徐 露 黃 彥 董 志 易 東

1 重慶醫(yī)科大學(重慶 400016）

2 重慶市中醫(yī)院(重慶 400021）

3 第三軍醫(yī)大學（重慶 400038）

潰瘍性結(jié)腸炎 (UC）是以直腸、結(jié)腸黏膜及黏膜下層的炎癥和潰瘍形成為病理特點的慢性非特異性腸道疾病，其發(fā)機理尚不完全清楚。兩面針系蕓香科花椒屬植物，具有驅(qū)風濕、消腫止痛之功效，主要用于治療風濕關(guān)節(jié)痛、跌打扭傷腫痛、神經(jīng)痛、牙痛等。兩面針生物堿為其主要有效成分。本研究旨在觀察兩面針對UC大鼠活動指數(shù)(DAI）、血清腫瘤壞死因子α(TNF－α）、白細胞介素8(IL－8）、超氧化物歧化酶 (SOD）及丙二醛(MDA）的影響，以確定其對UC的治療作用，為開發(fā)經(jīng)濟有效的治療UC藥物提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級SD大鼠50只，由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供，雄性，體質(zhì)量150～200g。隨機分為5組，每組10只。兩面針購自安徽致和堂藥業(yè)有限公司（批號：20080508，純度＞85%）；2，4－二硝基氯苯（DNCB）購自美國Sigma公司；柳氮磺胺吡啶(SASP）購自上海三維制藥有限公司（批號：20080703）；血清TNF－α、IL－8檢測試劑盒購自河南華美公司；SOD、MDA檢測試劑盒購自南京建成公司。

1.2 方法 （1）模型制備：模型對照組、SASP組和TAZ高、低劑量組大鼠采用DNCB和乙酸聯(lián)合建模法復制UC模型。大鼠頸背部用100mg/L Na2S脫毛后,以20g/L的DNCB丙酮液0.25mL(5滴）滴背，每日1次，連續(xù)14d，在第15日以直徑3mm導尿管經(jīng)肛門插入結(jié)腸腔8cm處，注入0.1%DNCB乙醇液0.25mL，第16日在同一部位注入8%乙酸溶液2mL，準確計時10s后，再用5mL生理鹽水沖洗。繼續(xù)飼養(yǎng)2周，造模動物出現(xiàn)糞便稀溏和黏液膿血便等UC常見癥狀。（2）給藥方法：正常對照組與模型對照組大鼠給予生理鹽水1mL/200g，SASP組灌胃SASP 100mg/200g,兩面針高劑量組灌胃兩面針200mg/200g，兩面針低劑量組灌胃兩面針100mg/200g，每日灌胃1次，連續(xù)14d。每日觀察各組大鼠腹瀉、便血、體重改變等情況，評價疾病活動指數(shù)。14d后，各組大鼠斷頭取血，分離血清，檢測血清TNF－ α、IL －8、SOD 及 MDA 水平。（3）疾病活動指數(shù)(DAI）評價及血清各指標檢測：采用DAI評價UC。血清TNF－α、IL－8水平測定采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定；SOD活性、MDA含量用比色法測定；均嚴格按照試劑盒規(guī)定方法測定。

1.3 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示，采用 t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組DAI評分、血清TNF－α及IL－8水平比較 見表1。模型對照組DAI分值、血清TNF－α及IL－8水平較正常對照組明顯增高（P ＜0.01）；兩面針兩治療組DAI、血清TNF－α、IL－8較模型組對照明顯降低（P＜0.05）；兩面針低劑量組與SASP組各數(shù)值差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；兩面針高劑量組各指標較SASP組明顯降低（P ＜0.05）。

表1 各組大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比較 (）

表1 各組大鼠DAI、血清TNF－α及IL－8水平比較 (）

與正常對照組比較，*P＜0.01；與模型對照組比較，▲P＜0.01；與兩面針低劑量組比較，△P＜0.05。下同

組 別正常對照組模型對照組SASP組兩面針高劑量組兩面針低劑量組DAI評分(分）0.62±0.43 8.11±1.74*3.87±1.38 2.76±0.91▲△3.65±1.22▲TNF－α（ng/L）6.86±1.51 38.79±8.10*24.55±6.36 16.76±4.25▲△22.48±5.72**IL－8（ng/L）2.48±0.79 26.43±6.57*14.26±3.85 10.27±3.06▲△14.53±3.98▲

2.2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 見表2。模型對照組SOD活力較正常對照組明顯降低，MDA含量較正常對照組明顯增高，差異都具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；兩面針兩治療組SOD活力較模型對照組增高，MDA含量較模型對照組降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；兩面針低劑量組與SASP組的SOD活力、MDA含量水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；兩面針高劑量組SOD值顯著高于SASP組；MDA水平低于SASP組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）。

3 討論

UC的病因及發(fā)病機制尚未完全明了，目前大多學者認為UC的發(fā)生是免疫、遺傳、環(huán)境及腸道細菌等多種因素共同作用的結(jié)果，其中免疫因素是最重要的因素之一。細胞因子在調(diào)節(jié)腸道免疫中扮演重要角色。TNF－α和IL－8是具有多種生物學活性的細胞因子，也是重要的炎癥因子，可參與許多變態(tài)反應(yīng)性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生。研究表明，IL－8是一種較強的白細胞趨化因子。多種炎癥介質(zhì)如TNF－α、IL－l等均能誘導單核細胞、巨噬細胞及血管內(nèi)皮細胞分泌IL－8。UC患者的外周血中TNF－α和IL－8水平均顯著增高。因此，IL－8可進一步通過對中性粒細胞的趨化作用，導致腸組織內(nèi)各種炎癥細胞浸潤；而TNF－α可加重并促進腸黏膜組織炎性損傷。本研究表明，兩面針能夠明顯降低UC大鼠血清TNF－α和IL－8水平，從而減輕炎癥反應(yīng)，可能是其治療UC的主要機制之一。

表2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 (）

表2 各組大鼠血清SOD活力及MDA含量水平比較 (）

與SASP組比較，▲P＜0.05

組 別正常對照組模型對照組SASP組兩面針高劑量組兩面針低劑量組SOD（NU/mL）12.84±2.26 5.55±1.13*10.16±1.69 11.52±1.80**▲9.89±1.54**MDA(μm/mL）26.92±5.18 60.34±11.86*36.21±6.47 28.65±5.65**▲35.93±6.42**

目前已有大量文獻報道氧自由基損傷是UC發(fā)病過程的一個重要因素，可提高機體抗自由基損傷的能力,同時降低MDA含量,對UC有明顯的治療作用。本實驗表明，兩面針能顯著提高UC大鼠SOD活力，降低MDA含量，說明兩面針有良好的抗氧自由基損傷作用，這也可能是其治療UC的主要機制之一。綜上所述，兩面針有良好的抗UC作用，這可能與其降低TNF－α、IL－8及MDA水平，提高SOD活力有關(guān)。

[1]劉紹華，覃青云，方堃，等.兩面針提取物(S－O）對小鼠鎮(zhèn)痛、抗炎和止血作用的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2005，17(6）：758.

[2]Matsuda H,Li Y,Yoshikawa,et al.Role of capsaicin－sensitive sensory nerves,endogenous nitric oxide,sulfhydrylsi and prostaglandins in gastroprotection by momordin Ic,an oleanolic acid oligoglycoside,on ethanol－ induced gastric mucosal lesions in rats[J].Life Sci，1999,65(2）：27.

[3]Konturek SK,Konturek PC.Role of nitric oxide in the digestive system[J].Digestion，1995,56(1）：1.

[4]謝云峰.兩面針提取物抗氧化作用[J].時珍國醫(yī)國藥，2000,11(1）：1.

[5]湯玉妹.兩面針化學成分的研究[J].中草藥，1994,25(10）：550.