段發(fā)蘭 李亞新 胡筱梅 李 毅

活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清及關(guān)節(jié)液白細(xì)胞介素-17水平變化及與有關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系

段發(fā)蘭1李亞新2胡筱梅1李 毅1

本文2010-08-30收到,2010-10-22修回,2010-11-11接受

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,多基因和環(huán)境因素共同誘發(fā)病理性自身免疫反應(yīng),導(dǎo)致RA表現(xiàn)為以破壞性多關(guān)節(jié)炎和不同的關(guān)節(jié)外炎癥病變?yōu)樘卣?研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-17(IL-17)是一種重要的前炎癥細(xì)胞因子,在RA的發(fā)病和骨侵蝕方面發(fā)揮著重要作用[1]。本文應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測RA患者外周血和關(guān)節(jié)液中IL-17水平,進(jìn)一步分析其與RA實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、類風(fēng)濕因子(RF)、抗環(huán)瓜氨酸抗體(抗CCP抗體)的關(guān)系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般臨床資料

本文患者均來自在東風(fēng)汽車公司總醫(yī)院就診的活動(dòng)期 RA患者,共 50例,其中男 10例,女40例,年齡20～72歲,病程1～35年。所有病例皆符合1987年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ACR)修訂的RA診斷分類標(biāo)準(zhǔn)[2],且病情處于活動(dòng)期。RA病人活動(dòng)期判別標(biāo)準(zhǔn)[3]:(1)關(guān)節(jié)腫脹≥6個(gè);(2)關(guān)節(jié)壓痛≥6個(gè);(3)晨僵≥45分鐘;(4)血沉(ESR)≥30mm/1h;(5)hsCRP大于正常值上限的1.5倍。RA病人存在(1)+(2)同時(shí)伴有(3)、(4)、(5)三項(xiàng)的任何兩項(xiàng)被認(rèn)為處于活動(dòng)期;不同時(shí)滿足(1)+(2)或(3)、(4)、(5)僅一項(xiàng),被認(rèn)為處于靜止期。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本采集與分組:收集50例血清標(biāo)本(血清組)其中15例關(guān)節(jié)液標(biāo)本(關(guān)節(jié)液組),30例正常健康人外周血作為對照組。抽取各組靜脈血3m l自行凝固,肝素抗凝的關(guān)節(jié)滑液經(jīng)透明質(zhì)酸酶(10U/m l)37℃處理15分鐘所有標(biāo)本,1 000r/min離心10 m in,收集上清。分裝后-80℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 指標(biāo)測定:RF采用免疫透射比濁法,hs-CRP用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法,采用美國生產(chǎn)的ABBOTT AEROET全自動(dòng)生化分析儀檢測,試劑來自上海申能—德賽診斷系統(tǒng)有限公司。ESR使用天津市亞坤電子科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的EHK紅細(xì)胞沉降壓積儀測定。IL-17采用ELISA,試劑盒由美國RrapidBio Lab公司生產(chǎn);抗CCP抗體采用ELISA,試劑盒由上海富純中南生物技術(shù)有限公司提供,按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。兩因素之間的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 活動(dòng)期RA患者外周血清和關(guān)節(jié)液IL-17水平變化

IL-17水平分析顯示血清組明顯高于對照組,關(guān)節(jié)液組明顯高于血清組,結(jié)果見表1。

表1 各組IL-17及有關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測水平比較(±s)

表1 各組IL-17及有關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測水平比較(±s)

注:與對照組比較,1)P＜0.01;與血清組比較,2)P＜0.01

組 別 n 年齡 性別(男/女) IL-17(pg/m l)對照組 30 43.56±7.35 10/20 67.36±7.56血清組 50 50.99±15.42 13/37 113.23±25.331)關(guān)節(jié)液組 15 49.72±11.09 5/10 142.36±45.991)2)

2.2 活動(dòng)期RA患者血清及關(guān)節(jié)液IL-17水平與有關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn) RA患者血清IL-17水平與其血清中炎癥急性期蛋白(hs-CRP、ESR)及自身抗體(RF、CCP)均呈正相關(guān),其關(guān)節(jié)液中IL-17與hs-CRP、ESR水平呈正相關(guān),與 CCP、RF無明顯相關(guān)性。見表2。

表2 活動(dòng)期RA患者血清及關(guān)節(jié)液IL-17水平與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

RA病理特征主要是炎癥細(xì)胞的浸潤和滑膜組織的增生、肥厚,以及骨損傷。在病變滑膜下層可以發(fā)現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞呈彌漫性分布或聚集,如同淋巴濾泡;其中大部分為CD4+T細(xì)胞。IL-17主要由這些活化的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生,并能誘導(dǎo)活化T細(xì)胞,促進(jìn)滑膜細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-18、IL-6 和 IL-8 等;IL-17還可以引起中性粒細(xì)胞蛋白酶和髓過氧化物酶等蛋白水解酶活性增高,通過誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞表達(dá)金屬蛋白酶,使蛋白多糖分子斷裂,破壞軟骨組織,刺激破骨細(xì)胞的生成,在骨質(zhì)破壞反應(yīng)中對破骨細(xì)胞的活化和骨質(zhì)吸收發(fā)揮重要作用。本文檢測了活動(dòng)期RA患者血清及部分患者的關(guān)節(jié)液中IL-17水平,結(jié)果顯示RA患者組較正常對照人群血清IL-17濃度顯著增高;關(guān)節(jié)液中更高(P＜0.01)。這與國內(nèi)外的研究一致[4、5]。動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)IL-17缺陷小鼠或用IL-17受體拮抗劑處理RA小鼠模型可減輕關(guān)節(jié)癥狀[6],提示IL-17在RA的致病機(jī)制中起作用。

CCP、hsCRP、ESR及 RF是RA重要的診斷和預(yù)后判斷指標(biāo),被廣泛用于RA病情活動(dòng)性評估、關(guān)節(jié)骨侵蝕破壞等臨床及研究工作中。本文對活動(dòng)期RA患者外周血IL-17與這些指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析。結(jié)果表明RA患者外周血IL-17與hs-CRP及ESR水平呈明顯正相關(guān)(P＜0.01),提示疾病活動(dòng)度越高的患者IL-17水平升高越明顯,可能IL-17作為反映RA病人炎癥活動(dòng)的新指標(biāo)之一。RF是RA患者血清中存在的對變性IgG產(chǎn)生的自身抗體,可分為 IgM、IgA、IgG型,本文檢測的是IgM型,其水平變化與IL-17水平呈正相關(guān)。本檢測分析還發(fā)現(xiàn),活動(dòng)期RA患者外周血IL-17與抗CCP抗體水平亦呈正相關(guān),K root等[7]通過6年的影像學(xué)隨診觀察發(fā)現(xiàn)抗CCP抗體陽性的患者更容易出現(xiàn)嚴(yán)重的關(guān)節(jié)破壞,Bas等[8]也報(bào)道抗CCP抗體與RA骨侵蝕具有相關(guān)性,因此認(rèn)為,IL-17水平可能與RA進(jìn)展相關(guān)。但也有不一致的報(bào)道,如陳海燕等[9]報(bào)道外周血血清IL-17與RA臨床指標(biāo)ESR、RF、CRP無相關(guān)性。本文得出相反結(jié)論的原因可能與實(shí)驗(yàn)所選擇的都是活動(dòng)期RA患者,并且CCP陽性率占94%有關(guān)。但細(xì)胞因子與自身抗體之間關(guān)系的機(jī)制目前尚不明確。筆者進(jìn)一步將關(guān)節(jié)液IL-17水平與 ESR、RF、hs-CRP、CCP 作相關(guān)分析,結(jié)果提示關(guān)節(jié)液IL-17水平與血液ESR和hs-CRP呈顯著正相關(guān),而與RF、CCP無明顯相關(guān)性。但這一初步結(jié)果的樣本太小,需在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,收集更多標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述,Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17在RA外周血及關(guān)節(jié)局部呈過度表達(dá),可能在RA的免疫發(fā)病機(jī)制中起重要作用。同時(shí),也有可能作為臨床判斷RA活動(dòng)性的指標(biāo)之一,成為RA生物治療的新靶向。

本文第一作者簡介:

段發(fā)蘭(1972～),女,漢族,主管技師

1 M clnncs IB,Licw FY.Cytokine netw ork s-tow ards new therapies for rheumatoid arthritis.Nat C lin Praet Rheumatoid A rth ritis,2005,1(1):31～39.

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3 蔣 明,David YU,林孝義等主編.中華風(fēng)濕病學(xué).北京:華夏出版社,2004:760～828.

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9 陳海燕,韓 捷,范 璐,等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者 Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及臨床意義.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2009,30(4):61～63.

活動(dòng)期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清及關(guān)節(jié)液白細(xì)胞介素-17水平變化及與有關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系

段發(fā)蘭,李亞新,胡筱梅,等/東風(fēng)汽車公司總醫(yī)院,湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院檢驗(yàn)科,十堰442008

目的:分析類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血和關(guān)節(jié)液中 T輔助細(xì)胞 17(Thl7)相關(guān)細(xì)胞因子白介素-17(IL-17)水平,探討其在RA中的變化特點(diǎn)及與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。方法:用ELISA檢測50例活動(dòng)期 RA患者血清和其中15例關(guān)節(jié)液以及30例正常人血清IL-17水平。同時(shí)測定RA患者血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)、類風(fēng)濕因子(RF)、抗環(huán)瓜氨酸抗體(抗CCP抗體)水平。結(jié)果:RA患者外周血血清IL-17水平明顯高于健康對照組(113.23±25.33pg/ml VS 67.36±7.56pg/m l,P＜0.01),而其關(guān)節(jié)液IL-17水平明顯高于血清水平(142.36±45.99pg/ml VS 113.23±25.33pg/m l,P＜0.01)。血清 IL-17水平與 hs-CRP、ESR、RF、抗CCP抗體均呈正相關(guān)。關(guān)節(jié)液IL-17水平與hs-CRP、ESR均呈顯著正相關(guān),與RF、抗CCP抗體無相關(guān)。結(jié)論:IL-17可能通過促炎作用,參與RA的免疫致病機(jī)制。

The Clinical Significance of Serum and Synovia l Fluid Interleukin-17 in Rheumatoid Arthritis

Duan Falan,Li Yaxin,H u Xiaomei,et al/Department of Clinical Laboratory,General Hospita l of Dongfeng Automobile Company,Shiyan 442008

Rheumatoid arthritis;IL-17;Relation

R446.62

A

1005-1740(2011)01-0042-03

東風(fēng)汽車公司總醫(yī)院,湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院,郵政編碼 十堰442008;1檢驗(yàn)科;2干部科

Objective:To analy sis the levelof T helper cell17(Th17)cytokines interleukin-17(IL-17)in the peripheral blood and synovial fluid of rheum atoid arth ritis(RA)patien ts,and investigate the correlation of other characteristics and labo ratory indexes.Method:ELISA w asused to detect the serum IL-17 levels in 50 active RA patients,15 cases synovial fluid of RA patients and 30 normal cases.The serum high sensitivity C-reactivep rotein(hs-CRP),ery th rocyte sedim entation rate(ESR),rheumatoid factor(RF)and an ti-cyc lic citrullinated(CCP)antibodiesw ere also measu red.Results:The serum IL-17 levels in RA patients w ere significantly higher than the controlg roup(113.23±25.33pg/m l,67.36±7.56pg/m l,P＜0.01).The IL-17 level in synovial fluid of RA patients w ere significan tly higher than in serum(142.36±45.99pg/m l,113.23±25.33pg/m l,P＜0.01).IL-17 levels in serum and hs-CRP,ESR,RF,CCPw ere positively correlated.IL-17 levels in synovial fluid and hs-CRP,ESR showed a significant positive correlation.Conclusion:The over-expression of IL-17 in active RA blood and joint local suggest that IL-17may play a proinflammatory role through participation in the pathogenesis of RA.

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 白細(xì)胞介素-17 關(guān)系