劉新橋，袁橋玉，邵群梅

(1中南民族大學(xué)藥學(xué)院，武漢430074;2武漢職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，武漢430074;3武漢生物化學(xué)制藥有限公司，武漢430223)

獨(dú)蒜蘭Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe為蘭科植物獨(dú)蒜蘭的干燥假鱗莖(又名懷抱子、雞心七)，為常用土家藥.土家醫(yī)認(rèn)為其辛、甘、涼，止血，用于肺熱咳血、支氣管炎、鼻出血(碾末吹鼻)、風(fēng)濕疼痛、咳嗽，外用治外傷出血、無名腫毒等［1］.獨(dú)蒜蘭也是中藥山慈菇來源之一，藥典記載其性甘、微辛，涼，具有清熱解毒、化痰散結(jié)的功效，主要用于癰腫疔毒、瘰疬痰核，淋巴結(jié)結(jié)核，蛇蟲咬傷等癥［2］.20世紀(jì)90年代期間對其所含化學(xué)成分有過研究，主要以二苯乙烯類成分為主［3，4］.為尋找其抗腫瘤活性成分，采用MTT法，跟蹤發(fā)現(xiàn)其乙酸乙酯可溶部位具有顯著的抗腫瘤活性.基于此，作者對其化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，本實(shí)驗(yàn)中利用硅膠柱層析、Sephadex LH-20、Pre-HPLC等方法從乙酸乙酯部位中分離得到的了6個(gè)化合物并利用1HNMR、13C-NMR等波譜技術(shù)鑒定了化學(xué)結(jié)構(gòu).

1 儀器、藥材及試劑

VARIAN INOVA 500MHz核磁共振波譜儀;制備液相色譜(日本豐光公司，Pu-1580 intelligent HPLC Pump;RI-1530 intelligent RIdetector);柱色譜硅膠和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠);Sephadex LH-20(Pharmacia);獨(dú)蒜蘭Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe于2005年8月購自河北安國美威中藥材有限公司，經(jīng)天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院高文遠(yuǎn)教授鑒定為獨(dú)蒜蘭Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe的干燥假鱗莖.

2 提取與分離

取獨(dú)蒜蘭的干燥假鱗莖35 kg，粉碎，用體積分?jǐn)?shù)95% 和60%的乙醇分別回流提取2次，3 h/次，合并濾液，減壓回收得乙醇浸膏，加入適量水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，得石油醚萃取物350 g，乙酸乙酯萃取物500 g，正丁醇萃取物1.5 kg.取乙酸乙酯提取物500 g，加硅膠適量拌樣，進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，根據(jù)薄層色譜分析，合并組分相同的流分，得到fr1～10，其中fr2、fr4、fr5、fr7再經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20、ODS-HPLC反復(fù)純化，得到了化合物1(15 mg)、化合物2(10 mg)、化合物3(40 mg)、化合物4(12mg)、化合物5(8 mg)、化合物6(7 mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:淡黃色油狀物，ESI-MS顯示分子離子峰 (negative mode) ［M-H］－m/z363.2，1H-NMR(CDCl3，500 MHz): δ7.17(1H，t，J=8.0 Hz，H-5＇)，6.96(2H，d，J=8.5 Hz，H-2″，H-6″)，6.73(1H，dd，J=8.0 Hz，J=2.5 Hz，H-4＇)，6.69(1H，overlap，H-6＇)，6.68(2H，d，J=8.5 Hz，H-3″，H-5″)，6.61(1H，br.s，H-2＇)，6.34(1H，d，J=2.5 Hz，H-4)，6.30(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，3.91(2H，s，― CH2―)，3.77(3H，s，3 ―OCH3)，3.75(3H，s，3＇― OCH3)，2.78(2H，m，―CH2― CH2―)，2.65(2H，m，― CH2― CH2―);13C-NMR(CDCl3，125 MHz) δ159.6(C-3)，159.0(C-3＇)154.7(C-5)，153.3(C-4″)，143.5(C-1＇)，142.7(C-1)，133.8(C-1″)，129.3(C-5＇)，129.1(C-2″，C-6″)，120.8(C-2)，119.7(C-6＇)，115.0(C-3″，C-5″)，114.1(C-2＇)，111.3(C-4＇)，108.1(C-6)，97.0(C-4)，55.7(3 ― OCH3)，55.2(3'― OCH3)，37.3(― CH2― CH2―)，35.1(― CH2― CH2―)，29.8(― CH2―);以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道的bulbocol數(shù)據(jù)基本一致，確定化合物1為bulbocol，其化學(xué)名稱為3，3'-dimethoxy-5-hydroxy-2-(p-hydroxybenzyl)bibenzyl.

化合物2:淡黃色油狀物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.99(1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，6.61(2H，m，H-6，H-8)，6.38(1H，d，J=2.5 Hz，H-3)，6.29(1H，d，J=2.5 Hz，H-I)，3.80(3H，s，4-OCH3)，2.61(4H，m，H-9，H-10);13C NMR(CD3OD，125 MHz): δ157.7(C-4)，156.1(C-2)，154.6(C-7)，140.4(C-10a)，139.1(C-8a)，128.6(C-5)，124.8(C-5a)，115.4(C-4a)，113.6(C-8)，112.2(C-6)，106.9(C-I)，97.9(C-3)，54.5(4-OCH3)，30.4(C-10)，29.8(C-9).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道一致，確定化合物2為coelonin，其 化 學(xué) 名 稱 為 4-methoxy-9，10-dihydrophenanthrene-2，7-diol.

圖1 化合物1、2結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of compounds 1，2

化合物 3:白色粉末，1H-NMR(C5D5N，500 MHz):δ0.65(3H，s，CH3)，0.92(3H，s，CH3)，0.86(3H，s，CH3)，0.88(3H，s，CH3)，0.98(3H，s，CH3)，0.84(3H，s，CH3)，4.06(1H，m，H-3)，5.35(1H，br s.H-6)，5.05(1H，d，J=7.5 Hz，H-1＇)，3.59-4.57(7H，m，3-H 和糖上 6個(gè) H);l3C-NMR(C5D5N):δ12.3(C-29)，12.5(C-18)，19.4(C-21)，19.6(C-19)，19.8(C-26)，20.3(C-27)，21.6(C-13)，23.8(C-28)，24.9(C-15)，26.8(C-23)，28.9(C-16)，29.8(C-25)，30.6(C-2)，32.4(C-8)，32.5(C-7)，34.6(C-22)，36.7(C-10)，37.3(C-20)，37.8(C-1)，39.7(C-4)，40.3(C-12)，42.8(C-13)，46.4(C-26)，50.7(C-9)，56.6(C-17)，57.2(C-14)，63.2(C-6＇)，72.1(C-4＇)，75.7(C-2＇)，78.5(C-5＇)，78.8(C-3)，78.9(C-3＇)，102.9(C-1＇)，122.2(C-6)，141.3(C-5)，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，確定化合物3為β-胡蘿卜苷.

化合物 4:白色粉末，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.48(1H，dd，J=1.5 Hz，J=8.0 Hz，H-4)，7.43(1H，dd，J=1.5 Hz，J=2.5 Hz，H-2)，7.26(1H，t，J=8 .0 Hz，H-5)，6.99(1H，m，H-6)，l3C-NMR(CD3OD，125 MHz):δ168.8(CO)，157.5(C-3)，132.0(C-1)，129.3(C-5)，120.7(C-6)，119.9(C-4)，116.0(C-2)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，確定化合物4為間羥基苯甲酸.

化合物 5:油狀物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ 9.54(1H，s，CHO)，7.38(1H ，d，J=4.0 Hz，H-3)，6.58(1H ，d，J=4.0 Hz，H-4)，4.61(2H，s CH2OH)，13CNMR(125 MHz CD3OD，125 MHz):δ178.2(CHO)，162.0(C-2)，152.7(C-5)，123.6(C-3)，109.7(C-4)，56.5(CH2OH).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，確定化合物5為5-羥甲基糠醛.

化合物 6:油狀物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.06(1H，t，J=8.0 Hz，H-5)，6.66(3H，m，H-2，4，6)，2.83(2H，t，J=7.5Hz，H-7)，2.59(2H，t，J=7.5Hz，H-8)，13C NMR(125 MHz CD3OD，125 MHz): δ173.9(CO)，157.4(C-3)，142.3(C-1)，129.3(C-5)，119.3(C-6)，114.9(C-2)，113.0(C-4)，35.4(C-8)，30.7(C-7)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，確定化合物6為3-羥基苯丙酸.

4 結(jié)語

通過對獨(dú)蒜蘭的系統(tǒng)分離，得到了6個(gè)化合物，分別鑒定為bulbocol(1)、coelonin(2)、β-胡蘿卜苷(3)、間羥基苯甲酸 (4)、5-羥甲基糠醛 (5)、3-羥基苯丙酸 (6)，其中化合物3、4、5、6為首次從該植物中分離得到，該類化合物的發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究該藥物奠定了一定的基礎(chǔ).

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