陜西省人民醫(yī)院急診外科(西安710068)

宋 斌 黨星波 楊培新 韓希望

近年研究發(fā)現(xiàn),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)之間存在一具有拮抗全身性炎性反應(yīng)作用的通路,該通路由迷走神經(jīng)及遞質(zhì)乙酰膽堿所構(gòu)成,故命名為膽堿能抗炎通路(Cholinerganti-inflammatory pathway)[1]。本研究通過制作急性胰腺炎模型動(dòng)物,通過擬膽堿酯酶劑卡巴膽堿興奮膽堿能通路對(duì)急性胰腺炎大鼠血清中細(xì)胞因子水平影響。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)分組 Wistar大鼠 90只,重250～300g,根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法分為假手術(shù)組、對(duì)照組、卡巴膽堿組各 30只。

2 試劑和議器 大鼠 TNF-α,IL-6,IL-1酶聯(lián)免疫吸附試劑盒由深圳精美公司提供。牛黃膽酸鈉由美國(guó) SIGMA公司提供。

3 模型制作

3.1 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng) 7d,實(shí)驗(yàn)前禁食 12h,不禁水。3%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,常規(guī)消毒,沿腹正中線切口,長(zhǎng)約 4cm,進(jìn)入腹腔后,輕輕撥開肝葉(新鮮正常肝葉呈淡肉紅色),尋及十二指腸,輕柔提出約5 cm長(zhǎng)度,右翻十二指腸,見片狀胰腺,色淡紅微黃,膽胰管為半透明乳白或略呈淡黃色。固定十二指腸,使膽胰管伸直,找到十二指腸乳頭開口(較周圍腸壁略發(fā)白),使用 24 G留置針穿破腸壁,可感覺十二指腸乳頭略高于腸壁,抬高針尖,順利進(jìn)入膽總管后,順著膽總管方向輕柔進(jìn)針約 3cm,退出針芯,可見黃色的膽汁流出。用微型血管夾夾住近肝端,將 3.5%牛膽酸溶液,按 0.1ml/100 g微泵泵入,5 min內(nèi)泵完。留置針和微血管夾保留5 min后,拔除留置針,打開微血管夾。在十二指腸懸韌帶下與回盲瓣上 10cm各剪開一個(gè)小口,插入直徑0.5cm的插管,用線扎緊,觀察到大鼠胰腺出現(xiàn)水腫、出血和壞死等改變,即為造模成功。縫合腹部切口,腸內(nèi)插管另一端置于體外,以備液體空腸灌注。

3.2 假手術(shù)模型制作:術(shù)前準(zhǔn)備至進(jìn)入腹腔操作步驟同手術(shù)組,穿破腸壁后,留置針保留 5 min,不注射藥物。

3.3 分組:將90只大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)模型組、對(duì)照組和卡巴膽堿治療組,每組 30只。

假手術(shù)模型組:假手術(shù)模型造模成功后,生理鹽水0.4ml/100 g,經(jīng)胃管注入,1次 /2 h,6 h后經(jīng)腹腔靜脈取血送檢;對(duì)照組:造模成功后,生理鹽水 0.4 ml/100g,經(jīng)空腸置管注入,1次 /2 h,6 h后經(jīng)腹腔靜脈取血送檢;卡巴膽堿治療組:SAP模型造模成功后,生理鹽水 0.4 ml/100 g加卡巴膽堿30μg/100g,經(jīng)空腸置管注入,1次 /2 h,6 h后經(jīng)腹腔靜脈取血送檢。

4 細(xì)胞因子測(cè)定 分別將各組大鼠腹腔靜脈血,取上清液離心 15min后用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中IL-6,IL-1,TNF-α含量。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包,所有數(shù)據(jù)均以±s表示,作重復(fù)測(cè)量方差分析。

結(jié) 果

試驗(yàn)結(jié)果,見附表?？ò湍憠A治療組血清IL-6、IL-1及TNF-α水平高于假手術(shù)組,但低于對(duì)照組(P＜0.01)。

附表 各組生物因子的變化(pg/ml,±s)

附表 各組生物因子的變化(pg/ml,±s)

P＜0.01,卡巴膽堿治療組比SAP組;P＜0.01,卡巴膽堿治療組對(duì)比假手術(shù)模型組

對(duì)照組 308.5±34.0* 70.96±7.34 131.0±28.6治療組 108.9±4.1 86.66±12.35 51.6±4.6*

討 論

自從 1988年Rindemehet首次提出 SAP中“白細(xì)胞過度激活”學(xué)說后[2],關(guān)于SAP發(fā)病過程中炎癥介質(zhì)的研究就一直沒有間斷過,實(shí)驗(yàn)和研究表明[3～5],在AP時(shí)就常伴有某些炎癥介質(zhì)的升高,并且其升高的幅度與病情的嚴(yán)重程度有關(guān),這些炎癥介質(zhì)進(jìn)入血液循環(huán),又激活機(jī)體的其他炎癥細(xì)胞,釋放了大量的炎癥介質(zhì),正是由于這些炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的瀑布式連鎖反應(yīng)才促成了急性重癥胰腺炎病程中的全身炎性反應(yīng)綜合征和多系統(tǒng)器官衰竭,應(yīng)用某些炎癥介質(zhì)的拮抗劑,可以降低胰腺炎的嚴(yán)重程度和病死率。目前已知參與急性胰腺炎時(shí)全身炎性反應(yīng)的炎癥介質(zhì)主要有白細(xì)胞介素-1、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF等細(xì)胞因子和磷脂酶A、血小板活化因子、花生四烯酸的代謝產(chǎn)物等。IL-6、IL-1是重要的促炎因子,主要由單核 /巨噬細(xì)抱產(chǎn)生,在膿毒血癥、燒傷、重大創(chuàng)傷、休克、急性胰腺炎時(shí)可明顯升高,并與SIRS、MODS發(fā)病程度和病死率有著顯著的正相關(guān)性[5～8]。

膽堿能抗炎通路是新近發(fā)現(xiàn)的一條神經(jīng)-免疫抗炎通路,它的抗炎作用已經(jīng)在國(guó)外多項(xiàng)研究報(bào)告中得到證實(shí),電刺激迷走神經(jīng)或應(yīng)用膽堿脂酶抑制藥物或乙酰膽堿受體激動(dòng)劑,可以抑制巨嗜細(xì)胞合成 TNF-α,還有核轉(zhuǎn)錄因子 NF-κb,這些炎癥始動(dòng)因子得到抑制[9～11]。卡巴膽堿是一種膽堿能激動(dòng)劑,具有促進(jìn)胃腸動(dòng)力,擴(kuò)張血管,增加腺體分泌等作用,臨床常用于治療術(shù)后胃腸脹氣和尿潴留?？ò湍憠A改善腸缺血-再灌注損傷的作用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已得到證實(shí),能減輕腸道局部炎癥反應(yīng)、擴(kuò)張血管、促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)、減少腸粘膜通透性;能顯著降低缺血—再灌注損傷引起的全身性炎癥反應(yīng)[9]。本研究通過大鼠空腸內(nèi)灌注卡巴膽堿實(shí)現(xiàn)膽堿能抗炎通路在急性胰腺炎中的抗炎作用。研究發(fā)現(xiàn)對(duì)照組 6h后細(xì)胞因子水平都明顯升高,卡巴膽堿治療組血清 IL-6、IL-1及TNF-α水平高于假手術(shù)組,但低于對(duì)照組(P＜0.01)。本研究證實(shí):空腸內(nèi)灌注卡巴膽堿在大鼠實(shí)驗(yàn)性急性胰腺炎中,可以有效降低TNF-α、IL-6及IL-1細(xì)胞因子的升高幅度,從而減輕細(xì)胞因子對(duì)機(jī)體的損害。

本研究發(fā)現(xiàn)空腸內(nèi)灌注卡巴膽堿實(shí)現(xiàn)膽堿能抗炎通路在急性胰腺炎中的抗炎作用,降低急性胰腺炎大鼠早期細(xì)胞損害性因子水平,為急性胰腺炎的治療開辟了新的有效途徑,如何將其應(yīng)用于臨床及可能存在的問題還需繼續(xù)探索。但是,作為一種新的神經(jīng)-內(nèi)分泌抗炎途徑,其臨床應(yīng)用前景十分廣泛,尤其在重癥胰腺炎所致的全身炎癥反應(yīng)和多器官功能障礙的治療方面為我們提供了新的思路和理論依據(jù)。

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