張 翠，賈法玲

(泰山學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系，山東 泰安 271021)

肺癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤之一，在發(fā)展中國家的發(fā)病率和死亡率呈迅速上升趨勢且臨床治療效果不佳［1］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)中藥在腫瘤的預(yù)防和治療方面有獨(dú)特優(yōu)勢，臨床常用的治療肺癌的有效偏方均為多種中藥聯(lián)合使用，每味中藥的作用機(jī)制尚不明確［2］.泰山四葉參(Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.F.)，根入藥，具有清熱解毒、止咳祛痰、補(bǔ)虛通乳、健身補(bǔ)氣等功效，系泰山四大名藥之一［3］，其對肺癌的作用及機(jī)制國內(nèi)外尚未見報道.烏拉坦(又稱氨基甲酸乙酯，烏來糖)是有機(jī)合成和分析常用試劑，能誘發(fā)多種小鼠、大鼠產(chǎn)生肺癌［4－10］，本文首先對泰山四葉參對烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌的作用及可能的作用機(jī)理展開初步研究，旨在為四葉參預(yù)防和治療肺癌提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

野生四葉參購自泰安市東方泰山天然藥用植物研究所.烏拉坦(Urethan):稱取10g溶于100ml生理鹽水中，4℃保存?zhèn)溆?環(huán)磷酰胺(CTX，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，SOD測試盒(購自南京建成).其他化學(xué)試劑均為分析純.

將干泰山四葉參加入四倍蒸餾水煎煮1h，藥渣同法再煎煮兩次，過濾，將三次煎煮液混合并濃縮至濃度為180g(生藥)/100ml、90g(生藥)/100ml、45g(生藥)/100ml，4℃保存?zhèn)溆?

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

六周齡昆明種雌性小鼠，體重約(20±2)g，購自中國人民解放軍第88醫(yī)院.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 模型建立與分組

將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分為陰性對照組、預(yù)防組、陽性對照組和泰山四葉參多糖低、中、高濃度組.無菌條件下連續(xù)腹腔注射0.1ml10%烏拉坦28天，誘導(dǎo)其產(chǎn)生肺癌(隨機(jī)抽取各組小鼠對肺進(jìn)行觀察，若用肉眼或解剖鏡下觀察到肺部有略突出表面的圓色灰白色小點(diǎn)，即為腫瘤［7－9］)，預(yù)防組同時每天給予0.1ml 90%泰山四葉參.之后停止注射烏拉坦，按腫瘤(陰性)對照組(0.1m l生理鹽水· d－1)、CTX(陽性)對照組(0.1ml 0.2%CTX·d－1)、低濃度組(0.3ml 45%泰山四葉參·d－1)、中濃度組(0.3ml 90%泰山四葉參·d－1)、高濃度組(0.3ml 180%泰山四葉參·d－1)給藥，預(yù)防組繼續(xù)灌胃給予泰山四葉參熬煎劑.

1.3.2 對小鼠生存狀態(tài)及存活時間的影響

按上述方法連續(xù)給藥15d，每天記錄小鼠體重變化及生存狀況，停藥后記錄每組每只小鼠的生存時間，體重增長率和生命延長率按以下公式計算:

體重增長率(%)=［(小鼠平均終體重—小鼠平終始體重)/小鼠平均始體重］×100

生命延長率(%)=［(藥物處理組小鼠平均存活時間—陰性對照組小鼠平均存活時間)/陰性對照組小鼠平均存活時間］×100.

1.3.3 小鼠胸腺、脾、肺、肝臟指數(shù)測定及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)

按分組連續(xù)給藥8d，第9天時眼球取血后將小鼠斷頸處死，稱取胸腺、脾、肺重量，計算其指數(shù).內(nèi)臟指數(shù)計算公式如下:

小鼠連續(xù)灌胃給藥8d后，連續(xù)2天腹腔注射5%蛋白胨溶液0.5ml，兩天后，腹腔注射用生理鹽水配成的5%(V/V)雞紅細(xì)胞懸液，誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞.1h后處死，解開腹壁皮膚，制作巨噬細(xì)胞吞噬涂片［11］，晾干后油鏡下觀察計數(shù).按照下式計算吞噬指數(shù):

吞噬指數(shù)=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)÷100個巨噬細(xì)胞.

1.3.4 血清、肺、肝臟中SOD活性測定實(shí)驗(yàn)

小鼠摘除眼球采血，滴入干燥干凈的采血管中，室溫靜置1～2小時，2000rpm離心10min，取上層得血清.制備肺、肝臟組織勻漿液，按總超氧化物歧化酶(T－SOD)檢測試劑盒說明書測定血漿、肝臟、肺的T－SOD活力.

1.4 數(shù)據(jù)分析

所得數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS12.0進(jìn)行分析，組間差異顯著性采用t檢驗(yàn).

2 結(jié)果與分析

2.1 對小鼠生存狀態(tài)及存活時間的影響

每日稱取小鼠體重并觀察各組生長狀況，停藥后記錄其生存時間，結(jié)果見表1:

表1 泰山四葉參對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠生存時間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時用藥組體重明顯高于腫瘤對照組小鼠體重，中濃度用藥組體重比低濃度用藥組、高濃度用藥組增長快，CTX對照組小鼠體重比用藥組略低.預(yù)防組、高濃度組和CTX對照組延長了烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠的存活時間且差異極顯著.

2.2 小鼠臟器指數(shù)測定及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活性測定

測定小鼠胸腺、肺、脾及吞噬指數(shù)，結(jié)果見表2:

表2 泰山四葉參對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠臟器指數(shù)及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響

由表2可以看出預(yù)防組和中高濃度組可明顯提高烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和吞噬指數(shù)，且差異極顯著，CTX對照組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和吞噬指數(shù)明顯降低;但各組的肺指數(shù)均有所降低.除此之外，實(shí)驗(yàn)中觀察到正常小鼠肺呈淺紅色，顏色鮮艷，而腫瘤對照組肺呈暗紅色，表面有灰白色圓點(diǎn)，用藥組灰色圓點(diǎn)較少，低、中、高三濃度用藥組肺部形態(tài)無顯著差異.

2.3 小鼠血清、肝臟、肺組織勻漿液SOD活性

對各組小鼠血清、肺、肝臟SOD測定，結(jié)果見表3:

表3 泰山四葉參對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠血清、肺、肝SOD活性的影響

根據(jù)表3所測數(shù)據(jù)比較各組小鼠血清、肝臟及肺臟中SOD活性，發(fā)現(xiàn)預(yù)防組、高濃度用藥組和CTX對照組顯著高于腫瘤對照組，其中高濃度組和CTX對照組血清中SOD活性差異極顯著，肝臟和肺臟中差異顯著.

3 討論

肺癌在我國的發(fā)病率正迅速上升，并且由于現(xiàn)有的治療手段療效較差，導(dǎo)致其死亡率占惡性腫瘤的首位，除了在日常生活中建議大家不要抽煙、拒絕二手煙之外，尋找更加安全、有效的藥物仍然是亟需解決的問題.

本實(shí)驗(yàn)通過記錄各組小鼠體重變化、生長狀況和生存時間驗(yàn)證了泰山四葉參對烏拉坦誘導(dǎo)肺癌小鼠有一定預(yù)防和治療作用，其效果是否與泰山四葉參濃度有關(guān)尚未有明確證據(jù).通過檢測小鼠體內(nèi)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活性，觀察小鼠肺、脾、胸腺形態(tài)以及測定小鼠肺、脾、胸腺指數(shù)［11］不難發(fā)現(xiàn)，泰山四葉參有提高機(jī)體免疫力的作用，這與其他研究者的結(jié)論基本一致［12］.泰山四葉參增強(qiáng)了免疫系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞的吞噬能力，顯著提高了胸腺、脾臟指數(shù)，同時降低了肺指數(shù)，說明其在增強(qiáng)小鼠免疫力的同時對肺癌有一定的治療作用，我們認(rèn)為其抑癌機(jī)制可能與此有關(guān).相較于傳統(tǒng)化療藥物對實(shí)驗(yàn)動物的免疫抑制作用(如CTX)，泰山四葉參為代表的中藥在新的抗肺癌藥物研發(fā)中具有較大優(yōu)勢［13］.

研究通過測定各組小鼠血清、肺、肝臟SOD活性，可以看出泰山四葉參水煎劑具有較強(qiáng)的抗氧化能力，可以激活小鼠體內(nèi)SOD活性，通過清除過氧化物損傷達(dá)到預(yù)防、治療肺癌的效果.同時通過及時消除體內(nèi)過氧自由基延緩或消除機(jī)體疲勞［14］，改善小鼠的生存狀態(tài)，有利于改善肺癌治療過程中的毒副作用［15］.

4 結(jié)論

本研究說明泰山四葉參對烏拉坦誘發(fā)的小鼠肺癌有一定預(yù)防、治療作用，并能提高小鼠的生存質(zhì)量，延長其生存時間，主要的機(jī)制可能與其免疫調(diào)節(jié)、抗氧化作用有關(guān).但其具體的分子機(jī)制仍需做進(jìn)一步探討.

泰山四葉參資源豐富，對其進(jìn)行進(jìn)一步研究和開發(fā)有重要的意義:一方面可積累更多的理論知識，另一方面也可以此為基礎(chǔ)利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)從傳統(tǒng)中藥中篩選出新的天然抗肺癌的藥物［16］，對宣傳泰山，使中藥走向世界具有重要意義.

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