劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

·論著·

Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌組織中的表達及意義

劉俊 裘正軍 江弢 黃陳 孫晶 孫紅成 鐘福全 金宇彪 胡宏慧

目的了解Akt和磷酸化Akt1(p-Akt1)蛋白在胰腺癌組織中的表達情況，探討其臨床意義。方法應用免疫組織化學法檢測74例胰腺癌組織、10例正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達，并分析其與臨床病理學特征及預后的關系。結果Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中的陽性表達率分別為87.8%和83.8%，而正常胰腺組織均陰性表達，相差非常顯著(Plt;0.05)。癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達呈正相關性(r=0.274,P=0.018)。Akt和p-Akt1蛋白表達與年齡、性別、腫瘤生長部位、腫瘤大小、病理學分級、淋巴結轉移、臨床分期及神經浸潤均無顯著相關性(Pgt;0.05)，但p-Akt1蛋白高表達與病理學T分期及TNM分期相關(P=0.002)。Akt和p-Akt1蛋白高表達者的中位生存期分別為(16.0±5.7)個月和(23.0±5.5)個月，明顯高于低表達者的(9.3±0.2)個月和(11.1±1.8)個月(P分別為0.007和0.004)。結論胰腺癌組織中p-Akt1蛋白表達的程度與良性預后有關，檢測胰腺癌中p-Akt1蛋白的表達具有一定的臨床意義。

胰腺腫瘤； 免疫組織化學； 蛋白激酶類； Akt； p-Akt1； 預后

Akt是一個絲/蘇氨酸激酶，可被很多生長因子激活，進而通過抑制凋亡和調節(jié)細胞增殖在腫瘤的發(fā)生以及耐藥中起著重要作用[1-2]。Akt有三個亞型(Akt1、Akt2和Akt3)，在腫瘤中的作用不同[3]。磷酸化Akt(p-Akt)為其活化狀態(tài)，在胰腺癌的作用存在爭議[4-5]。為此，本研究檢測胰腺癌組織和正常胰腺組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達，分析其與臨床病理學特征及預后的關系。

材料與方法

一、病例資料

收集上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院1993年8月至2009年1月手術切除的胰腺癌標本74例，其中男50例，女24例，平均年齡(64±10)歲(40～80歲)。另取10例正常胰腺組織標本作為對照。通過電話和直接上門相結合的方式進行隨訪。

二、Akt和p-Akt1蛋白表達的檢測

采用免疫組織化學法檢測，嚴格按試劑盒(上海明睿公司)說明書操作。參考Shah等[6]的標準，隨機選擇5個高倍視野，每視野計數(shù)500個細胞，無陽性細胞為-,陽性細胞lt;10%為+，10%～50%為++，gt;50%為+++。-和+為低表達組，++和+++為高表達組。

三、統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0軟件分析。Akt和p-Akt1的相關性采用Spearman等級檢驗分析，Akt和p-Akt1表達與臨床病理資料間關系用χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-meier法，Plt;0.05為有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白的表達

Akt和p-Akt1蛋白主要在細胞質中表達，少數(shù)在細胞核中表達(圖1)。Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌組織中總的陽性表達率分別為87.8%和83.8%，陽性細胞數(shù)≥10%的表達率分別為73.0%和55.4%，陽性細胞數(shù)≥50%的表達率為28.4%和21.6%，而正常胰腺組織中均呈陰性表達(Plt;0.05)。

二、胰腺癌Akt和p-Akt1蛋白表達的相關性

胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達具有正相關性(表1，r=0.274,P=0.018)。

三、胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白表達與臨床病理學特征的關系

胰腺癌Akt蛋白表達與年齡、性別、腫瘤生長部位、腫瘤大小、病理分級、淋巴結轉移、臨床分期及神經浸潤均無顯著相關性。而p-Akt1高表達與腫瘤T分期及TNM分期相關(表2)，與其他特征無顯著相關性(Pgt;0.05)。

四、Akt和p-Akt1蛋白表達與預后

胰腺癌患者總的中位生存期為(14.3±1.4)個月。Akt高表達者的中位生存期為(16.0±5.7)個月，明顯高于低表達者的(9.3±0.2)個月(圖2a，P=0.007)。p-Akt1高表達者的中位生存期為(23.0±5.5)個月，明顯高于低表達者的(11.1±1.8)個月(圖2b，P=0.004)。多因素分析顯示，TNM分期為胰腺癌預后差的因素(r=1.436，P=0.041)，p-Akt1為胰腺癌良性預后因素(r=0.421，P=0.010)。

表1 胰腺癌組織Akt和p-Akt1蛋白的表達(例數(shù))

圖1正常胰腺和胰腺癌組織中Akt和p-Akt1的表達(SP ×400)。(a)正常胰腺Akt陰性表達，(b～e)胰腺癌中Akt表達(-、+、++、+++)；(f)正常胰腺p-Akt1陰性表達；(g～j)胰腺癌中p-Akt1表達(-、+、++、+++)

表2胰腺癌組織中Akt和p-Akt1蛋白表達與臨床病理學特征的關系

參 數(shù)例數(shù)Akt蛋白低表達高表達p-Akt1蛋白低表達高表達年齡 ≤60歲244201212 gt;60歲5016342129性別 男5011392426 女24915915腫瘤部位 胰頭6517482936 胰體尾93645分化程度 高分化15411411 中分化4713342324 低分化103764淋巴結轉移 無4611352224 有289191117T分期 T1+T228622622a T34614322719TNM分期 Ⅰa+Ⅰb19514415a Ⅱa27621189 Ⅱb+Ⅲ+Ⅳ289191117神經浸潤 無3410241616 有307231317腫瘤大小 ≤2cm101928 gt;2cm6419453133

注：aPlt;0.01

圖2胰腺癌組織Akt(a)和p-Akt1(b)蛋白表達與患者生存期的關系

討 論

Hutchinson等[7]報道Akt1高表達可加速ErbB-2介導的乳腺腫瘤的發(fā)生，但抑制腫瘤的侵襲能力。Maroulakou等[8]報道，不表達Akt1的腫瘤更具有侵襲性。Chadha等[4]報道，Akt蛋白在胰腺癌的高表達率為71.8%。在很多胰腺癌細胞株中Akt也高表達[9]。本實驗結果顯示，胰腺癌組織Akt蛋白的高表達率為73.0%，明顯高于正常胰腺組織。而且p-Akt1蛋白高表達與腫瘤病理學T分期及TNM分期相關，提示Akt1的高表達可能與胰腺癌的局部侵襲能力下降有關，與上述文獻報道結果一致。

Akt在PI3K或缺氧微環(huán)境的刺激下發(fā)生磷酸化，其中T308位點和S473位點的同時磷酸化為Akt活化所必需。激活的Akt從細胞質募集至胞膜或轉位到胞核，使底物蛋白特定部位的絲氨酸、蘇氨酸磷酸化。p-Akt通過抑制凋亡促進細胞的存活，在腫瘤的發(fā)生中起重要作用。Ng等[9]報道，p-Akt1在很多胰腺癌細胞株中高表達。本結果顯示，p-Akt在胰腺癌組織中也高表達，且Akt和p-Akt1蛋白的表達存在明顯的正相關，提示Akt的磷酸化激活與Akt的異常過表達有關。

至于p-Akt對胰腺癌預后的意義存在爭議。Chadha等[4]認為，p-Akt是胰腺癌預后良好的指標之一，而Yamamoto等[5]認為，p-Akt在胰腺癌的高表達與預后差相關。本結果顯示，Akt和p-Akt1蛋白高表達者的中位生存期均明顯高于低表達者，多因素分析提示p-Akt1高表達為良性預后因素。這可能與p-Akt1高表達者胰腺癌的局部浸潤少有關。

[1] Woodgett JR.Recent advances in the protein kinase B signaling pathway.Curr Opin Cell Biol,2005,17:150-157.

[2] Sheng S,Qiao M,Pardee AB.Metastasis and AKT activation.J Cell Physiol,2009,218:451-454.

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[4] Chadha KS,Khoury T,Yu J,et al.Activated Akt and Erk expression and survival after surgery in pancreatic carcinoma.Ann Surg Oncol,2006,13:933-939.

[5] Yamamoto S,Tomita Y,Hoshida Y,et al.Prognostic significance of activated Akt expression in pancreatic ductal adenocarcinoma.Clin Cancer Res,2004,10:2846-2850.

[6] Shah A,Swain WA,Richardson D,et al.Phospho-akt expression is associated with a favorable outcome in non-small cell lung cancer.Clin Cancer Res,2005,11:2930-2936.

[7] Hutchinson JN,Jin J,Cardiff RD,et al.Activation of Akt-1 (PKB-alpha) can accelerate ErbB-2-mediated mammary tumorigenesis but suppresses tumor invasion.Cancer Res,2004,64:3171-3178.

[8] Maroulakou IG,Oemler W,Naber SP,et al.Akt1 ablation inhibits, whereas Akt2 ablation accelerates,the development of mammary adenocarcinomas in mouse mammary tumor virus (MMTV)-ErbB2/neu and MMTV-polyoma middle T transgenic mice.Cancer Res,2007,67:167-177.

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2009-07-15)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionandclinicalsignificanceofAktandphosphoryledAkt1inpancreaticcarcinoma

LIUJun,QIUZheng-jun,JIANGTao,HUANGCheng,SUNJing,SUNHong-cheng,ZHONGFu-quan,JINYu-biao,HUHong-hui.

DepartmentofGeneralSurgery,FirstPeople′sHospitalofShanghai,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China

QIUZheng-jun,Email:qiuwryb@online.sh.cn

ObjectiveTo investigate the expression of Akt and phosphoryled Akt (p-Akt1) protein in pancreatic carcinoma and to determine the clinical significance.MethodsIn 74 cases of pancreatic carcinoma and 10 cases of normal pancreatic tissue samples, the expression of Akt and p-Akt1 were detected by immunohistochemical method, and the its relationship with clinicopathologic characteristics and prognosis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma were 87.8% and 83.8% respectively, while there was no expression of Akt and p-Akt1 in normal pancreatic tissue, and the difference was statistically significant (plt;0.05). There was a positive correlation between the expression of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma (r=0.274,P=0.018). The expression of Akt and p-Akt1 was not significantly associated with the age, sex, location, size, pathology stages, lymph nodes metastasis, clinical stages and nerve invasion of the tumor (Pgt;0.05). But the higher expression of p-Akt1 was associated with T stages and TNM staging (p=0.002). Patients with high intensity of Akt and p-Akt1 expression showed a significantly longer median survival time [(16.0±5.7) month and (23.0±5.5) month, respectively] than those with low intensity expression [(9.3±0.2) month and (11.1±1.8) month (P=0.007 andP=0.004) respectively].Conclusionsp-Akt1 expression is a significant positive prognostic factor for pancreatic carcinoma and detection of p-Akt1 expression may be of clinical value.

Pancreatic neoplasms； Immunohistochemistry； Protein kinases; Akt； p-Akt1； Prognosis

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.018

200080 上海，上海交通大學附屬第一人民醫(yī)院普外科(劉俊、裘正軍、江弢、黃陳、孫晶、孫紅成、鐘福全)，病理科(金宇彪 、胡宏慧)

裘正軍，Email: qiuwryb@online.sh.cn