孫 昕 鮑揚漪 鮑 鍵

安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，安徽合肥 230022

乳腺癌發(fā)病率高居女性惡性腫瘤的首位，在我國，乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，其特點是發(fā)病年齡較年輕，早期多無癥狀，就診時病期相對偏晚，而復發(fā)、轉(zhuǎn)移又常常是乳腺癌治療失敗的最主要原因。因此早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療是防治乳腺癌最有效的手段，也是提高乳腺癌患者生存率的關(guān)鍵[1]。近年來臨床研究發(fā)現(xiàn)，相關(guān)的血清腫瘤標志物（CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG）及細胞因子（TNF-α和IL-6）含量及其改變對乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、診斷治療及預后判斷具有重要的臨床意義。

筆者通過多腫瘤標志物蛋白芯片法和ELISA酶聯(lián)免疫檢測方法對145例不同期別的乳腺癌患者及60例乳腺良性腫瘤患者血清中的腫瘤標志物CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG和細胞因子TNF-α和IL-6活性水平的含量進行檢測，并與50例正常人群進行對照，探討它們在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用以及腫瘤標志物和細胞因子對乳腺癌的診斷、治療及預后判斷的臨床意義，現(xiàn)將實驗結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有病歷均來源于安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科2008年1月～2009年12月收治的乳腺癌患者，每例均經(jīng)手術(shù)證實，病理資料完整。年齡26～70歲，平均47.52歲。所選病例Ⅰ期患者20例；Ⅱ、Ⅲ期患者各40例；Ⅳ期45例，而Ⅳ期患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例；肝、肺轉(zhuǎn)移各5例；骨轉(zhuǎn)移10例；腦轉(zhuǎn)移5例；多臟器轉(zhuǎn)移10例。而良性乳腺腫瘤患者60例（其中：乳腺纖維腺瘤25例；漿細胞性乳腺炎15例；乳腺腺病10例；乳腺潴留曩腫5例；乳腺囊性增生病5例），年齡22～68歲，平均51.25歲。所有受試對象排除妊娠、感染、肝腎功能不全、代謝性疾病和心腦血管疾病等并發(fā)癥。另外選取筆者所在醫(yī)院健康體檢中心健康體檢者50例，年齡20～70歲，平均42.17歲。

1.2 樣品的制備

取受試對象清晨空腹靜脈血2.0 mL，靜置后分離出清亮血清，置潔凈試管中，置-70℃低溫保存待測。良性腫瘤及惡性腫瘤患者均于手術(shù)前取樣，而需進行治療的患者均于化療結(jié)束后，下一次治療前取樣，進行隨訪或動態(tài)檢查。健康對照組于體檢時取樣，同理分離血清待測，所有樣品嚴禁溶血。

1.3 檢測方法

采用湖州數(shù)康生物科技有限公司提供的多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)和C12多腫瘤標志物蛋白芯片診斷試劑盒測定受試對象血清中的CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG的含量；應(yīng)用ELISA酶聯(lián)免疫檢測法測定細胞因子TNF-α和IL-6活性水平。試劑盒由美國Gengyre提供、晶美生物工程有限公司代理。檢測方法嚴格按照試劑盒附件說明書，按步驟進行實驗。

1.4 統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析；計量資料用均數(shù)±標準差（）的形式表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者血清中的CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α和IL-6含量比較

不同分期的乳腺癌各組的CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α、IL-6水平顯著高于良性乳腺病組和正常對照組（P＜0.01），而乳腺疾病組與正常對照組相比較各指標（除CA15-3、β-hCG）差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但乳腺疾病組的CA15-3、β-hCG這兩個指標與正常對照組相比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。另外不同臨床分期的乳腺癌患者之間各指標均存在著較為明顯的差異，Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者血清中的 CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α、IL-6顯著地高于Ⅰ+Ⅱ期乳腺癌組（P＜0.01），而且Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者兩組之間有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 乳腺癌患者血清中各標志物水平與療效的關(guān)系

選擇Ⅲ期和Ⅳ期乳腺癌患者（共85例），觀察其治療后及復發(fā)進展期時腫瘤標志物和細胞因子不同情況，并與治療前進行比較。在治療有效組（CR+PR+SD）中，腫瘤標志物及細胞因子水平有不同程度的下降，但仍然顯著高于良性乳腺疾病組和正常對照組，其中CA19-9在治療前后有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而其余各項標志物及細胞因子治療前后改變均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在疾病進展復發(fā)期各組中，各指標均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表2。

2.3 各指標在乳腺癌診斷中的意義

根據(jù)檢測結(jié)果，以血清標志物超過正常上限值為陽性（CEA ＜ 5.0μg/L； CA15-3＜ 35 U/mL；CA19-9＜ 35 U/mL；β-HCG＜3.0μg/L）得到CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG在乳腺癌診斷中的靈敏度分別為：30.31%、50.75%、28.68%、30.16%。而以TNF-α、IL-6正常值的（）為診斷腫瘤截斷點[3]，則TNF-α的靈敏度為71.32%， IL-6的靈敏度為49.06%。單個標志進行診斷時，CA15-3對Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌具有較高的靈敏度，而CEA則對乳腺癌具有最高的特異性。細胞因子則是IL-6具有較高的靈敏度，TNF-α具有較高的特異性。另外，選擇四項腫瘤標志物和細胞因子進行聯(lián)合檢測，按文獻[2]計算對Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌診斷靈敏度分別可提高至88.17%，同時保持94.13%較高的特異性。見表3。

表1 各組患者血清中的CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α和IL-6含量比較（±s）

表1 各組患者血清中的CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α和IL-6含量比較（±s）

組別 例數(shù) CEA CA15-3 CA19-9 β-hCG TNF-α IL-6（μg/L） （U/mL） （U/mL） （μg/L） （pg/mL） （pg/mL）正常對照組 50 1.31±1.18 9.17±6.51 7.10±4.32 1.07±1.01 18.25±8.71 22.61±9.74良性乳腺病組 60 2.38±1.27 19.53±10.56 9.68±2.16 3.26±1.34 25.17±11.80 25.02±1.07Ⅰ+Ⅱ期乳癌組 60 5.26±2.98 30.61±16.27 28.11±10.02 5.47±2.88 66.56±34.16 40.25±24.24Ⅲ期乳癌組 40 10.01±6.12 58.66±20.11 55.63±12.30 5.97±2.23 88.53±49.11 53.33±23.16Ⅳ期乳癌組 45 17.18±11.11 91.03±37.61 86.49±37.11 6.11±1.98 56.15±43.71 66.43±37.11

表2 乳腺癌患者血清中各標志物水平與療效的關(guān)系（±s）

表2 乳腺癌患者血清中各標志物水平與療效的關(guān)系（±s）

標志物 治療前組① 治療緩解（有效）組② 復發(fā)（進展）組③ P CEA（μg/L） 14.95±9.48 12.97±7.11 19.44±9.60 ①②＞0.05；①③＜0.01 CA15-3（U/mL） 72.32±27.41 64.36±20.55 109.21±22.71 ①②＞0.05；①③＜0.01 CA19-9（U/mL） 63.95±20.99 49.88±15.11 80.33±18.11 ②①＜0.05；①③＜0.05 β-hCG（μg/L） 6.04±2.00 5.73±1.32 10.12±4.44 ①②＞0.05；①③＜0.01 TNF-α（pg/mL） 116.22±41.79 97.63±44.91 180.22±48.77 ①②＞0.05；①③＜0.01 IL-6（pg/mL） 59.38±25.61 55.99±18.18 76.33±20.89 ①②＞0.05；①③＜0.05

表3 各標志物和細胞因子在不同分期乳腺癌中的靈敏度及特異性（%）

3 討論

腫瘤標志物分類的方法很多，一般按其產(chǎn)生的方式分為兩大類，即由腫瘤組織產(chǎn)生及腫瘤與宿主相互作用而產(chǎn)生。前者包括胚胎抗原、酶及同工酶、激素、組織特異抗原、癌基因及其產(chǎn)物、糖蛋白、多胺及唾液酸等。另一類是腫瘤與宿主之間作用而產(chǎn)生的，它包括血清鐵蛋白、免疫復合物、急性期蛋白、多種細胞因子（如白細胞介素-2和腫瘤壞死因子）等。由于各種免疫標記技術(shù)的快速發(fā)展，所檢測的腫瘤指標越來越多，對腫瘤的早期診斷、治療評價、療效觀察及判斷預后具有臨床意義，但至今仍沒有一種標志物能對腫瘤完全特異。其原因是一些良性病變也能出現(xiàn)程度不同的陽性反應(yīng)，即便是腫瘤本身也由于在發(fā)生發(fā)展過程中的種種因素而呈階段性陰性反應(yīng)。因此，近年來國內(nèi)外學者一致認為動態(tài)觀察和多種標志物聯(lián)合檢測，特別是緊密結(jié)合臨床特點再綜合判斷，是提高腫瘤診斷陽性率最富有成效的方法與措施。

1984年，Kufu等自肝轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞膜中制成可識別CA15-3的單克隆抗體，它是大分子量的糖蛋白。CA15-3是臨床應(yīng)用最普遍的一種乳腺癌相關(guān)抗原。CA15-3抗原是固定于膜上的黏液性糖蛋白，存在于乳腺、肺、卵巢和胰腺的惡性腫瘤細胞和正常的上皮細胞上，是較好的乳腺癌血清標志物之一[4]，可為臨床的診斷及治療提供一種輔助方法。但許多研究表明[5-7]，乳腺癌血清標志物單獨用于早期診斷時，因敏感性及特異性較低，而限制了這些標志物的臨床使用。如何提高乳腺癌的早期診斷率，是目前國內(nèi)外學者共同關(guān)注的問題。CA15-3單獨應(yīng)用具有一定的局限性，特別是對乳腺癌早期診斷靈敏度更低，導致早期乳腺癌的漏診和漏治，不能滿足臨床早期發(fā)現(xiàn)、早期治療的要求。

CEA是目前在臨床使用中最常見的腫瘤標志物之一，其是一種酸性糖蛋白，早期認為分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器，像胃腸道、呼吸道、泌尿道等。在腫瘤狀態(tài)時CEA進入血液和淋巴循環(huán)，引起上述各種腫瘤患者血清中CEA異常性增高。但后來發(fā)現(xiàn)CEA在肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌也有較高表達。羅光輝等[8]研究表明乳腺癌患者中CEA含量與腫瘤的負荷和進展正相關(guān)。

CA19-9是一種由消化道腫瘤細胞株分泌的低聚糖類抗原，在消化道腫瘤患者血清中濃度明顯增高，這些惡性疾病包括：胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌和肝癌。而正常人血清中水平很低。臨床認為血清CA19-9濃度的升高通常與各種胃腸道惡性疾病有關(guān)，但其單獨用于乳腺癌時靈敏度和特異性都不太理想，本研究結(jié)果只達28.68%，而大多都是作為聯(lián)合應(yīng)用的指標，筆者的工作結(jié)論與文獻較為一致[9]。本結(jié)果說明乳腺癌愈晚期，病情進展快，且發(fā)生多臟器轉(zhuǎn)移致使其CA19-9血清水平升高[10]，這與CA19-9可以作為預測預后轉(zhuǎn)移的有效指標的文獻報道一致[11]，提示其動態(tài)變化對于鑒測病情進展及預測治療效果或復發(fā)、轉(zhuǎn)移也有一定參考價值。

β-hCG是糖蛋白激素家族成員之一，其基因表達與惡性腫瘤相關(guān)，是許多腫瘤分泌的一種物質(zhì)[12]。β-hCG也是一個較好的標志物，對婦科腫瘤具有較高的特異性診斷價值，如宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、和卵巢癌，β-hCG還會在乳腺癌、睪丸癌、卵巢癌中高表達。本實驗發(fā)現(xiàn)β-hCG水平與腫瘤分期無顯著相關(guān)性，而乳腺癌患者在復發(fā)或病情進展時，其值顯著性升高，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。提示β-hCG與乳腺癌的疾病進展復發(fā)相關(guān)，而與臨床分期無明顯相關(guān)性。

T、B淋巴細胞，內(nèi)皮、單核細胞，腫瘤或纖維細胞均能產(chǎn)生IL-6，表達也可發(fā)生于兩種情況，一種在自然狀態(tài)下組織性表達，一種可在受到刺激時誘導產(chǎn)生。袁宇寧等[13]報道了血清中IL-6水平增高與骨腫瘤的發(fā)生、發(fā)展正相關(guān)。而Burger等[14]也報道了腫瘤細胞及與腫瘤相關(guān)的巨噬細胞可釋放較高含量的IL-6。筆者的實驗結(jié)果表明，腫瘤細胞在增殖、浸潤或轉(zhuǎn)移過程中，可能會產(chǎn)生較高水平的IL-6水平。其中血清中IL-6水平上升與腫瘤負荷大小、病情進展呈正相關(guān)。因此，筆者認為：IL-6水平上升可能預示著乳腺癌患者病情進一步惡化，或腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，提示應(yīng)采取適當?shù)闹委熓侄?。上述實驗結(jié)果可能對臨床會有一定的輔助實用參考價值。

TNF是當前發(fā)現(xiàn)抗腫瘤作用最強的細胞因子之一，是一種由單核巨噬細胞引起的多活性、可溶性蛋白質(zhì)細胞因子。體內(nèi)外實驗均有極顯著的抗腫瘤作用。它在體內(nèi)可與多種細胞因子相互作用，共同對腫瘤細胞的生長、分化發(fā)揮著重要作用。高水平TNF-α的腫瘤患者往往具有較高的轉(zhuǎn)移和復發(fā)率。因此，TNF-α可作為腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的重要標記物及鑒定腫瘤預后的一項指標[4]。筆者的實驗結(jié)果與文獻[15]較為一致。因此，筆者認為測定乳腺癌患者血清中TNF-α活性，可為臨床提供觀察患者病情進展、判斷其惡化或腫瘤轉(zhuǎn)移的一種輔助手段，具有一定的臨床意義。

在筆者的實驗中，通過對正常人群、良性乳腺病患者及不同分期乳腺癌患者血清腫瘤標志物CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG和細胞因子TNF-α、IL-6含量的測定，實驗結(jié)果表明：腫瘤標志物及細胞因子在正常人群、良性乳腺病患者及不同分期乳腺癌患者之間均存在著明顯的差異。比較突出的是隨著乳腺癌分期的加大、腫瘤疾病的進展，治療后的復發(fā)或者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時各種指標均呈現(xiàn)增加。血清各指標濃度均存在統(tǒng)計學意義（P＜ 0.01）。因此提示 CEA、CA15-3、CA19-9、β-hCG、TNF-α、IL-6是乳腺癌重要的腫瘤標志物，可做為觀察患者病情進展、判斷療效及其惡化或腫瘤轉(zhuǎn)移的一種輔助手段，具有一定的臨床意義。另外，經(jīng)對各指標靈敏度和特異性分析后發(fā)現(xiàn)，單一標志物應(yīng)用于臨床，因其靈敏度和特異性而具有一定的局限性（28.68%～61.32%），往往會增加臨床的漏診率。因此，在實際工作中進行多指標聯(lián)合檢測，可以彌補單項指標診斷的漏診，完善單項指標不足，可以提高乳腺癌診斷的靈敏度和特異性。有良好的輔助診斷價值。筆者在實驗中選擇四項腫瘤標志物和細胞因子進行聯(lián)合檢測，對Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌診斷靈敏度分別可提高至88.17%，同時保持94.13%較高的特異性。

綜上所述，乳腺癌已成為一種常見的嚴重威脅婦女健康的惡性腫瘤，乳腺癌腫瘤標志物檢測，有助于對乳腺癌高危人群進行普查、診斷、鑒別診斷及療效觀察，對乳腺癌分期及預測腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移具有重要的應(yīng)用價值[16]。

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