲死亡率等因素的影響,未能準(zhǔn)確反映雌蟲的產(chǎn)卵情況。而通過染色的試驗?zāi)芊从辰坌嵪壴谔镩g的產(chǎn)卵動態(tài),更適時和準(zhǔn)備掌握桔小實蠅對水果的為害情況。因此,在熟悉當(dāng)?shù)亟坌嵪壈l(fā)生情況的基礎(chǔ)上,雖然染色法可作為調(diào)查的手段。在進(jìn)出境截獲的水果上,由于實蠅種類較多而且為害特征相近,在不清楚水果的來源情況下,雖然染色法不能直接用于判定是否遭受桔小實蠅為害,但是染色法可用于檢查是否存在實蠅類害蟲產(chǎn)卵孔,經(jīng)進(jìn)一步飼養(yǎng)觀察可判斷具體的實蠅種類。

References)

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