李 杰，周 慧，鄭一敏，曾品濤，王琳琳，胥秀英，傅善權(quán)

(重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶 400050)

羥丙基－β－環(huán)糊精－芒果苷包合物在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

李 杰，周 慧，鄭一敏，曾品濤，王琳琳，胥秀英，傅善權(quán)

(重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶 400050)

目的建立測(cè)定小鼠血漿中羥丙基－β－環(huán)糊精－芒果苷包合物質(zhì)量濃度的高效液相色譜(HPLC)法，并用于藥代動(dòng)力學(xué)研究。方法小鼠一次性灌胃給予3.0 g/kg羥丙基－β－環(huán)糊精－芒果苷包合物后，用HPLC法檢測(cè)不同時(shí)間間隔的血藥濃度，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果小鼠一次性灌胃給予羥丙基－β－環(huán)糊精－芒果苷包合物后，分布相半衰期(t1/2α)為(8.226±0.972)h，消除相半衰期(t1/2β)為(8.674±1.112)h，藥時(shí)曲線下面積(AUC)為 (3.058±0.836)μg·h/kg。結(jié)論HPLC法簡(jiǎn)便、可靠，可用于芒果苷包合物藥代動(dòng)力學(xué)研究，小鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過程符合二房室開放模型。

芒果苷;包合物;高效液相色譜法;藥代動(dòng)力學(xué)

芒果苷(mangiferin)是一種四羥基吡酮的碳糖苷，屬雙苯吡酮類黃酮類化合物，存在于多種植物中?，F(xiàn)代藥理研究表明，芒果苷具有廣泛的藥理作用，如抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、抗變態(tài)反應(yīng)、增強(qiáng)免疫功能、對(duì)血脂質(zhì)的抑制效應(yīng)、降血糖和保肝利膽作用等[1－3]。但芒果苷溶解度較差，難溶于水，也不溶于有機(jī)溶劑，嚴(yán)重限制了其制劑的開發(fā)[4]。關(guān)于芒果苷的包合及藥代動(dòng)力學(xué)研究迄今尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)中，將芒果苷與羥丙基－β－環(huán)糊精(HP－β－CD)制成HP－β－CD－芒果苷包合物，以增加藥物的溶解度，并建立了測(cè)定小鼠血漿中芒果苷質(zhì)量濃度的高效液相色譜(HPLC)法，研究了芒果苷在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程，為進(jìn)一步研究其藥理作用及其制劑開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥及動(dòng)物

Waters高效液相色譜儀(Waters 1525二元泵，Waters 2487紫外檢測(cè)器);Breeze液相色譜工作站(Waters公司);85－1型恒溫磁力攪拌器(江蘇中大儀器廠);CR22F型高速離心機(jī)(日本日立公司);KQ－50型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器廠);202－I型恒溫烘箱(上海浦東榮豐科學(xué)儀表有限公司)。芒果苷(實(shí)驗(yàn)室自制，純度為98%，批號(hào)為070608);HP－β－CD(上海昆山化工廠，批號(hào)為080301)。昆明種小鼠，體重18～22 g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 HP－β－CD－芒果苷包合物制備

預(yù)試驗(yàn)比較了攪拌法、超聲法和研磨法的包合效果，提示攪拌法包合效果較好。由攪拌包合的預(yù)試驗(yàn)得知，影響HP－β－CD－芒果苷包合效果的主要因素為芒果苷與HP－β－CD的比例(因素A)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(因素B)、攪拌時(shí)間(因素C)。采用L9(34)正交試驗(yàn) 法 ，以 HP－β－CD－芒果苷包合物的載藥量為指標(biāo)，以優(yōu)選出確定最佳包合條件。因素水平見表1。

正交試驗(yàn)結(jié)果表明，芒果苷與HP－β－CD按1∶0.5摩爾比投料、以體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇作溶劑、攪拌時(shí)間1.5 h時(shí)制備包合物最適宜。按此最佳包含條件進(jìn)行HP－β－CD－芒果苷包合物的制備，所得包合物溶解度約增加300倍，收率和載藥量分別為94.53%和12.58%。包合物收率=包合物收得量/(芒果苷投入量+HP－β－CD投入量)×100%，包合物載藥量=包合物中芒果苷量/包合物收得量×100%。

表1 因素水平表

2.2 血漿樣品制備

動(dòng)物于試驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水。將正常小鼠隨機(jī)分為14個(gè)試驗(yàn)組，每組對(duì)應(yīng)一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)用5只小鼠，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。給藥劑量以芒果苷計(jì)為3.0 g/kg，分別于灌胃給藥后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，20.0，24.0，30.0 h時(shí)從股動(dòng)脈取血，血液置肝素鈉離心管中，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，分離出血漿。精密吸取血漿樣品0.2 mL，置離心管中，加入甲醇2.0 mL，旋渦混合3 min后，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，在40℃以下用氮?dú)饬鞔蹈桑瑲堅(jiān)尤?.2 mL甲醇溶解，0.45 μm 濾膜濾過，備用。

2.3 血藥濃度測(cè)定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Hypersil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇和0.04%磷酸溶液，比例在0～15 min內(nèi)由22∶78變化至32∶68;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。在該色譜條件下，分別測(cè)定芒果苷對(duì)照品、空白血漿樣品以及給藥后制備的血漿樣品，色譜圖見圖1。可見，色譜峰分離良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取芒果苷對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成質(zhì)量濃度為0.10 g/L的溶液，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別精密量取對(duì)照品溶液適量，加小鼠空白血漿，稀釋制成質(zhì)量濃度分別為 0.01，0.10，0.40，0.80，1.60，3.20 μg/mL的溶液，后續(xù)處理同2.2項(xiàng)下血漿樣品制備方法操作，以甲醇定容至最終質(zhì)量濃度分別為 0.01，0.10，0.40，0.80，1.60，3.20 μg/mL 溶液，進(jìn)樣 10 μL，以色譜峰峰面積 (Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為Y=75 740X+7 274，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，芒果苷質(zhì)量濃度在 0.01 ～3.20 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果芒果苷峰面積的RSD為1.36%(n=6)，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下方法處理的血漿樣品10 μL，分別于0，2，4，8，16 h 時(shí)進(jìn)樣，依法測(cè)定。結(jié)果芒果苷峰面積的RSD為1.98%(n=5)，表明血漿樣品在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

回收率試驗(yàn):分別取3份不同量的HP－β－CD－芒果苷包合物，各加入0.2 mL空白血漿，混勻，制成高、中、低3種不同質(zhì)量濃度的血漿樣品(以芒果苷計(jì))。后續(xù)處理按2.2項(xiàng)下血漿樣品制備方法操作，測(cè)定回收率。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5，±s)

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5，±s)

加入質(zhì)量濃度(μg/mL)0.10 0.50 1.00測(cè)定質(zhì)量濃度(μg/mL)0.096 ± 0.004 0.471 ± 0.022 0.978 ± 0.037回收率(%)96.0 ± 4.0 94.2 ± 4.4 97.8 ± 3.7 RSD(%)2.21 2.78 1.66

2.4 藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

小鼠一次性灌胃給予HP－β－CD－芒果苷包合物后，平均血藥濃度－時(shí)間曲線見圖2。試驗(yàn)數(shù)據(jù)的測(cè)定值以均值和標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行曲線擬合。根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)房室模型的判斷方法，確定HP－β－CD－芒果苷包合物在小鼠體內(nèi)的過程符合二房室模型，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表3。

圖2 平均血藥濃度－時(shí)間曲線(n=5，±s)

表3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(n=5，±s)

表3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(n=5，±s)

參數(shù)分布相藥物量(A，μg/mL)分布相速率常數(shù)(α，h－1)消除相藥物量(B，μg/mL)消除相速率常數(shù)(β，h－1)延滯時(shí)間(Lag time，h)分布相半衰期(t1/2α，h)消除相半衰期(t1/2β，h)轉(zhuǎn)運(yùn)速率常數(shù)(K21，h－1)消除速率常數(shù)(K10，h－1)轉(zhuǎn)運(yùn)速率常數(shù)(K12，h－1)達(dá)峰時(shí)間(Tpeak，h)最大血藥濃度(Cmax，μg/kg)曲線下面積(AUC，μg/h·kg)消除率[CL，g/(kg·h)]分布容積(V，g/kg)數(shù)值0.224 ± 0.012 0.084 ± 0.009 0.290 ± 0.039 0.080 ± 0.015 0.429 ± 0.020 8.226 ± 0.972 8.674 ± 1.112 0.082 ± 0.011 0.082 ± 0.014 0.0002 ± 0.0001 8.591 ± 1.232 0.124 ± 0.017 3.058 ± 0.836 0.981 ± 0.104 12.009 ± 1.124

3 討論

本試驗(yàn)中，對(duì)芒果苷與HP－β－CD的包合條件進(jìn)行了探索，并用正交試驗(yàn)優(yōu)化最佳包合工藝;首次建立了測(cè)定小鼠體內(nèi)HP－β－CD－芒果苷質(zhì)量濃度的HPLC法，該法靈敏度高、準(zhǔn)確度好、特異性強(qiáng)，且芒果苷與內(nèi)源性雜質(zhì)峰分離良好且峰形良好，符合生物樣本測(cè)定的要求。

筆者首次研究了小鼠單劑量灌服HP－β－CD－芒果苷的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，從藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)可見，芒果苷在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程符合二房室開放模型，且分布較慢、消除較快。為了更好地評(píng)價(jià)芒果苷的藥用價(jià)值，對(duì)了芒果苷的其他藥效學(xué)性質(zhì)，以及在其他動(dòng)物體內(nèi)的組織分布、排泄與代謝產(chǎn)物、作用特點(diǎn)尚待進(jìn)一步的研究。

[1]鄧家剛，曾春暉.芒果葉及芒果苷30年研究概況[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，6(2):44－49.

[2]李好文，鄧家剛，鄧 靜.芒果苷國(guó)外研究進(jìn)展[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，6(4):62－66.

[3]廖洪利，吳秋業(yè)，葉光明，等.芒果苷藥理研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué)，2005，17(2):50 －52.

[4]王志萍，鄧家剛，王 勤，等.羥丙基－β－糊精包合法提高芒果苷溶解度的研究[J].中成藥，2008，30(8):1 123－1 156.

Study on Pharmacokinetics of HP－β－CD－Mangiferin in Mice

Li Jie，Zhou Hui，Zheng Yimin，Zeng Pintao，Wang Linlin，Xu Xiuying，F(xiàn)u Shanquan
(College of Pharmacy and Bioengineering，Chongqing University of Technology，Chongqing，China400050)

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of hydroxypropyl(HP)－β－cyclodextrin(CD)－mangiferin in mice and to investigate its pharmacokinetics.Methods After administration of 3.0 g/kg inclusion compound of HP －β －CD －mangiferin by gavage for once in mice，the serum concentrations at differential time intervals were determined by RP －HPLC.The compartment model was calculated with 3P97 software.Resultst1/2αwas(8.226 ± 0.972)h，t1/2βwas(8.674 ± 1.112)h andAUCwas(3.058 ± 0.836) μg·h/kg in mice after once gavage administration of HP－β －CD－mangiferin inclusion compound.Conclusion The HPLC method is simple and reliable，which can be applied to the pharmacokinetic study.The kinetics process of HP－β－CD－mangiferin is fitted to two－compartment model in mice.

mangiferin;inclusion compound;HPLC;pharmacokinetics

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)02－0024－02

2010－01－22)