馬君一，劉煥美，顧一珠

(1.山東大學(xué) 威海分校 海洋學(xué)院 08級(jí)藥學(xué)，山東 威海 264209;2.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012;3.山東大學(xué) 齊魯醫(yī)院 藥學(xué)部，山東 濟(jì)南 250012)

氯諾昔康凝膠劑的研制

馬君一1，劉煥美2，顧一珠3

(1.山東大學(xué) 威海分校 海洋學(xué)院 08級(jí)藥學(xué)，山東 威海 264209;2.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012;3.山東大學(xué) 齊魯醫(yī)院 藥學(xué)部，山東 濟(jì)南 250012)

目的 制備氯諾昔康凝膠劑，考察其體外經(jīng)皮滲透性。方法 采用紫外分光光度法測定氯諾昔康的表觀溶解度和油水分配系數(shù)，采用Franz擴(kuò)散池考察載藥凝膠劑的體外經(jīng)皮滲透性，以6 h累積滲透量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選最佳處方，探討了卡波姆濃度、氮酮及丙二醇用量對(duì)氯諾昔康凝膠劑經(jīng)皮滲透的影響，并考察其局部刺激性。結(jié)果 氯諾昔康在水、pH 6.8和pH 7.4磷酸鹽緩沖液中的表觀溶解度分別為8.65，86.0和324.0 μg/mL，油水分配系數(shù)為1.52;正交試驗(yàn)優(yōu)化的最佳處方為:含0.75%卡波姆、30%丙二醇、4%月桂氮卓酮。制備的凝膠劑外觀細(xì)膩，黏度適宜，pH值為6.8～7.0，體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，家兔各涂藥部位無水皰、疹塊、紅腫等現(xiàn)象。結(jié)論 氯諾昔康凝膠劑制備工藝簡單，質(zhì)量可控。

氯諾昔康;凝膠劑;經(jīng)皮擴(kuò)散;表觀溶解度;油水分配系數(shù)

氯諾昔康(Lornoxicam，LNXC)是由Nycomed公司開發(fā)的一種新型昔康類非甾體類抗炎藥，于1997年10月首次在丹麥上市(商品名Xefo)［1］。LNXC治療骨關(guān)節(jié)炎(OA)具有雙重作用。既能達(dá)到鎮(zhèn)痛和抗炎的目的又能減少關(guān)節(jié)炎的破壞，防止骨變性，修復(fù)受損關(guān)節(jié)。目前市售LNXC有片劑和注射劑兩種劑型，常存在胃腸道反應(yīng)［2］。本文研制了經(jīng)皮給藥的LNXC凝膠劑，以提高局部藥物濃度，避免胃腸道毒副作用。

1 材料

UV-2102PCS型紫外—可見分光光度計(jì)，上海尤尼柯儀器有限公司;NDJ-8S數(shù)顯黏度計(jì)，上海天平儀器廠。

LNXC，常州市湖濱醫(yī)藥原料有限公司;卡波姆-940，上海人民制藥廠;其它試劑均為市售分析純。

昆明種雄性小白鼠、家兔，山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào):SCXK(魯)20090001。

2 方法

2.1 LNXC表觀溶解度的測定

分別量取水、pH 6.8和 pH 7.4的 PBS各200 mL置250 mL磨口錐形瓶中，加過量LNXC，加塞密封，置于磁力攪拌器上，水浴溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速300 r/min，分別于 2，6，8，12，24，48 h 取樣過濾，精密吸取續(xù)濾液，分別用相應(yīng)的介質(zhì)定量稀釋數(shù)倍后，在376 nm波長處測定A值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程［3］計(jì)算表觀溶解度。

2.2 LNXC油水分配系數(shù)的測定

量取正辛醇50 mL及pH 7.4的PBS 100 mL，于帶塞錐形瓶中，置于37℃恒溫振蕩器中震蕩24 h，于分液漏斗中靜置過夜，分層，分離已飽和的水相和油相。精密稱取LNXC適量，加至水相(已用油相飽和)中，配成一定濃度的藥物溶液。分別精密量取上述藥物的pH 7.4的 PBS 4 mL與正辛醇(已用水相飽和)4 mL于10 mL離心管中，置37℃恒溫振蕩器中振蕩24 h，取出，離心，取下層水相，于376 nm波長處測定A值，計(jì)算pH 7.4 PBS中的藥物質(zhì)量濃度，推算出正辛醇中的藥物質(zhì)量濃度，計(jì)算油水分配系數(shù)。

2.3 LNXC凝膠劑的制備

將處方量的卡波姆灑于甘油表面，使其充分浸潤，然后加入適量水，使其充分溶脹，加入適量三乙醇胺調(diào)pH至7.2，混勻得空白凝膠。精密稱取處方量的LNXC于研缽研磨均勻后，將其加入空白凝膠研磨均勻，再加入滲透促進(jìn)劑氮酮與丙二醇與羥苯乙酯，繼續(xù)研磨，補(bǔ)加水至處方量，混勻即得LNXC凝膠劑。

2.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化處方組成

［4-5］，結(jié)合預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，在單因素考察基礎(chǔ)上，以6 h體外累積經(jīng)皮滲透量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇卡波姆用量、氮酮濃度、丙二醇濃度3個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，按L9(3)4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化最佳處方組成。

2.5 LNXC凝膠劑體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn)

2.5.1 離體小鼠皮膚的制備 取昆明種小白鼠處死，將腹部毛去除干凈，剝離腹部皮膚，去除皮下和脂肪組織，用pH 7.4 PBS浸泡沖洗干凈后，冰箱冷藏，備用。實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)檢查鼠皮的完整性，不得有任何損傷。

2.5.2 體外經(jīng)皮滲透實(shí)驗(yàn) 將皮膚置于擴(kuò)散池口，角質(zhì)層面向上，真皮層向下，接受池中加滿pH 7.4 PBS(6.5 mL)，樣品室加入凝膠劑(相當(dāng)于含LNXC 1 mg)，與皮膚緊密接觸，不留空腔，于(37±1)℃，400 r/min恒溫恒速攪拌，在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)將吸收液全部取出(同時(shí)補(bǔ)充等量pH 7.4 PBS)。于376 nm波長處測定A值［3］，計(jì)算累積滲透量。

2.6刺激性試驗(yàn)

取2.5～3.0 kg的健康家兔6只，在每只家兔脊柱兩側(cè)對(duì)稱處剃毛，面積約為3 cm×3 cm。24 h后將空白凝膠和含藥凝膠劑各1 g，分別均勻涂在家兔背部剃毛處，24 h后觀察各涂藥部位有無水皰、疹塊、紅腫等現(xiàn)象。

3 結(jié)果

3.1 表觀溶解度和油水分配系數(shù)測定結(jié)果

pH對(duì)LNXC的表觀溶解度的影響結(jié)果見圖1。在 pH 7.4 PBS，pH 6.8 PBS和水中的溶解度分別為(324.0 ±32.5)，(86.1 ±8.3)，(8.65 ±0.56) μg/mL。根據(jù)此表觀溶解度，我們選取pH 7.4 PBS作為體外釋放與滲透試驗(yàn)的溶媒，保證漏槽條件。藥物的油/水分配系數(shù)是影響藥物經(jīng)皮吸收的主要因素之一。一般認(rèn)為log P接近1～4間有較好的滲透系數(shù)。測得LNXC的油水分配系數(shù)為(1.52±0.49)，滲透系數(shù)較好，適合于透皮吸收，具有制備成良好透皮制劑的潛質(zhì)。

圖1 LNXC 在 pH 7.4 PBS(-▲-)、pH 6.8 PBS(-◆-)和水(-■-)中的表觀溶解度(n=3)Fig.1 The plot of apparent solubility pH 7.4 PBS(-▲-)，pH 6.8 PBS(-◆-)and water(-■-)(n=3)

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)L9(3)4正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以6 h累積滲透百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選最佳處方組成，正交試驗(yàn)的結(jié)果見表1。

表1 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)的方案和結(jié)果Tab.1 Scheme and results of orthogonal design

極差R反映各因素對(duì)指標(biāo)影響的程度，極差R值越大，影響程度越大。本實(shí)驗(yàn)三個(gè)因素R值排列為A＞C＞B;由綜合平均值的大小選取各因素的最佳水平組合:綜合平均值越大，水平越優(yōu)，各因素的最優(yōu)水平組合在一起就是最佳實(shí)驗(yàn)組合。本實(shí)驗(yàn)三個(gè)因素分析結(jié)果為:A:3＞2＞1;B:2＞3＞1;C:1＞2＞3，0.5%卡波姆濃度太低做成制劑黏度太小，不宜粘附于皮膚上，故選擇0.75%卡波姆。但是B因素中的2和3水平相差不大(P＞0.05)，與單因素考察中的結(jié)果一致，所以我們同時(shí)制備了兩個(gè)處方:即A3B3C2和A3B2C2，并同時(shí)考察這兩個(gè)處方的體外滲透性，實(shí)驗(yàn)證明丙二醇濃度30%較20%的釋放要好，所以我們選取的最佳組合為A3B3C2，即處方組成:氮酮4%，丙二醇30%，卡波姆0.75%。

3.3 LNXC凝膠劑的體外滲透試驗(yàn)結(jié)果

按優(yōu)化處方制備3批樣品，測定LNXC凝膠劑24 h的累積經(jīng)皮滲透量，以累積釋放百分率(Q)對(duì)時(shí)間(t)作圖，得LNXC的體外經(jīng)皮滲透曲線(見圖2)，對(duì)釋放曲線進(jìn)行數(shù)學(xué)模型擬合，結(jié)果見表2。

圖2 LNXC凝膠體外滲透曲線(以小鼠皮為屏障)(n=3)Fig.2 Release kinetic profile of LNXCgel with optimum formulation across mouse skin(n=3)

表2 數(shù)學(xué)模型擬合結(jié)果Tab.2 Results of mathematical model fitting

由LNXK凝膠體外經(jīng)皮滲透(以小鼠皮為屏障)試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可知，0～6 h內(nèi)符合零級(jí)動(dòng)力學(xué)(r=0.999 0)，6 h以后經(jīng)皮滲透釋放趨緩，滲透到60 h，滲透曲線符合 Weibull方程(r=0.994 8)，與一般脂溶性藥物的體外釋放規(guī)律基本一致。LNXK的油水分配系數(shù)1.52，水溶性不好，但在pH 7.4的PBS中溶解度較大，說明有在皮膚有較好的吸收，且能滿足凝膠劑制備的要求。

刺激性試驗(yàn)結(jié)果表明，家兔涂藥部位均無水皰、疹塊、紅腫等現(xiàn)象出現(xiàn)，與空白基質(zhì)比較無差異。

4 討論

LNXK在376 nm波長處有最大吸收峰，凝膠劑基質(zhì)在該波長處幾乎無吸收，因此，本文處方和工藝研究過程中選擇紫外分光光度法測定凝膠劑中LNXK 的含量［3］，該法簡便、快速，但靈敏度、專屬性較HPLC法差，在制定凝膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)還應(yīng)該選擇靈敏度較高的方法。

卡波姆有很強(qiáng)的吸濕性，在水中溶脹，但成團(tuán)塊者難以溶脹，未溶脹的經(jīng)堿中和后會(huì)形成白色半透明狀物，影響成品質(zhì)量。處方中加入甘油既可促進(jìn)卡波姆浸潤溶脹，又能起到保濕的作用。此外先用甘油浸潤研磨卡波姆可防止表面凝膠化，再加適量水讓卡波姆溶脹，可使成品細(xì)膩［6］。在制備凝膠的過程中，盡量避免氣泡的產(chǎn)生，隨著卡波姆濃度的增加，較易產(chǎn)生氣泡，且不易消除，卡波姆濃度低的凝膠劑不易產(chǎn)生氣泡，經(jīng)攪拌后也易消除，但黏度過小，流動(dòng)性變大，黏性降低，不宜涂抹在皮膚上。綜合考慮各類因素選取了0.75%濃度的卡波姆用量，氣泡較易消除，黏度適中，方便使用。

初步穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，本品耐熱、耐寒，3個(gè)月加速試驗(yàn)，外觀、含量等均無明顯變化，初步臨床試驗(yàn)也取得較好的療效［3］。

參考文獻(xiàn):

［1］黃 莉，李 娟，王 業(yè)，等.替諾昔康凝膠劑的制備及其經(jīng)皮吸收研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2005，40(23):1807-1810.

［2］Tang H B，Atsuko I，Kyokoo，et al.Zaltoprofen inhibits Bradykinininduced responses by blocking the activation of second messenger signaling cascades in rat dorsal root ganglion cells［J］.Neuropharm，2005，48:1035-1042.

［3］馬君一，劉煥美，顧一珠.氯諾昔康凝膠劑的制備與臨床應(yīng)用［J］.齊魯藥事，2011，30(3):152-154.

［4］陸 彬.藥劑學(xué)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2003:280.

［5］郭 宏，聶淑芳，楊星鋼，等.奧沙普秦凝膠劑處方篩選及穩(wěn)定性研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，41(10):759-762.

［6］張又才，劉大發(fā)，曾慶岳.凝膠基質(zhì)中卡波姆溶脹方法的改進(jìn)［J］.中國藥師，2003，6(1):58.

Development of Lornoxicam gel

MA Jun-yi1，LIU Huan-mei2，GU Yi-zhu3
(1.Marine School，Shandong University at Weihai，Weihai 264209，China;2.Pharmaceutical School，Shandong University，Jinan 250012，China;3.Department of Pharmacy，Qilu Hospital，Shandong University，Jinan 250012，China)

Purpose To prepare Lornoxicam gel and to study its release and permeation ability in vitro.Methods The apparent solubility and oil-water partition coefficient of drugs were determined by UV method.The permeation in vitro was carried out by a two-compartment diffusion cells with mouse skin and cellophane as barriers.By taking its 6-hour accumulative penetration amount as index the factors such as the concentration of carbomer，azone，propylene glycol were investigated by an orthogonal design，and thus the best formula could be obtained.The local irritative response of Lornoxicam gel were also measured.Results The apparent solubility of Lornoxicam was 8.65 μg/mL in distilled water and 86.0，324.0 μg/mL in phosphate buffered solution with pH values of 6.8，7.4 and its oil-water partition coefficient was 1.52.The optimal formulation of Lornoxicam gel contained 0.75%carbomer，30%propylene glycol and 4%azone.The gel had suitable viscosity and pH was 6.8-7.0.The process of percutaneous permeation of Lornoxicam gel in vitro conformed to zero order equation.No irritation reactions like blister，rash，redness and swelling occurred in the skin after applying Lornoxicam gel.Conclusion Lornoxicam transcutaneous gel can be prepared simply.Its quality is controllable.

Lornoxicam;gel;transcutaneous;dissolubility;oil-water partition coefficient

R944

A

1005-1678(2011)04-0297-04

2010-12-31

山東省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(2007GG30002023)

馬君一，男，本科生，E-mail:jazzy941@163.com;顧一珠，女，通信作者，碩士，副主任藥師，主要從事醫(yī)院制劑技術(shù)研究，E-mail:yizhu.521@163.com。