張愛武 鞠貴春 薛 軍 鄭 雪

甘露寡糖對肉鶉腸長度及腸道菌群的影響

張愛武 鞠貴春 薛 軍 鄭 雪

選取240只1日齡肉鶉隨機分成4組，每組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)15只肉鶉。其中第1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，第2～4組為試驗組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、2.0%的甘露寡糖（MOS）。進行為期50日齡的飼養(yǎng)，分別于35日齡和50日齡采樣。試驗結(jié)果表明，1.0%和2.0%MOS可顯著增加35日齡肉鶉小腸長度和十二指腸長度（P＜0.05）。1.0%和2.0%MOS組35日齡肉鶉空腸長度和回腸長度顯著長于對照組和0.5%MOS組（P＜0.05）。各處理組35 d肉鶉空回比均高于對照組，但未達到統(tǒng)計學(xué)差異水平（P＞0.05）。日糧中添加MOS對50日齡肉鶉腸長度的影響無明顯規(guī)律，各處理組之間無顯著差異（P＞0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低35日齡和50日齡肉鶉回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著提高35日齡和50日齡肉鶉回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高，且2.0%MOS添加組35日齡肉鶉回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量顯著高于0.5%MOS 添加組（P＜0.05）。

甘露寡糖；肉鶉；腸長度；腸道菌群

在畜禽日糧中通過添加抗生素改善動物的健康狀態(tài)和提高動物的生產(chǎn)性能已經(jīng)非常普遍，然而長期使用抗生素會造成細菌產(chǎn)生耐藥性，使畜禽免疫力下降，并在動物產(chǎn)品及環(huán)境中殘留（鄧敦，2003）。因此，世界上許多國家已經(jīng)禁止抗生素在日糧中的添加和使用，越來越多的國內(nèi)外學(xué)者進行深入研究，期望尋找一些無污染、無殘留、促生長、多功能的綠色飼料添加劑來代替抗生素的使用（杜冰，2006）。大量研究表明，甘露寡糖（MOS）作為一種新型飼料添加劑可提高家禽及幼齡動物日增重及飼料轉(zhuǎn)化率、降低死亡率、增強動物免疫力等，并能在較大程度上取代抗生素（孔濤，2006）。MOS是由幾個甘露寡糖分子或甘露寡糖與葡萄糖通過糖苷鍵連接組成，20世紀80年代中后期，隨著微生態(tài)學(xué)理論的發(fā)展，人們對腸道的功能日趨重視，同時發(fā)現(xiàn)MOS能選擇性刺激腸道有益菌的生長繁殖，而不被大部分有害菌利用。受此啟發(fā)，日本首先把這種糖類物質(zhì)開發(fā)成飼料添加劑產(chǎn)品，然而由于其價格昂貴而未受到重視。但是由于MOS具有無污染、無殘留、功能奇異而逐步成為人們所期望抗生素替代品的焦點（石寶明，2000）。MOS不像抗生素會產(chǎn)生藥物殘留，或使動物機體產(chǎn)生耐藥性或引發(fā)二重感染，而是通過競爭性的抑制動物體內(nèi)有害菌的增殖，促進有益菌的大量繁殖來達到促進動物個體生長的目的（盧建軍，1999；韓蘇，1997）。目前所使用的產(chǎn)品是通過發(fā)酵法從富含MOS的酵母細胞壁中提取的葡甘露聚糖蛋白復(fù)合物（Dvorak，1998），約含30%的葡萄糖和30%的甘露糖。本試驗通過在日糧中添加MOS來研究MOS對肉鶉腸長度和腸道菌群的影響，以便用來指導(dǎo)肉鶉生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

甘露寡糖購自上海正正科技有限公司。

麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、乳酸菌瓊脂培養(yǎng)基購自北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司。

1.2 試驗動物

健康1日齡肉鶉（雌雄各半）240只作為試驗動物。

1.3 試驗設(shè)計

本試驗采用單因子隨機化設(shè)計，將240只1日齡肉鶉隨機分成4組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)15只肉鶉，其中第一組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1。第2～4組為試驗組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1%、2%的甘露寡糖，進行為期50日齡的飼養(yǎng)試驗，分別于35日齡和50日齡采樣。

1.4 飼養(yǎng)管理

在飼養(yǎng)前把動物飼養(yǎng)室及其籠具、飲水器、料槽進行熏蒸消毒。自由采食、自由飲水，自然光和日光燈相結(jié)合，在肉鶉10日齡后逐漸減少日光燈光照時間，最后完全停止；保持室內(nèi)溫度在33℃以上，在1周齡后逐漸降低溫度，每3 d降低1℃，最后減至室溫，每日清掃糞便。

1.5 樣品采集及測定

于35日齡和50日齡時進行屠宰試驗，取肉鶉的空腸、回腸、十二指腸進行長度測量，并計算空回比。取肉鶉的回腸放在-20℃的冰柜中進行冷凍保存，用于微生物測定。

微生物測定參照李玲（2003）的測定方法。將水浴加熱溶解后的培養(yǎng)基分裝到干燥的厭氧管中，每支管裝4.5 ml，趁熱充氮至有氣泡冒出，迅速加塞、加蓋。準確移取9 ml生理鹽水至厭氧管中，充氮大約 30 s，迅速加塞、加蓋。0.1 MP 滅菌 15～20 min。將樣品流水解凍，準確、快速稱取1.0 g左右腸內(nèi)容物樣品置于錐形瓶（含9 ml生理鹽水，充氮氣），混勻。準確移取1 ml注入裝有生理鹽水的厭氧管中進行稀釋，制成10-2稀釋液。按此操作方法依次進行稀釋至10-9，制成不同濃度的樣品稀釋液。各取1 ml的稀釋液，注入平皿中。向大腸桿菌的培養(yǎng)皿中倒入15 ml麥康凱培養(yǎng)基（50℃左右），向乳酸桿菌的培養(yǎng)皿中倒入15 ml乳酸菌瓊脂培養(yǎng)基（50℃左右），搖勻，冷卻。大腸桿菌采用麥康凱培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24 h進行大腸桿菌菌落計數(shù)；乳酸桿菌采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)48 h進行乳酸桿菌菌落計數(shù)。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色和革蘭氏染色鏡檢結(jié)果進行鑒別，用每克腸道內(nèi)容物中細菌個數(shù)的對數(shù)（Log cfu/g）來表示。

厭氧菌活菌數(shù)量（cfu/g）=計數(shù)的實際平均值×稀釋倍數(shù)/取樣量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），并進行Duncan's法多重比較，取P＜0.05作為差異顯著性的臨界值，試驗結(jié)果以平均值±標準誤表示（Mean±SE）。

2 結(jié)果

2.1 甘露寡糖對35日齡肉鶉腸長度的影響（見表2）

由表2可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對35日齡肉鶉腸長度有一定影響，1.0%和2.0%MOS組小腸長度顯著長于對照組（P＜0.05），而0.5%組和對照組之間小腸長度沒有顯著差異（P＞0.05）。十二指腸長度的變化與小腸長度變化一致，1.0%和2.0%MOS組十二指腸長度顯著長于對照組（P＜0.05），而0.5%組和對照組之間十二指腸長度沒有顯著差異（P＞0.05）。1.0%和2.0%MOS組空腸長度和回腸長度顯著長于對照組和0.5%MOS組（P＜0.05）。各處理組空回比均高于對照組，但未達到統(tǒng)計學(xué)差異水平（P＞0.05）。

表2 甘露寡糖對35日齡肉鶉腸長度及空回比的影響

2.2 甘露寡糖對50日齡肉鶉腸長度的影響（見表3）

表3 甘露寡糖對50日齡肉鶉腸長度及空回比的影響

由表3可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對50日齡肉鶉腸長度的影響無明顯規(guī)律，各處理組之間無顯著差異（P＞0.05），有增加空腸長度和回腸長度的趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著水平（P＞0.05）。小腸長度和十二指腸長度隨著日糧中MOS添加水平的增加而呈現(xiàn)先增高后降低然后又升高的趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著水平（P＞0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對50日齡肉鶉空回比有升高的趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著水平（P＞0.05）。

2.3 甘露寡糖對35日齡肉鶉腸道菌群數(shù)量的影響（見表4）

表4 甘露寡糖對35日齡肉鶉回腸中大腸桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的影響（Log cfu/g）

從表4中可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使35日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧中MOS添加量的增加，回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著升高回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高，且2.0%MOS添加組回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量顯著高于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。

2.4 甘露寡糖對50日齡肉鶉腸道菌群數(shù)量的影響（見表5）

表5 甘露寡糖對50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的影響（Log cfu/g）

從表5中可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著升高回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高。

3 討論

空腸、回腸的主要功能是消化和吸收食物?？漳c與回腸相比，空腸是消化吸收食物的主要場所，所以空回比值越大，消化吸收能力越強，生長性能越好。本試驗結(jié)果表明，不同水平MOS對不同日齡肉鶉腸道長度都有一定的影響，1.0%和2.0%MOS可顯著增長35日齡肉鶉各段腸長度。日糧中添加MOS有升高50日齡肉鶉空腸長度和回腸長度的趨勢，50日齡肉鶉小腸長度和十二指腸長度隨著日糧中MOS添加水平的增加而呈現(xiàn)先增高后降低然后又升高的趨勢。日糧添加MOS對35、50日齡肉鶉空回比均有升高的趨勢，但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著水平。MOS多添加于單胃幼齡畜禽日糧中，幼齡動物添加MOS的效果較成年動物明顯（農(nóng)業(yè)大詞典編輯委員會，1998），這與本試驗結(jié)果一致，本試驗日糧中添加MOS對35日齡肉鶉腸各段長度有影響，而對50日齡肉鶉未見顯著影響。這也印證了動物對寡糖具有一定的適應(yīng)性（王鏡巖，2002）。許多試驗結(jié)果表明，補飼MOS可提高禽類育雛期和生長期的生長性能（毛勝勇，2000；杜晉平，2004），由本試驗結(jié)果得出，MOS對禽類生長的促進作用不是通過增加小腸的長度從而增加小腸吸收的總面積來實現(xiàn)促進生長發(fā)育的目的，主要應(yīng)該是通過調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群的結(jié)構(gòu)來起作用的。隨著微生態(tài)學(xué)理論的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)，動物腸道中的正常菌群是動物機體重要的非特異性防御屏障，正常菌群彼此之間保持著一種動態(tài)平衡，與宿主拮抗、免疫、營養(yǎng)、腫瘤、急性和慢性感染等都有非常密切的聯(lián)系（史彬林，2005；石寶明，2000）。因此，動物營養(yǎng)學(xué)家已考慮通過調(diào)節(jié)動物腸道微生物區(qū)系來改善動物機體的健康狀況、增強機體潛在的抵抗疾病的能力。在動物消化道內(nèi)大約有100種以上不同的細菌，根據(jù)對動物的影響，可將之分為有益菌（如雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬等）、有害菌（如大腸桿菌屬、葡萄球菌屬等）及介于兩者之間的兼性細菌（如擬桿菌屬、鏈球菌屬）（戴德淵，2005）。本試驗結(jié)果表明，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使35日齡和50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。表明MOS能調(diào)控動物胃腸道微生態(tài)環(huán)境，MOS進入腸道內(nèi)可作為營養(yǎng)物質(zhì)被動物腸道內(nèi)固定的有益菌消化利用，起到促進有益菌的生長和繁殖，抑制有害菌對腸壁的粘附和定植，維持正常的消化道環(huán)境的作用。MOS能促進雙歧桿菌、干枯乳桿菌、嗜酸乳桿菌、德爾布呂克乳桿菌等有益菌的生長，而對于沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肉毒梭狀芽孢桿菌、生腐梭狀芽孢桿菌等病原菌卻能起到很好的抑制作用（Peter等，1998）。石寶明（2000）報道，在日糧中添加MOS能通過改善腸道內(nèi)環(huán)境，顯著降低大腸桿菌數(shù)，促進有益的乳酸菌的生長。這與本試驗結(jié)果相一致。

4 結(jié)論

1.0%和2.0%MOS可顯著增長35日齡肉鶉各段腸長度，而對50日齡肉鶉各腸段長度沒有影響。

MOS可促進肉鶉腸道有益菌生長，隨日糧MOS添加量的增加，乳酸桿菌數(shù)量升高；MOS可抑制腸道有害菌生長，隨日糧MOS添加量的增加大腸桿菌數(shù)量降低。

日糧中添加1.0%和2.0%MOS效果最好，鑒于添加2.0%MOS成本高的問題，建議在肉鶉日糧中添加1.0%MOS，即可達到添加效果。

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Effect of mannan-oligosaccharides on intestinal length and ileum flora in quail

Zhang Aiwu,Ju Guichun,Xue Jun,Zheng Xue

Two hundred and forty newly hatched 1 day-old quails were randomly divided into 4 groups,each group with four replications,and each replication contained 15 quails.The first group was used as control and fed with basal diet.The rest of the groups were experimental groups,0.5%,1.0%,2.0%of mannan oligosaccharides（MOS）were added to groups 2,3 and 4 respectively for 50 days.Results indicated that addition of 1.0%and 2.0%MOS into the control diet significantly increased small intestinal length and duodenum length（P＜0.05）in 35 d quails.Jejunum length and ileum length of 35 d quails fed 1.0%and 2.0%MOS were significantly longer than those of quails fed 0.0%and 0.5%MOS（P＜0.05）.There were no significant difference in jejunum/ileum ratio of 35 d quails （P＞0.05）.No difference was observed in intestinal length of 50 d quails（P＞0.05）.Addition of MOS into the control diet significantly decreased the colibacillus content（P＜0.05）and increased the lactobacillus content（P＜0.05）of 35 d and 50 d quails.

mannan-oligosaccharide；quail；intestinal length；intestinal flora

S816.7

A

1001-991X（2011）10-0025-04

張愛武，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，博士，副教授，130118，吉林省長春市新城大街2888號。

鞠貴春、鄭雪，單位及通訊地址同第一作者。

薛軍，中國藥材集團公司。

2011-01-24

（編輯：高 雁，snowyan78@163.com）